使用人类间充质干细胞以实现细胞免疫及体液免疫的方法与流程

本发明关于施用治疗有效量的分离的同种异体间充质干细胞群以在患有非缺血性扩张型心肌病的受试者中实现细胞免疫和体液免疫的方法。本发明还关于施用治疗有效量的分离的同种异体间充质干细胞群以在患有非缺血性扩张型心肌病的受试者中实现细胞免疫和体液免疫的方法。

背景技术：

1、老化衰弱(aging frailty)和炎性衰老(inflammaging)

2、老化衰弱对个体的整体健康及幸福造成非常令人担忧的问题，且其特征为多系统生理失调的综合征。老化衰弱是一种特征为虚弱、低身体活动、缓慢运动机能、疲惫、及非自愿性体重减轻的老年综合征。参见yao,x.etal.,clinics in geriatric medicine 27(1)：79-87(2011)。此外，有许多显示老化衰弱与炎症之间有直接相关性的研究。参见hubbard,r.e.et al.,biogerontology 11(5)：635-641(2010)。

3、免疫衰老的特征在于称为炎性衰老的低度、慢性全身性发炎状态。参见franceshi,c.et al.,annals of the new york academy of sciences 908：244-254(2000)。在衰老及老化衰弱中发现的此种增强的发炎状态或慢性炎症导致免疫失调及先天性和适应性免疫的复杂重塑。在免疫衰老中，t细胞及b细胞库(repertoire)是偏态的(skewed)，导致重新表达cd45ra的cd8+t效应性记忆细胞(temra)及cd19+晚期/衰竭性(exhausted)记忆b细胞的增加，以及cd8+初始t细胞和转换的记忆b细胞(cd27+)的减少。参见blomberg,b.b.et al.,immunologic research 57(1-3)：354-360(2013)；colonna-romano,g.et al.,mechanisms of ageing and development130(10)：681-690(2009)；及koch s.et al.,immunity&ageing：5:6(2008)。此t细胞和b细胞库的偏移导致难治性或较低效率的免疫状态。众所周知与年龄相关的全身性发炎(tnf-α、il-6、il-8、infγ和crp)的增加导致b细胞功能受损。

4、因为炎性衰老在免疫改变与老年人中常见的若干疾病和病症(诸如老化衰弱)之间提供关联性，所以炎性衰老已受到相当大的关注。观察到诸如细胞因子和急性期蛋白的循环发炎介质是随着老化而增加的低度炎症标志物。这些前炎性细胞因子(例如tnf-α、il-6)损害b细胞制造抗外因性抗原和疫苗的保护性抗体的能力。此受损的b细胞反应由减少的类型转换重组(csr，class switch recombination)测量，该类型转换重组(csr)是免疫球蛋白从同型igm转换成第二同型(igg、iga、或ige)的能力。免疫球蛋白同型转换对于适当的免疫反应是至关重要的，因为效用功能在各同型中不同。csr及体细胞超突变(shm)中的关键参与者是酶，活化诱导的胞苷脱胺酶(aid)，由aicda基因编码。csr和shm中，aid的基本功能是在免疫球蛋白的开关和可变区中通过将胞嘧啶转变成尿嘧啶而引发dna断裂。由tcfe2a(e2a)基因编码的e47是属于类别i碱性螺旋环螺旋(bhlh)蛋白质的转录因子，亦称为e蛋白。在不表达e47的情况下，b细胞特异性转录因子ebf1(早期b细胞因子)及pax-5(成对盒蛋白)不表达。e47及pax-5两者在b细胞谱系早期发育和成熟b细胞功能中都是关键转录因子。参见hagman j.et al.,immunity 27(1)：8-10(2007)；horcher m.et al.,immunity 14(6)：779-790(2001)；riley r.l.et al.,seminars inimmunology 17(5)：330-336(2005)。pax-5基因编码在b细胞分化的所有阶段表达、但在终末分化的b细胞中不表达的b细胞谱系特异性激活蛋白(bsap)。pax-5通过抑制b谱系不当基因及活化b细胞特异性基因而控制b细胞定向(commitment)，使得pax-5成为b细胞的守门人，并且在b淋巴谱系中从定向的祖b细胞至成熟的b细胞阶段专有表达。b细胞特异性转录因子pax-5不仅在早期b细胞发育及b细胞谱系定向中非常重要，且其还涉及csr。

