一种pH响应型靶向递送虫草素的茶多酚纳米缓释制剂及其制备方法

本发明属于虫草素纳米制剂，主要涉及一种ph响应型靶向递送虫草素的茶多酚纳米缓释制剂及其制备。

背景技术：

1、中医认为，虫草入肺肾二经，可补肺阴肾阳，虫草素正是其中主要有效成分。虫草素又称虫草菌素，属嘌呤类生物碱，不仅具有抗菌、消炎、抗病毒、抗肿瘤等多种药理活性，还对肺部疾病(如肺癌，肺纤维化等)具有显著疗效。虫草素在体内大部分遵循嘌呤核苷酸代谢途径，极易在腺苷脱氨酶的代谢下脱氨基而成为无生物活性的代谢产物3’-脱氧次黄嘌呤核苷，这种代谢机制限制了其在临床上的进一步应用及其功能价值的开发。并且当其与腺苷脱氨酶抑制剂联合应用时易出现严重的不良反应，导致虫草素在临床上单独应用受限，故迫切需要找到能够提高虫草素生物利用度的策略。

2、茶多酚是茶叶中具有生物活性的重要成分之一，是一类天然多酚羟基混合物，具有抗炎、抗氧化、抗癌、抗肺纤维化等多种药理作用，且具有资源丰富、价格低、无毒副作用等健康益处，在临床研究中具有极大的开发和医药用价值。锌是哺乳动物必需的微量营养元素，其作为金属酶的辅酶在机体生长发育、代谢、免疫等方面发挥着重要作用。随着纳米技术的快速发展，纳米粒递送药物在疾病治疗中的应用愈发广泛。纳米粒递送虫草素可明显改善其稳定性，是克服上述难题的关键手段之一。研究表明，将茶多酚与zn通过氧化偶联聚合法制备的茶多酚纳米粒载体具有更高的抗氧化能力、生物利用度及ph响应缓释效应。基于上述背景，虫草素纳米制剂的制备具有一定的研究意义及临床转化潜力。

3、中国专利cn116172974a公开的一种虫草素纳米粒是用edc和nhs活化聚乙二醇和聚乙二醇-生物素的羧基得到的中间体分别与虫草素氨基共价结合，得到虫草素-聚乙二醇和虫草素-聚乙二醇-生物素，通过自组装得到虫草素纳米粒。此法虽然能够避免纳米粒聚集和药物泄漏，提高虫草素的生物利用度和稳定性，但其制备过程复杂，不利于纳米粒的工业化生产和广泛临床应用。国外文章发表的一种虫草素包裹的脂质体(in silico and invitro design of cordycepin encapsulation in liposomes for colon cancertreatment，rscadv.,2021,11,8475)，主要采用mhf法将胆固醇和蛋黄pc混合后与二十二烷基二甲基铵表面活性剂溶解于乙醇中制备的脂质体的脂质相，通过湍流微混合技术与虫草素的水溶液混合制备所得。此法具有很好的生物相容性、生物降解性以及高负载能力，能够很好的控制虫草素的释放程度，但其制备工艺昂贵，经济成本较高，会给购买者造成不必要的经济负担。此外，上述方法虽然均具备抗腺苷脱氨酶降解的效果，能够延长虫草素药效时间、提高生物利用度，但其不具备ph触发释放等作用。

技术实现思路

1、本发明是针对虫草素在体内易被腺苷脱氨酶作用失活，无法靶向控制释放的不足，提供了一种ph响应型靶向递送虫草素的茶多酚纳米缓释制剂，其制剂具有粒径小，稳性定高、包封率大、ph触发靶向缓慢释放和生物安全性及降解性好等特点。

2、为了解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：一种ph响应型靶向递送虫草素的茶多酚纳米缓释制剂，包括茶多酚纳米粒载体以及负载在茶多酚纳米粒上的虫草素。

3、进一步地，其制备方法包括以下步骤：

4、(1)自组装反应i

5、将0.8～1.2克茶多酚和0.08～0.12克zn(ac)2.2h2o粉末分别溶解于15.0～20.0毫升去离子水中，得到茶多酚储存液和醋酸锌去离子水储存液。在搅拌条件下，将醋酸锌去离子水储存液缓慢滴加到茶多酚储存液中，二者在室温下发生氧化偶联反应得到茶多酚纳米粒粗液。经离心处理后用超纯水洗涤三次，最终获得茶多酚纳米粒载体。

6、(2)自组装反应ii

7、将4.0～8.0毫克虫草素和茶多酚纳米粒载体混合在8.0～12.0毫升hepes缓冲液中，经自组装法初步得到茶多酚纳米载体装载的虫草素的纳米混悬液。

8、(3)稳定反应

9、将稳定剂原料缓慢滴加到自组装反应ii的混悬液中，搅拌一段时间后经高速离心法去上清使其从混合溶液中分离出来，再用hepes缓冲液洗涤1～2次，可得稳定剂覆盖的负载虫草素的茶多酚纳米制剂。

10、进一步地，步骤(1)中，自组装反应i为氧化偶联反应，反应条件为800～1000转每分钟的转速进行磁力搅拌1.5～2.5小时，在此条件下，可使锌离子完全与茶多酚螯合配位结合。

11、进一步地，步骤(2)中，自组装反应ii在磁力搅拌速度800～1000转每分钟条件下进行，反应时间为1.0～2.0小时。在此条件下，茶多酚纳米粒载体和负载虫草素的茶多酚纳米制剂能够通过利用茶多酚与金属锌离子的鳌合能力键及π-π堆积作用经自组装法将虫草素和茶多酚充分载入载体中，极大地提高虫草素和茶多酚的稳定性和生物利用度。

