一种用于诊断胃癌的游离miRNA生物标志物及试剂盒

本发明涉及生物医学检测技术，具体涉及一种用于诊断胃癌的游离mirna生物标志物及试剂盒。

背景技术：

1、胃癌是全球最常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率均维持在较高的水平，严重影响人类的健康。因此，加强对高危地区高危人群胃癌风险的监测、早期发现和诊断，从而实现对胃癌患者的早期干预和治疗，对提高胃癌患者的预后及生活质量有非常重要的意义。由于胃癌早期阶段症状隐匿甚至无症状，导致内镜普查和病理活检在临床上的应用受到限制。因此近年来，越来越多的研究寻找无创筛查和诊断胃癌的技术和方法，实现胃癌的早诊早筛，从而提高胃癌患者的存活率，降低死亡率。

2、目前，早期胃癌的筛查率仅仅只有5％-20％，究其原因，主要是因为缺乏有效、简便、实惠的胃癌筛查项目。目前胃癌的主流筛查方法是内镜筛查和血清学检查，而内镜联合组织病理学检查是胃癌诊断的金标准，但是由于内镜检查有一定的侵入性，同时带有一定的客观性，对内镜医生的经验要求较高，并且内镜检查产生的费用较高，因此难以使用内镜实现对大规模自然人群的筛查。

3、mirna是一组长度为21-22核苷酸的非编码rna，在血液中以核酸-蛋白复合物形式存在或被包裹形成外泌体，由于其分子量较小，可以抵抗rna酶的降解，在血液中高度稳定，可耐受反复冻融和极端ph环境，所以循环mirna可以作为一种可信的分子标志物。然而，mirna的特点是序列段、同源性高、gc含量差别较大，并且在血液和组织中表达量差别较大，因此存在难以设计引物，难以获得高灵敏度和高特异性的检测难度，同时一些低表达量的mirna在血液中难以被检测到。

4、目前，寻找合适mirna作为胃癌诊断的标志物的报道还比较少，获得相关适合的mirna通常存在较大的偶然性，例如cn105200157a发现mir-190a、mir-331-5p、mir-362-3p和mir-369-3p以及mir-16作为内参可以作为胃癌诊断的标志物，cn111321224a发现mir-18a、mir-93、mir-146b、mir-181a、mir-181b、mir-335和内参mirna具有在诊断胃癌方面的应用，两种方案之间几乎没有直接联系。这就造成研发能够在胃癌诊断方面具有良好效果的游离mirna生物标志物，是比较困难的。

5、综上所述，本领域亟需研发在胃癌诊断方面具有良好效果的、新的游离mirna生物标志物。

技术实现思路

1、针对现有技术的不足和需求，本发明的目的之一在于提供一种用于诊断胃癌的游离mirna生物标志物。

2、针对上述目的，本发明提供了如下技术方案：

3、一种用于诊断胃癌的游离mirna生物标志物，所述游离mirna生物标志物包括：hsa-mir-652-3p、hsa-mir-126-5p、hsa-mir-30e-5p、hsa-mir-185-5p、hsa-mir-1972和hsa-mir-20b-5p；

4、所述hsa-mir-652-3p的核苷酸序列如seq id no.1所示，所述hsa-mir-126-5p的核苷酸序列如seq id no.2所示，所述hsa-mir-30e-5p的核苷酸序列如seq id no.3所示，所述hsa-mir-185-5p的核苷酸序列如seq id no.4，所述hsa-mir-1972的核苷酸序列如seqid no.5，所述hsa-mir-20b-5p的核苷酸序列如seq id no.6所示。

5、进一步地，所述游离mirna生物标志物为人血浆游离mirna生物标志物。

6、进一步地，所述胃癌包括早期胃癌或进展期胃癌。

7、本发明的目的之二在于提供一种用于诊断胃癌的游离mirna引物组合，所述游离mirna引物包括hsa-mir-652-3p、hsa-mir-126-5p、hsa-mir-30e-5p、hsa-mir-185-5p、hsa-mir-1972和hsa-mir-20b-5p的引物；所述hsa-mir-652-3p的引物为qiagen公司的引物产品yp00204387，所述hsa-mir-126-5p的引物为qiagen公司的引物产品yp00206010，所述hsa-mir-30e-5p的引物为qiagen公司的引物产品yp00204714，所述hsa-mir-185-5p的引物为qiagen公司的引物产品yp00206037，所述hsa-mir-1972的引物为qiagen公司的引物产品yp00205605，所述hsa-mir-20b-5p的引物为qiagen公司的引物产品yp00204755。