5、在人类中已显示制造的tnf-α的量：(1)取决于系统发炎的量及(2)损害相同的b细胞被丝裂原或抗原刺激的能力。参见frasca,d.et al.,journal of immunology 188(1)：279-286(2012)。因此，患有老化衰弱的受试者中的免疫反应因若干原因而受损。

6、非缺血性扩张型心肌病(nidcm)

7、非缺血性扩张型心肌病(nidcm)是目前无法治愈的进行性疾病，通常导致心脏移植。参见felker,g.m.et al.,the new england journal of medicine 342：1077-84(2000)及kirklin,j.k.et al.,j.heart lung transplant.35：407-412(2016)。nidcm是一种以主要成分的免疫失调作为潜在病因的疾病。参见efthimiadis,i.et al.,hippokratia15：335-342(2011)及meng,x.et al.,nature reviews cardiology 13：167-79(2016)。针对心脏病基于细胞的治疗是一种评估中有前景的新治疗策略，而主要挑战及机会在于发展同种异体的治疗。参见patel,a.n.et al.,lancet 387：2412-21(2016)；assmus,b.et al.,the new england journal of medicine 355：1222-32(2006)；hare,j.m.et al.,j.am.coll.cardiol.54：2277-86(2009)；heldman,a.w.et al.,jama 311：62-73(2014)；perin,e.c.et al.,jama 307：1717-26(2012)；golpanian,s.et al.,physiol.rev.96：1127-68(2016)；及hare,j.m.et al.,jama 308：2369-79(2012)。

8、间充质干细胞

9、间充质干细胞是能够迁移至损伤部位的多潜能细胞，且由于非测出地表达主要组织相容性复合体类别ii(mhc-ii)分子、以及低水平地表达mhc-i分子而被免疫豁免。参见leblanc,k.et al.,lancet 371(9624)：1579-1586(2008)和klyushnenkova e.et al.,j.biomed.sci.12(1)：47-57(2005)。就此而言，同种异体间充质干细胞对治疗及再生医学而言有很大的希望，且已一再显示在针对多种疾病过程的临床试验中具有高安全性及疗效分布。参见hare,j.m.et al.,journal of the american college of cardiology 54(24)：2277-2286(2009)；hare,j.m.et al.,tex.heart inst.j.36(2)：145-147(2009)；和lalu,m.m.et al.,plos one 7(10)：e47559(2012)。它们还已显示在移植到患者体内后不发生恶性转变。参见togel f.et al.,american journal of physiology renalphysiology 289(1)：f31-f42(2005)。使用间充质干细胞的治疗已显示改善严重的移植物抗宿主疾病、防止缺血性急性肾衰竭、有助于糖尿病中胰岛和肾小球的修复、逆转暴发性肝衰竭、使受损的肺组织再生、减弱败血症、及逆向重建和改善心肌梗塞后的心脏功能。参见le blanc k.et al.,lancet 371(9624)：1579-1586(2008)；hare,j.m.et al.,journal ofthe american college of cardiology 54(24)：2277-2286(2009)；togel f.et al.,american journal of physiology renal physiology289(1)：f31-f42(2005)；leer.h.et al.,pnas103(46)：17438-17442(2006)；parekkadan,b.et al.,plos one 2(9)：e941(2007)；ishizawa k.et al.,febs letters 556(1-3)：249-252(2004)；nemeth k.etal.,nature medicine 15(1)：42-49(2009)；iso y.et al.,biochem.biophys.res.comm.354(3)：700-706(2007)；schuleri k.h.et al.,eur.hearthj.30(22)：2722-2732(2009)；及heldman a.w.et al.,jama 311(1)：62-73(2014)。此外，间充质干细胞亦还是用于组织工程的多种细胞类型的潜在来源。参见gong z.et al.,methods in mol.bio.698：279-294(2011)；price,a.p.et al.,tissue engineering parta16(8)：2581-2591(2010)；及togel f.et al.,organogenesis 7(2)：96-100(2011)。

