一种具有免疫调节功效的低分子量多糖及其制备方法和应用

本发明属于多糖提取，具体涉及一种具有免疫调节功效的低分子量多糖及其制备方法和应用。

背景技术：

1、黄精(pr)是一种功能性食用草本植物，长期以来一直被用于预防和治疗中医中的各种疾病，如治疗暂时或永久性免疫功能障碍、糖尿病、脾虚、咳嗽、厌食、胃病等。同时，黄精还被加工成一系列功能性保健品，如黄精酒、功能性饮料、酸奶增稠剂和发酵食品。根据以往的研究报道可知，多糖、黄酮类化合物和甾体皂苷是pr的主要化学成分；其中，多糖已成为主要的生物活性成分，并被《中国药典》正式认定为质量控制的关键植物化学标志物，最低要求含量为7％。

2、生草药的加工是中医药中一种完整而独特的制药技术，在减轻副作用、增强药性、改变特性甚至改变这些草药的治疗效果方面发挥着至关重要的作用。在用于食品和临床应用之前，pr要经过必要的加工步骤，以确保其安全性和有效性。通常，pr要经过葡萄酒、黑豆、生姜和蜂蜜等蒸制。研究表明，pr加工后化学成分会发生显著变化，这些变化有可能对其生物活性产生重大影响。黑豆水煎(bb)是一种特殊的中药炮制处理方法，炮制后可以增加药物入肾经的功能，能改变药物的药性，增强其补益的功效，同时也能对一些化学成分进行改性，这种技术对含有有毒或刺激成分的草药特别有益。研究表明，与生pr相比，与肝损伤有关的主要蒽醌成分大黄素-8-o-β-d-葡萄糖苷在加工后的pr中含量较低。此外，用豆子清洗或蒸中药(cm)被认为是在复合基质中进行草药发酵的一种独特技术。这一过程可能导致某些化学成分的改变，并促进活性成分的释放。bb加工pr(prwb)是明代中医典籍《鲁府秘方经》中记载的一种经典手法。以往的研究主要集中在pr的水蒸汽和葡萄酒加工方面。这些研究一致认为pr中的多糖主要由果糖、葡萄糖和半乳糖组成。很少有研究报道prwb中的化学成分，尤其是具有生物活性的多糖。

3、多糖是一类大分子物质，广泛存在于微生物、藻类、植物和动物中。近年来，多糖因其结构复杂，具有抗肿瘤、免疫调节、抗炎、保肝等生物活性而引起了人们的广泛关注。研究表明，天然多糖具有显著的抗肿瘤活性，且无明显毒副作用。目前，多糖由于其结构的多样性，在调节细胞信号传导方面具有巨大的潜力。一些多糖可以调节宿主免疫系统，并通过激活非特异性或特异性免疫反应等途径间接发挥抗肿瘤作用。事实上，黄精多糖(pp)对免疫功能的影响因其对人类健康和疾病治疗的影响而受到广泛关注。先前的研究表明，pr多糖具有强大的免疫调节特性，可以通过促进免疫器官发育、淋巴细胞增殖和巨噬细胞吞噬以及调节环磷酰胺(cy)诱导的免疫抑制小鼠的血清细胞因子水平来逆转免疫抑制。近年来，一些研究发现，pp的免疫调节活性在调制后增强。然而，来自prwb的多糖所表现出的免疫调节活性的详细化学结构或机制仍然没有报道。因此，有必要提高对prwb多糖的组成、结构特征和生物活性的认识，并探索其潜在的免疫调节作用机制，以促进其作为一种安全有效的天然药物作为一种新型免疫调节剂的进一步开发和利用。