8、本发明的目的之三在于提供一种用于诊断胃癌的试剂盒，所述试剂盒包括上述引物。

9、本发明的另外一个目的在于提供上述游离mirna生物标志物在制备用于诊断胃癌的产品方面的应用。具体的，所述胃癌包括早期胃癌或进展期胃癌；所述游离mirna生物标志物包括：hsa-mir-652-3p、hsa-mir-126-5p、hsa-mir-30e-5p、hsa-mir-185-5p、hsa-mir-1972和hsa-mir-20b-5p；

10、所述hsa-mir-652-3p的核苷酸序列如seq id no.1所示，所述hsa-mir-126-5p的核苷酸序列如seq id no.2所示，所述hsa-mir-30e-5p的核苷酸序列如seq id no.3所示，所述hsa-mir-185-5p的核苷酸序列如seq id no.4，所述hsa-mir-1972的核苷酸序列如seqid no.5，所述hsa-mir-20b-5p的核苷酸序列如seq id no.6所示。

11、本发明的有益效果：

12、本发明提供的用于诊断胃癌的游离mirna生物标志物，包括hsa-mir-652-3p、hsa-mir-126-5p、hsa-mir-30e-5p、hsa-mir-185-5p、hsa-mir-1972和hsa-mir-20b-5p，具有优异的胃癌诊断效果，对于早期胃癌和进展期胃癌的auc分别为0.862和0.901，显著优于传统诊断方法。

技术特征：

1.一种用于诊断胃癌的游离mirna生物标志物，其特征在于，所述游离mirna生物标志物包括：hsa-mir-652-3p、hsa-mir-126-5p、hsa-mir-30e-5p、hsa-mir-185-5p、hsa-mir-1972和hsa-mir-20b-5p；

2.根据权利要求1所述的用于诊断胃癌的游离mirna生物标志物，其特征在于，所述游离mirna生物标志物为人血浆游离mirna生物标志物。

3.根据权利要求1所述的用于诊断胃癌的游离mirna生物标志物，其特征在于，所述胃癌包括早期胃癌或进展期胃癌。

4.一种用于诊断胃癌的游离mirna引物组合，其特征在于，所述游离mirna引物包括hsa-mir-652-3p、hsa-mir-126-5p、hsa-mir-30e-5p、hsa-mir-185-5p、hsa-mir-1972和hsa-mir-20b-5p的引物；所述hsa-mir-652-3p的引物为qiagen公司的引物产品yp00204387，所述hsa-mir-126-5p的引物为qiagen公司的引物产品yp00206010，所述hsa-mir-30e-5p的引物为qiagen公司的引物产品yp00204714，所述hsa-mir-185-5p的引物为qiagen公司的引物产品yp00206037，所述hsa-mir-1972的引物为qiagen公司的引物产品yp00205605，所述hsa-mir-20b-5p的引物为qiagen公司的引物产品yp00204755。

5.一种用于诊断胃癌的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求4所述的引物。

6.一种游离mirna生物标志物在制备用于诊断胃癌的产品方面的应用，其特征在于，所述胃癌包括早期胃癌或进展期胃癌；所述游离mirna生物标志物包括：hsa-mir-652-3p、hsa-mir-126-5p、hsa-mir-30e-5p、hsa-mir-185-5p、hsa-mir-1972和hsa-mir-20b-5p；

技术总结本发明涉及生物医学检测技术，具体涉及一种用于诊断胃癌的游离miRNA生物标志物，所述游离miRNA生物标志物包括：hsa‑miR‑652‑3p、hsa‑miR‑126‑5p、hsa‑miR‑30e‑5p、hsa‑miR‑185‑5p、hsa‑miR‑1972和hsa‑miR‑20b‑5p。本发明提供的用于诊断胃癌的游离miRNA生物标志物具有优异的胃癌诊断效果，具有优异的胃癌诊断效果，对于早期胃癌和进展期胃癌的AUC分别为0.862和0.901，显著优于传统诊断方法。技术研发人员：周永宁,方喜东,郑亚,姬瑞,郭庆红,陈兆峰,王玉平受保护的技术使用者：兰州大学第一医院技术研发日：技术公布日：2024/8/1