10、间充质干细胞具有免疫调节能力。它们控制发炎以及淋巴细胞和骨髓衍生免疫细胞的细胞因子的产生而没有免疫抑制毒性的证据，并且是低免疫原性的。参见bernardom.e.et al.,cell stem cell 13(4)：392-402(2013)。

11、间充质干细胞还具有不仅分化成中胚层来源细胞且分化成内胚层和外胚层来源细胞的能力。参见le blanc k.et al.,exp.hematol.31(10)：890-896(2003)。举例而言，在体外，在气道生长介质中培养的间充质干细胞分化以表现肺特异性上皮标志物，例如表面活性物质蛋白c、clara细胞分泌蛋白、及甲状腺转录因子1。参见jiang y.et al.,nature418(6893)：41-49(2002)及kotton d.n.et al.,development 128(24)：5181-5188(2001)。

12、体内研究已显示当人类间充质干细胞移植至胎羊中时，该人类间充质干细胞经历位置特异性分化成各种细胞类型，包括肌细胞及心肌细胞。参见airey j.a.et al.,circulation 109(11)：1401-1407(2004)。在非免疫抑制的免疫活性宿主中，这些间充质干细胞在移植后在多个组织中可持续长达13个月。其他使用啮齿动物、狗、山羊和狒狒的体内研究类似地证明人类间充质干细胞异种移植不引起受体中淋巴细胞增生或全身性同种抗体产生。参见klyushnenkova e.et al.,j.biomed.sci.12(1)：47-57(2005)；aggarwals.et al.,blood 105(4)：1815-22(2005)；augello a.et al.,arthritis and rheumatism56(4)：1175-86(2007)；bartholomew a.et al.,exp hematol.30(1)：42-48.(2002)；dokicj.et al.,european journal of immunology 43(7)：1862-72(2013)；gerdoni e.et al.,annals of neurology 61(3)：219-227(2007)；lee s.h.et al.,respiratory research11：16(2010)；urban v.s.et al.,stem cells 26(1)：244-253(2008)；yang h.et al.,plos one 8(7)：e69129(2013)；zappia e.et al.,blood 106(5)：1755-1761(2005)；bonfield t.l.et al.,american journal of physiology lung cellular andmolecular physiology 299(6)：l760-70(2010)；glenn j.d.et al.,world journal ofstem cells.6(5)：526-39(2014)；guo k.etal.,frontiers in cell and developmentalbiology 2：8(2014)；puissant b.et al.,british journal of haematology 129(1)：118-129(2005)；及sun l.et al.,stem cells 27(6)：1421-32(2009)。总体而言，这些同种异体安全性及疗效的重复发现巩固使用间充质干细胞作为同种移植用于成功组织再生的想法。

13、然而，尽管作为安全的治疗剂，但间充质干细胞在文献中被报导对抗体产生及b细胞的增殖和成熟施加抑制效果。参见uccelli,a.et al.,trends in immunology 28(5)：219-226(2007)。间充质干细胞还被报导抑制抗原呈现细胞的产生及功能。参见hoogduijnm.j.et al.,int.immunopharmacology10(12)：1496-1500(2010)。最后，间充质干细胞被报导抑制cd4+和cd8+t细胞增殖。参见ghannam s.et al.,stem cell res.&ther.1：2(2010)。最后，一些临床前数据显示：与施用自体间充质干细胞相比，施用同种异体间充质干细胞有较高的免疫清除风险。参见例如huang,x.p.et al.,circulation 122：2419-29(2010)。