技术实现思路

1、针对上述现有技术，本发明提供一种具有免疫调节功效的低分子量多糖及其制备方法和应用，以提供一种新型免疫调节剂。

2、为了达到上述目的，本发明所采用的技术方案是，提供一种具有免疫调节功效的低分子量多糖，低分子量多糖的结构式如式(i)所示，

3、

4、其中，r1为r2为

5、本发明还公开了上述低分子量多糖的制备方法，制备方法包括以下步骤：

6、s1：将黑豆粉碎并水提，得黑豆水提物；

7、s2：用黑豆水提物对黄精进行熏蒸，然后将熏蒸后的黄精切片并干燥，再将干燥后的黄精粉碎成粒径不超过100μm的粉末；

8、s3：将所得粉末放入95％的乙醇溶液中浸泡20～25h，然后分离收集固体；

9、s4：将分离出的固体在水中预浸泡1h，再将预浸泡后的固体按1.5～2g:5ml的料液比放入煮沸的水中，蒸煮2～3h后过滤，收集滤液；重复该操作2～3次，合并滤液，然后将滤液浓缩至原体积的十分之一，得浓缩物；

10、s5：将浓缩物溶于乙醇中，于4℃下醇沉24h，再离心，收集沉淀并冷冻干燥；

11、s6：脱除s5中干燥后沉淀的蛋白质，得粗多糖i；

12、s7：将粗多糖i装入deae-52纤维素柱，用纯水洗脱，收集洗脱液；

13、s8：用3500da的透析袋对洗脱液透析24h，然后然后于-50℃、10pa条件下冷冻干燥48h，即得。

14、在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进。

15、进一步，s2中熏蒸时间为5～8h。

16、进一步，s3中浸泡时间为24h。

17、进一步，s5中浓缩物溶解后所得溶液中乙醇的体积分数为40％。

18、进一步，s6中脱除蛋白质的方法为sevag法，总共脱除6次。

19、本发明还公开了上述多糖在制备免疫调节药物中的应用。所制备的药物还包括药学上可接受的盐，其剂型为片剂、胶囊剂、口服液、颗粒剂、丸剂或散剂。

20、本发明的有益效果是：本发明通过对黄精进行特殊炮制处理，然后再进行提取纯化工艺可以得到一种具有特殊化学结构的多糖(spr-1)，所得多糖可通过增加巨噬细胞inos、tnf-α、cox-2等基因的表达，增加no、il-1β和tnf-α等细胞因子的产生，刺激细胞产生免疫反应；并且，作为一种天然产生的药物，spr-1即使在高浓度下也没有细胞毒性作用，可以作为一种安全的免疫调节药物使用。此外，spr-1还能够刺tlr4基因的表达，具有作为tlr4激动剂的潜力，而tlr4是多种肿瘤治疗的药物靶点，在抗肿瘤治疗中具有重要作用。

技术特征：

1.一种具有免疫调节功效的低分子量多糖，其特征在于，所述低分子量多糖的结构式如式(i)所示，

2.根据权利要求1所述的具有免疫调节功效的低分子量多糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：s2中熏蒸时间为5～8h。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：s3中浸泡时间为24h。

5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：s5中浓缩物溶解后所得溶液中乙醇的体积分数为40％。

6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：s6中脱除蛋白质的方法为sevag法，总共脱除6次。

7.权利要求1所述的具有免疫调节功效的低分子量多糖在制备免疫调节药物中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：所述药物还包括药学上可接受的盐，其剂型为片剂、胶囊剂、口服液、颗粒剂、丸剂或散剂。

技术总结本发明公开了一种具有免疫调节功效的低分子量多糖及其制备方法和应用，多糖的结构式如式(I)所示。本发明通过对黄精进行炮制处理，然后再进行提取纯化的工艺可以得到一种具有特殊化学结构的低分子量多糖(SPR‑1)，所得多糖可通过增加巨噬细胞iNOS、TNF‑α、COX‑2等基因的表达，增加NO、IL‑1β和TNF‑α等细胞因子的产生，刺激细胞产生免疫反应；并且，作为一种天然来源的药物，SPR‑1即使在高浓度下也没有细胞毒性作用，可以作为一种安全的免疫调节药物使用。此外，SPR‑1还能够刺TLR4基因的表达，具有作为TLR4激动剂的潜力，而TLR4是多种肿瘤治疗的药物靶点，在抗肿瘤治疗中具有重要作用。技术研发人员：张志锋,苏宏娜,杨丽受保护的技术使用者：西南民族大学技术研发日：技术公布日：2024/8/1