基于高通量扩增子测序的革兰氏阳性细菌检测的组合物的制作方法

本发明属于生物检测领域。具体地，涉及高通量扩增子测序检测的组合物，更具体地，涉及革兰氏阳性细菌的高通量扩增子测序检测的组合物。

背景技术：

1、宏基因组学(metagenomics)又叫微生物环境基因组学、元基因组学。它通过直接从环境样品中提取全部微生物的dna，构建宏基因组文库，利用基因组学的研究策略研究环境样品所包含的全部微生物的遗传组成及其群落功能。宏基因组学在微生物组学的基础上发展而来的，不依赖于微生物的分离培养，可用于研究难培养或不可培养的微生物中的天然产物和处于沉默状态的天然产物，极大地提高了宏基因组样品中微生物资源的利用程度。通过对宏基因组样品进行深度测序分析，可以揭示或者评估环境中真实的物种多样性和遗传多样性，也可用于新型微生物活性物质(或新基因)的发现。目前，宏基因组学研究主要包括全基因组测序(wgs)和靶向重测序(tngs)两种手段。

2、与全基因组测序不同，靶向重测序技术可以直接对待测样本中感兴趣的基因组进行靶向富集，将目标基因组与繁杂的背景核酸进行分离再测序。该方法更加地经济和高效，且具有更高的灵敏度以及后续的数据分析会更加便利。例如在临床样本测序数据中，人基因组背景数据可能高达99％，只有1％的数据是目的序列，因此需要大量的数据才能保证数据的准确性，如果对靶向序列进行富集，再单独测序，所需的数据量要求会显著降低，对应的在后续的分析中也能极大的简化相关工作。

3、因此，本领域需要一种组合物，其能对靶标进行富集，使得后续测序所需数据量显著降低，且能够简化分析，可以准确并高效的检测各种靶标。

技术实现思路

1、有鉴于此，第一方面，本发明提供一种基于高通量扩增子测序检测革兰氏阳性细菌的组合物，包括如下所示引物组中的至少4个靶标：

2、如seq id no.1～14所示的扩增巴西诺卡菌的引物组；

3、如seq id no.15～18所示的扩增鲍曼不动杆菌的引物组；

4、如seq id no.19～24所示的扩增肺炎链球菌的引物组；

5、如seq id no.25～30所示的扩增粪肠球菌的引物组；

6、如seq id no.31～42所示的扩增化脓链球菌的引物组；

7、如seq id no.43～60所示的扩增缓症链球菌的引物组；

8、如seq id no.61～68所示的扩增金黄色葡萄球菌的引物组；

9、如seq id no.69～74所示的扩增屎肠球菌的引物组；

10、如seq id no.75～78所示的扩增纹带棒状杆菌的引物组；

11、如seq id no.79～86所示的扩增星座链球菌的引物组；

12、如seq id no.87～92所示的扩增咽峡炎链球菌的引物组；

13、如seq id no.93～96所示的扩增中间链球菌的引物组；

14、如seq id no.97～100所示的扩增表皮葡萄球菌的引物组；或者

15、如seq id no.101～104所示的扩增皮疽诺卡菌的引物组。

16、进一步地，本发明提供一种基于高通量扩增子测序检测的组合物，包括如上所示引物组中的至少5个靶标。

17、进一步地，本发明提供一种基于高通量扩增子测序检测的组合物，包括如上所示引物组中的至少6个靶标。

18、进一步地，本发明提供一种基于高通量扩增子测序检测的组合物，包括如上所示引物组中的至少7个靶标。

19、进一步地，本发明提供一种基于高通量扩增子测序检测的组合物，包括如上所示引物组中的至少8个靶标。

20、进一步地，本发明提供一种基于高通量扩增子测序检测的组合物，包括如上所示引物组中的至少9个靶标。

21、进一步地，本发明提供一种基于高通量扩增子测序检测的组合物，包括如上所示引物组中的至少10个、11个、12个、13个、14个靶标。

22、使用本发明的组合物，能够在一管内同时扩增并富集多个靶标，使得后续测序所需数据量显著降低，分析工作简化，从而使得整个检测更加准确和效率。

23、需要说明的是，本领域技术人员知晓，如果14个靶标能同时在一管之内进行pcr扩增，那么这14个靶标中的任意组合(例如任意1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个)的靶标均能在一管之内进行pcr扩增，这是毫无疑问的。

24、更进一步地，本发明提供一种基于高通量扩增子测序检测的组合物，包括：

25、如seq id no.1～14所示的扩增巴西诺卡菌的引物组；

26、如seq id no.15～18所示的扩增鲍曼不动杆菌的引物组；

27、如seq id no.19～24所示的扩增肺炎链球菌的引物组；

28、如seq id no.25～30所示的扩增粪肠球菌的引物组；

29、如seq id no.31～42所示的扩增化脓链球菌的引物组；

30、如seq id no.43～60所示的扩增缓症链球菌的引物组；

31、如seq id no.61～68所示的扩增金黄色葡萄球菌的引物组；

32、如seq id no.69～74所示的扩增屎肠球菌的引物组；

33、如seq id no.75～78所示的扩增纹带棒状杆菌的引物组；

34、如seq id no.79～86所示的扩增星座链球菌的引物组；

35、如seq id no.87～92所示的扩增咽峡炎链球菌的引物组；

36、如seq id no.93～96所示的扩增中间链球菌的引物组；

37、如seq id no.97～100所示的扩增表皮葡萄球菌的引物组；以及

38、如seq id no.101～104所示的扩增皮疽诺卡菌的引物组。

39、使用上述本发明的组合物，能够在一管内同时扩增并富集14个靶标，使得后续测序所需数据量显著降低，分析工作简化，从而使得整个检测更加准确和效率。

40、进一步地，所述引物组均带有接头序列，以方便测序。

41、更进一步地，上游引物接头序列为acacgacgctcttccgatct，下游引物接头序列为cttggcacccgagaattcca。

42、在一些具体的实施方案中，所述组合物的各成分存在于同一个包装中。

43、进一步地，本发明的组合物的各成分以混合的形式存在。

44、第二方面，本发明提供一种上述组合物用于制备高通量扩增子测序检测革兰氏阳性细菌的试剂盒中的用途。

45、第三方面，本发明提供一种高通量扩增子测序检测革兰氏阳性细菌的试剂盒，包括上述组合物。

46、进一步地，所述试剂盒还包括如下中的至少一种：核酸提取所需试剂、核酸扩增所需试剂、测序所需试剂。

47、进一步地，核酸提取所需试剂可以是从血液中提取dna的试剂。

48、进一步地，核酸扩增所需试剂包括dna聚合酶、dntp、缓冲液，和mg2+。

49、进一步地，测序所需试剂包括磁珠。

50、第四方面，本发明提供一种制备高通量扩增子测序检测革兰氏阳性细菌的组合物的用途，其中，所述检测包括：

51、1)提取或释放待测样本的核酸；

52、2)使用如上所述的组合物扩增，获得扩增产物；

53、3)处理扩增产物并建库；以及

54、4)测序并分析结果。

55、进一步地，所述扩增的条件为：

56、