技术实现思路

1、出乎意料地，尽管报导指出间充质干细胞对免疫系统方面具有抑制效果，但本发明人发现一种治疗受试者中非缺血性扩张型心肌病的方法，包括对有需要的受试者施用治疗有效量的分离的同种异体人类间充质干细胞群。本发明人还发现一种治疗受试者中老化衰弱综合征的方法，包括对有需要的受试者施用治疗有效量的分离的同种异体人类间充质干细胞群。本发明人识别对非缺血性扩张型心肌病及老化衰弱具特异性的几个生物标志物，包含但不限于血清中的衰竭性b细胞(cd19+、cd27-、igd-)的水平、转换的记忆b细胞(cd19+、cd27高、igd-)的水平、表达细胞内tnf-α的b细胞的水平、早期活化t细胞(cd3+、cd69+)的水平、慢性活化t细胞(cd3+、cd25+)的水平、temra细胞(cd45ra+、ccr7-)的水、cd4+:cd8+t细胞比率、和tnf-α浓度。

2、本发明的一个方面关于一种治疗受试者中非缺血性扩张型心肌病的方法，包括向有需要的受试者施用治疗有效量的分离的同种异体人类间充质干细胞群，其中，与施用所述分离的同种异体人类间充质干细胞群之前的所述受试者血清样本中的衰竭性b细胞(cd19+、cd27-、igd-)的数目相比，所述受试者血清样本中衰竭性b细胞的数目减少至少25％，从而治疗该非缺血性扩张型心肌病。

3、本发明的另一方面关于一种治疗受试者中非缺血性扩张型心肌病的方法，包括向需要的受试者施用治疗有效量的分离的同种异体人类间充质干细胞群，其中，与施用该分离的同种异体人类间充质干细胞群之前的该受试者血清样本中转换的记忆b细胞(cd19+、cd27高、igd-)的数目相比，所述受试者血清样本中转换的记忆b细胞的数目增加至少100％，从而治疗该非缺血性扩张型心肌病。

4、本发明的另一方面关于一种治疗受试者中非缺血性扩张型心肌病的方法，包括向有需要的受试者施用治疗有效量的分离的同种异体人类间充质干细胞群，其中，与施用该分离的同种异体人类间充质干细胞群之前的该受试者血清样本中表达细胞内tnf-α的b细胞的数目相比，该受试者血清样本中表达细胞内tnf-α的b细胞的数目减少至少30％，从而治疗该非缺血性扩张型心肌病。

5、本发明的另一方面关于一种治疗受试者中非缺血性扩张型心肌病的方法，包括向有需要的受试者施用治疗有效量的分离的同种异体人类间充质干细胞群，其中，与施用该分离的同种异体人类间充质干细胞群之前的该受试者血清样本中早期活化t细胞(cd3+、cd69+)的数目相比，该受试者血清样本中早期活化t细胞的数目减少至少30％，从而治疗该非缺血性扩张型心肌病。

6、本发明的另一方面关于一种治疗受试者中非缺血性扩张型心肌病的方法，包括向有需要的受试者施用治疗有效量的分离的同种异体人类间充质干细胞群，其中，与施用该分离的同种异体人类间充质干细胞群之前的该受试者血清样本中慢性活化t细胞(cd3+、cd25+)的数目相比，该受试者血清样本中慢性活化t细胞的数目减少至少70％，从而治疗该非缺血性扩张型心肌病。

7、本发明的另一方面关于一种治疗受试者中非缺血性扩张型心肌病的方法，包括向有需要的受试者施用治疗有效量的分离的同种异体人类间充质干细胞群，其中，与施用该分离的同种异体人类间充质干细胞群之前的该受试者血清样本中temra细胞(cd45ra+、ccr7-)的数目相比，该受试者血清样本中temra细胞的数目减少至少40％，从而治疗该非缺血性扩张型心肌病。