12、进一步地，步骤(3)中，稳定剂原料为4.0～8.0毫升右旋糖酐-70的hepes缓冲液，同时使用具有稳定作用的右旋糖酐-70和hepes缓冲液，能够发挥双重稳定作用，使制得的负载虫草素的茶多酚纳米制剂稳定性较高，缓释效果较缓慢，且hepes缓冲液还为其制剂制备体系的ph控制缓冲溶液和球形纳米形状诱导剂。

13、进一步地，步骤(2)中的纳米混悬液和步骤(3)中稳定剂原料的溶剂均为20mmhepes缓冲液，ph调节为6.9～7.1，能够较长时间控制恒定的ph范围，制得分散性和稳定性较好的纳米制剂。

14、进一步地，步骤(3)中，搅拌处理采用转速为900～1100转每分钟的磁力搅拌器，搅拌时间为1.5～2.5小时。采用这个条件，可获得右旋糖酐-70覆盖且稳定性较高的负载虫草素的茶多酚纳米制剂。

15、本发明提供上述ph响应型靶向递送虫草素的茶多酚纳米缓释制剂在制备抗肿瘤或肺部疾病药物中的应用。

16、基于上述应用，本发明还提供一种抗肿瘤或肺部疾病药物，包括负载虫草素的茶多酚纳米制剂和辅料。辅料可以采用本领域常用的添加剂。

17、本发明ph响应型靶向递送虫草素的茶多酚纳米缓释制剂，形状呈类球形，粒径为155.19～168.32纳米，包封率为73.19～76.59％，电动势为-29.87～-35.16毫伏，在实施本发明的过程中，发明人发现在此粒径、包封率和电动势下，负载虫草素的茶多酚纳米制剂可作为任何剂型治疗疾病发挥提高疗效和生物利用度的目的。

18、本发明的有益效果体现在：

19、本发明利用茶多酚的金属鳌合能力，将其与锌离子进行配位形成纳米载体，再通过氢键和π-π堆积作用经自组装法将虫草素载入载体中，并以ph触发病变组织中酸性介质释放药物，最后加入右旋糖酐-70形成一种ph响应型靶向递送虫草素的茶多酚纳米缓释制剂，其优点为：

20、1.制备条件温和安全，不使用酸碱及有机溶剂，对包封药物虫草素损耗小，且无毒副产物产生，同时制备过程操作简单，绿色环保，制备的纳米颗粒粒径大小均匀且尺寸可控，有利于纳米载体的工业化生产和广泛临床应用。

21、2.形状呈类球形，表面光滑，粒径分散均匀且尺寸小于200纳米，不易被吞噬细胞吞噬而清除，且易粘附于肺组织，能够很好的在肺部病变组织发挥药效。且该制剂电动势均为大于等于30毫伏，具有较好的稳定性。

22、3.制备方法中，同时用具有稳定作用的右旋糖酐-70和hepes缓冲液，能够发挥双重稳定作用，大大提高负载虫草素的茶多酚纳米制剂的稳定性，使纳米制剂发挥更好疗效，且将稳定反应最后进行，利用稳定剂右旋糖酐-70形成一层负载虫草素的茶多酚纳米制剂的屏障，避免其在递送过程被降解，提高制剂的稳定性，延长药效作用时间。

23、4.茶多酚纳米粒载体制备原材料中，载体材料茶多酚来源广泛，资源丰富，但存在生产过剩、实际利用率不高等现象。而本发明是利用茶叶中的主要活性成分茶多酚为原料直接制备茶多酚纳米粒载体，不仅可以降低生产成本，还能充分利用茶叶资源，推动茶叶经济的发展。

24、5.在0.25～4.0mg/ml治疗疾病的剂量下，对正常肺部细胞的生存率均高于80％，具有较高的安全有效性。另外，纳米混悬液和稳定剂原料的溶剂均为hepes缓冲液，对细胞无毒性作用，能够较长时间控制恒定的ph范围，制得分散性和稳定性较好的纳米制剂。

25、6.茶多酚与锌离子氧化偶联制备的纳米粒载体具有更高的抗氧化能力、生物利用度，此外，还具有ph响应控释特性，可以响应于病变部位的弱酸性微环境，在正常生理条件下稳定存在释放较慢，而在弱酸性条件下，ph敏感性显著，易降解，导致释放量增加并被持续控制释放。由于大多数肺纤维化及癌症肿瘤组织的微环境呈酸性，故本发明制得的负载虫草素的茶多酚纳米制剂能够在疾病部位因弱酸ph响应而共同缓慢释放茶多酚和虫草素，发挥ph靶向病变部位，降低药物在周围组织的蓄积程度，增加药物的有效量，减少不良反应，提高生物利用度，从而达到高效治疗疾病的目的。

26、7.负载虫草素的茶多酚纳米制剂的特征主要集中在裸露的药物虫草素和茶多酚自身缺点，导致它们不管是单用还是机械的混合联用的治疗疾病效果均是差强人意，且将它们裸露药物分别形成口服制剂还具有口服首过效应和肝肠循环作用，导致极大程度上降低它们发挥治疗疾病的作用，且本发明有益于共载茶多酚与虫草素的纳米递药制剂阻止虫草素和茶多酚降解而增加它们的稳定性进而增强其生物利用度。同时，因研究发现茶多酚和虫草素均具有治疗肺部疾病和肿瘤作用，故本发明通过共载茶多酚与虫草素和在ph响应下共同释放两药达到协同且增强治疗肿瘤和肺部疾病的目的。