8、本发明的另一方面关于一种治疗受试者中非缺血性扩张型心肌病的方法，包括向有需要的受试者施用治疗有效量的分离的同种异体人类间充质干细胞群，其中，与施用该分离的同种异体人类间充质干细胞群之前的该受试者血清样本中的tnf-α浓度相比，该受试者血清样本中的tnf-α浓度减少至少80％，从而治疗该非缺血性扩张型心肌病。

9、本发明的另一方面关于一种治疗受试者中老化衰弱综合征的方法，包括向有需要的受试者施用治疗有效量的分离的同种异体人类间充质干细胞群，其中，与施用该分离的同种异体人类间充质干细胞群之前的该受试者血清样本中衰竭性b细胞(cd19+、cd27-、igd-)的数目相比，该受试者血清样本中衰竭性b细胞的数目减少至少10％，从而治疗该老化衰弱综合症。

10、本发明的另一方面关于一种治疗受试者中老化衰弱综合症状的方法，包括向有需要的受试者施用治疗有效量的分离的同种异体人类间充质干细胞群，其中，与施用该分离的同种异体人类间充质干细胞群之前的该受试者血清样本中转换的记忆b细胞(cd19+、cd27高、igd-)的数目相比，该受试者血清样本中转换的记忆b细胞的数目增加至少75％，从而治疗该老化衰弱综合症。

11、本发明的另一方面关于一种治疗受试者中老化衰弱综合症的方法，包括向有需要的受试者施用治疗有效量的分离的同种异体人类间充质干细胞群，其中，与施用该分离的同种异体人类间充质干细胞群之前的该受试者血清样本中表达细胞内tnf-α的b细胞的数目相比，该受试者血清样本中表达细胞内tnf-α的b细胞的数目减少至少60％，从而治疗该老化衰弱综合症。

12、本发明的另一方面关于一种治疗受试者中老化衰弱综合症的方法，包括向有需要的受试者施用治疗有效量的分离的同种异体人类间充质干细胞群，其中，与施用该分离的同种异体人类间充质干细胞群之前的该受试者血清样本中早期活化t细胞(cd3+、cd69+)的数目相比，该受试者血清样本中早期活化t细胞的数目减少至少30％，从而治疗该老化衰弱综合症。

13、本发明的另一方面关于一种治疗受试者中老化衰弱综合症的方法，包括向有需要的受试者施用治疗有效量之分离的同种异体人类间充质干细胞群，其中，与施用该分离的同种异体人类间充质干细胞群之前的该受试者血清样本中慢性活化t细胞(cd3+、cd25+)的数目相比，该受试者血清样本中慢性活化t细胞的数目减少至少75％，从而治疗该老化衰弱综合症。

14、本发明的另一方面关于一种治疗受试者中老化衰弱综合症的方法，包括向有需要的受试者施用治疗有效量的分离的同种异体人类间充质干细胞群，其中，与施用该分离的同种异体人类间充质干细胞群之前的该受试者血清样本中temra细胞(cd45ra+、ccr7-)的数目相比，该受试者血清样本中temra细胞的数目减少至少20％，从而治疗该老化衰弱综合症。

15、本发明的另一方面关于一种治疗受试者中老化衰弱综合征的方法，包括向需要其的受试者施用治疗有效量的分离的同种异体人类间充质干细胞群，其中，与施用该分离的同种异体人类间充质干细胞群之前的该受试者血清样本中的tnf-α浓度相比，该受试者血清样本中的tnf-α浓度减少至少50％，从而治疗该老化衰弱综合症。

16、本发明的另一方面关于一种治疗受试者中老化衰弱综合症状的方法，包括向需要其的受试者施用治疗有效量的分离的同种异体人类间充质干细胞群，其中，与施用该分离的同种异体人类间充质干细胞群之前的该受试者血清样本中的cd4+:cd8+t细胞的比率相比，该受试者血清样本中的cd4+:cd8+t细胞的比率增加至少100％，从而治疗该老化衰弱综合症。

17、在本发明的一实施方式中，受试者是人类。在本发明的另一实施方式中，受试者是表现炎性衰老的人类。

18、在本发明的一实施方式中，间充质干细胞是来源于骨髓的间充质干细胞。在本发明的一实施方式中，间充质干细胞不表达stro-1。在本发明的另一实施方式中，间充质干细胞不表达cd45。在本发明的另一实施方式中，间充质干细胞不表达纤维母细胞表面标志物或不具有纤维母细胞形态。在本发明的另一实施方式中，间充质干细胞不是基因操作的(genetically manipulated)。

19、在本发明的另一实施方式中，分离的同种异体间充质干细胞群系以单剂量施用。在本发明的另一实施方式中，分离的同种异体间充质干细胞群系以多剂量(例如二剂量或更多剂量)施用。在本发明的另一实施方式中，分离的同种异体间充质干细胞群至少每年施用一次。

20、在一实施方式中，分离的同种异体间充质干细胞群是全身性地施用的。在本发明的一实施方式中，分离的同种异体间充质干细胞群是通过输注或直接注射施用的。在本发明的一实施方式中，分离的同种异体间充质干细胞群是静脉内、动脉内、肌内、腹腔内、皮下、皮内、口服、心内膜、或鼻内施用的。在进一步的实施方式中，分离的同种异体间充质干细胞群是静脉内施用。在进一步的实施方式中，分离的同种异体间充质干细胞群是肌内施用的。

21、在本发明的一实施方式中，分离的同种异体间充质干细胞群系以约20×106的间充质干细胞的剂量施用。在本发明的另一实施方式中，分离的同种异体间充质干细胞群以约100×106的间充质干细胞的剂量施用。在本发明的另一实施方式中，分离的同种异体间充质干细胞群系以约200×106间充质干细胞的剂量施用。

22、在本发明的一实施方式中，分离的同种异体间充质干细胞群是从人类供体获得的，并且在向受试者施用所述分离的同种异体间充质干细胞群之前，不使用人类供体对受试者的mhc配型步骤。

23、本发明的另一方面关于一种评估受试者中细胞免疫状态和体液免疫状态的方法，包括：

24、(1)从受试者获得血清样本，所述受试者是基于确定该受试者先前需治疗非缺血性扩张型心肌病且该受试者已被施用初始剂量的分离的同种异体人类间充质干细胞群而被选择用于评估的；

25、(2)通过将从所述受试者获得的血清样本引入测定仪器来进行被配置为检测非缺血性扩张型心肌病的标志物的一个或多个测定，所述标志物选自衰竭性b细胞(cd19+、cd27-、igd-)、转换的记忆b细胞(cd19+、cd27高、igd-)、表达细胞内tnf-α的b细胞、早期活化t细胞(cd3+、cd69+)、慢性活化t细胞(cd3+、cd25+)、temra细胞(cd45ra+、ccr7-)和血清tnf-α的组，所述测定仪器(i)使该血清样本与特异性结合用于检测被测定生物标志物的一种或多种抗体接触，及(ii)产生一个或多个测定结果，所述测定结果表明被测定的每个标志物结合至各自抗体，以提供一个或多个测定结果；

26、(3)使由所述测定仪器产生的测定结果与所述受试者的免疫状态相关联，其中，该相关联步骤包括基于该测定结果向所述受试者分配免疫状态的一个或多个未来变化的可能性；以及

27、(4)基于所述受试者被分配至的个体的预定亚群而治疗所述受试者，其中，所述治疗包括施用一个或多个额外剂量的分离的同种异体人类间充质干细胞群。

28、本发明的另一方面关于一种评估受试者中细胞免疫状态和体液免疫状态的方法，包括：

29、(1)从被选择用于评估的受试者获得血清样本，所述评估基于确定所述受试者先前需治疗老化衰弱综合症且所述受试者已被施用初始剂量的分离的同种异体人类间充质干细胞群；

30、(2)通过将从所述受试者获得的该血清样本引入测定仪器来进行被配置为检测老化衰弱标志物的一个或多个测定，所述标志物选自衰竭性b细胞(cd19+、cd27-、igd-)、转换的记忆b细胞(cd19+、cd27高、igd-)、表达细胞内tnf-α的b细胞、早期活化t细胞(cd3+、cd69+)、慢性活化t细胞(cd3+、cd25+)、temra细胞(cd45ra+、ccr7-)、cd4+:cd8+t细胞比率、及血清tnf-α的组，所述测定仪器(i)使该血清样本与特异性结合用于检测被测定生物标志物的一种或多种抗体接触，和(ii)产生一个或多个测定结果，所述测定结果表明被测定的每个标志物结合至各自抗体，以提供一个或多个测定结果；

31、(3)使由所述测定仪器产生的测定结果与所述受试者的免疫状态相关联，其中，该相关联步骤包括基于所述测定结果向所述受试者分配免疫状态的一个或多个未来变化的可能性；以及

32、(4)基于所述受试者被分配至的个体的预定亚群而治疗所述受试者，其中，所述治疗包括施用一个或多个额外剂量的分离的同种异体人类间充质干细胞群。

33、在本发明的一实施方式中，免疫状态的一个或多个未来变化包括下列的一个或多个：衰竭性b细胞(cd19+、cd27-、igd-)的数目的增加、转换的记忆b细胞(cd19+、cd27高、igd-)的数目的减少、表达细胞内tnf-α的b细胞的数目的增加、早期活化t细胞(cd3+、cd69+)的数目的增加、慢性活化t细胞(cd3+、cd25+)的数目的增加、temra细胞(cd45ra+、ccr7-)的数目的增加、cd4+：cd8+t细胞比率的降低、和血清tnf-α的增加。

34、本发明的另一方面关于一种确定受试者中非缺血性扩张型心肌病的治疗疗效的体外方法，包括：在向该受试者施用分离的同种异体人类间充质干细胞群之前及之后，确定从该受试者获得的血清中选自由以下组成的组的一种或多种生物标志物的水平：衰竭性b细胞(cd19+、cd27-、igd-)、转换的记忆b细胞(cd19+、cd27高、igd-)、表现细胞内tnf-α的b细胞、早期活化t细胞(cd3+、cd69+)、慢性活化t细胞(cd3+、cd25+)、temra细胞(cd45ra+、ccr7-)、和tnf-α浓度；以及将在施用所述分离的人类间充质干细胞群之前及之后获得的血清中的所述一种或多种生物标志物的水平进行比较，其中，如果以下情况，所述治疗是有效的：

35、(1)与施用该分离的同种异体人类间充质干细胞群之前的衰竭性b细胞(cd19+、cd27-、igd-)的数目相比，衰竭性b细胞的数目减少至少25％，

36、(2)与施用该分离的同种异体人类间充质干细胞群之前的转换的记忆b细胞(cd19+、cd27高、igd-)的数目相比，转换的记忆b细胞的数目增加至少100％，

37、(3)与施用该分离的同种异体人类间充质干细胞群之前的表达细胞内tnf-α的b细胞的数目相比，该表达细胞内tnf-α的b细胞的数目减少至少30％，

38、(4)与施用该分离的同种异体人类间充质干细胞群之前的早期活化t细胞(cd3+、cd69+)的数目相比，该早期活化t细胞的数目减少至少30％，

39、(5)与施用该分离的同种异体人类间充质干细胞群之前的慢性活化t细胞(cd3+、cd25+)的数目相比，该慢性活化t细胞的数目减少至少70％，

40、(6)与施用该分离的同种异体人类间充质干细胞群之前的temra细胞(cd45ra+、ccr7-)的数目相比，该temra细胞的数目减少至少40％，和/或

41、(7)与施用该分离的同种异体人类间充质干细胞群之前的该受试者血清样本中的tnf-α浓度相比，该受试者血清样本中的tnf-α浓度降低至少80％。

42、本发明的另一方面关于一种确定治疗受试者中老化衰弱综合症的治疗疗效的体外方法，包括：在向该受试者施用分离的同种异体人类间充质干细胞群之前及之后，确定从该受试者获得的血清中选自由以下组成的组的一种或多种生物标志物的水平：衰竭性b细胞(cd19+、cd27-、igd-)、转换的记忆b细胞(cd19+、cd27高、igd-)、表达细胞内tnf-α的b细胞、早期活化t细胞(cd3+、cd69+)、慢性活化t细胞(cd3+、cd25+)、temra细胞(cd45ra+、ccr7-)、cd4+：cd8+t细胞比率、和tnf-α浓度；以及将在施用所述分离的人类间充质干细胞群之前及之后获得的血清中的所述一种或多种生物标志物的水平进行比较，其中，如果以下情况，所述治疗是有效的：

43、(1)与施用该分离的同种异体人类间充质干细胞群之前的衰竭性b细胞(cd19+、cd27-、igd-)的数目相比，该衰竭性b细胞的数目减少至少10％，

44、(2)与施用该分离的同种异体人类间充质干细胞群之前的转换的记忆b细胞(cd19+、cd27高、igd-)的数目相比，该转换的记忆b细胞的数目增加至少75％，

45、(3)与施用该分离的同种异体人类间充质干细胞群之前的表达细胞内tnf-α的b细胞的数目相比，该表达细胞内tnf-α的b细胞的数目减少至少60％，

46、(4)与施用该分离的同种异体人类间充质干细胞群之前的早期活化t细胞(cd3+、cd69+)的数目相比，该早期活化t细胞的数目减少至少30％，

47、(5)与施用该分离的同种异体人类间充质干细胞群之前的慢性活化t细胞(cd3+、cd25+)的数目相比，该慢性活化t细胞的数目减少至少75％，

48、(6)与施用该分离的同种异体人类间充质干细胞群之前的temra细胞(cd45ra+、ccr7-)的数目相比，该temra细胞的数目减少至少20％，

49、(7)与施用该分离的同种异体人类间充质干细胞群之前的该受试者血清样本中的tnf-α浓度相比，该受试者血清样本中的tnf-α浓度降低至少50％，和/或

50、(8)与该施用分离的同种异体人类间充质干细胞群之前的该受试者血清样本中的cd4+：cd8+t细胞比率相比，该受试者血清样本中的cd4+：cd8+t细胞比率增加至少100％。

51、本发明的另一方面关于血清中的衰竭性b细胞(cd19+、cd27-、igd-)的水平、转换的记忆b细胞(cd19+、cd27高、igd-)的水平、表达细胞内tnf-α的b细胞的水平、早期活化t细胞(cd3+、cd69+)的水平、慢性活化t细胞(cd3+、cd25+)的水平、temra细胞(cd45ra+、ccr7-)的水平、和tnf-α浓度用于确定针对非缺血性扩张型心肌病的治疗是否有效的体外用途。

52、本发明的另一方面关于血清中的衰竭性b细胞(cd19+、cd27-、igd-)的水平、转换的记忆b细胞(cd19+、cd27高、igd-)的水平、表达细胞内tnf-α的b细胞的水平、早期活化t细胞(cd3+、cd69+)的水平、慢性活化t细胞(cd3+、cd25+)的水平、temra细胞(cd45ra+、ccr7-)的水平、cd4+：cd8+t细胞比率和tnf-α浓度用于确定针对老化衰弱的治疗是否有效的体外用途。