氯化铵在防治水生病毒感染中的应用

本发明属于水产养殖，具体涉及氯化铵的用途，其可用于制备预防或治疗水生病毒(尤其是cyhv2、gcrv及svcv)感染的药物或添加剂。

背景技术：

1、铵根离子nh4+是自然界中氮元素的一种重要存在形态，广泛分布于土壤、植物和大气中。含nh4+的化合物氯化铵(nh4cl)由于易溶于水，能够被植物快速吸收，在化肥生产中被大量应用。在农业中，nh4cl是粮食作物重要的铵肥存在形式，一方面用作基肥，另一方面作为追肥使用，尤其适宜作为水稻的追肥，其包含的氯离子既能够抑制稻田硝化作用，又有利于水稻茎秆纤维形成，肥效较高而且稳定。另外，在工业方面，nh4cl能够作为制造干电池和蓄电池、电镀添加剂、金属焊接助熔剂的原料。但截至目前，nh4cl在抗病毒过程中扮演的角色尚不清楚，尚未有报道将nh4cl应用于水生动物病毒性疾病防治。

2、鲤疱疹病毒ⅱ型(cyprinid herpesvirus 2,cyhv2)是造成金鱼、鲫鱼等鲤科鱼类病毒性鳃出血症的病原，一旦暴发会引起养殖鱼类大规模死亡。其中，异育银鲫作为中国重要的大宗淡水经济鱼类，疱疹病毒的流行每每带来巨大的经济损失。疱疹病毒病因其发病速度快，致死率高的特点，目前已被世界动物卫生组织(oie)收入须重点检疫申报的疾病名录。目前，针对水生动物病毒病的防治手段十分有限，尽管针对鱼类疱疹病毒病原分离、组织病理观察、转录组分析等方面已开展一些研究，但尚未找到良好的防治方式。

3、以鲤春病毒血症(spring viremia of carp，svc)为主的病毒病问题已成为我国鲤科鱼类养殖产业发展的巨大掣肘。鲤春病毒血症病原为鲤春病毒血症病毒(springviremia of carp virus，svcv)，该疾病致死率极高，一旦暴发会引起养殖鱼类大规模死亡。svcv属弹状病毒科，基因组依次编码g、l、m、n、p五个蛋白，尽管关于svcv的病原分离、组织病理观察、转录组分析等方面已开展一些研究，但其致病机理、传播机制、病毒-宿主互作机制等研究相对比较少。目前关于svcv的研究较为丰富，药物研究较多，但仍然缺乏行之有效的防治手段，尚无商品化的特效药。预防方面，svcv的疫苗开发目前尚处于探索阶段，尚未研发出保护率、成本、接种方式三项均满足规模化生产，能够实现市场投放的疫苗。总体而言，关于鲤春病毒血症尚未建立有针对性的治疗手段，寻找高效安全的药物仍是防治工作的当务之急。

4、草鱼呼肠孤病毒(grass carp reovirus，gcrv)，属呼肠孤病毒科，水生呼肠孤病毒属。gcrv引起的草鱼出血病是危害草鱼养殖产业的主要病毒性疾病。目前，针对gcrv的防治方式主要聚焦于疫苗研究。随着基因工程疫苗研制的发展，以亚单位疫苗和核酸疫苗为代表的各类草鱼出血病疫苗相继出现。但是疫苗的大规模生产应用仍然受到制约，主要是因为疫苗给药方式较难突破，并且其专一性强的特性使疫苗无法适用于易变异的新型病毒。基于此，找寻具有良好抗病毒效果的抗gcrv药物相比于使用疫苗具有显著的优势。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供氯化铵在防治水生病毒感染中的应用，实验动物存活率模型证实氯化铵提高鱼体抵御病毒(cyhv2、svcv)的能力，并显著抑制鱼类离体培养细胞中病毒增殖及相关基因(svcv相关基因g、l、m、n、p)的转录，抗病毒实验证实氯化铵能够增强细胞对于svcv与gcrv的抗病毒能力，氯化铵能够用于制备防治水生病毒(尤其是cyhv2、svcv及gcrv)感染的药物或添加剂，提供了一种广谱应对多种鱼类病毒病的方法。

2、为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

3、含有氯化铵的化合物在防治鲤疱疹病毒(cyhv2)感染中的应用：感染cyhv2的鲫鱼，浸泡氯化铵(5.0mg/l)后，因病毒造成的鱼体死亡率被显著降低。

4、含有氯化铵的化合物在防治草鱼呼肠孤病毒(gcrv)感染中的应用：感染gcrv的cik细胞系，经2.5mm氯化铵处理后，病毒造成的细胞病变被明显抑制，细胞中病毒滴度明显降低。

5、含有氯化铵的化合物在防治鲤春病毒血症病毒(svcv)感染中的应用：感染svcv的斑马鱼，浸泡氯化铵(5.0mg/l)后，因病毒造成的鱼体死亡率被显著降低；感染svcv的epc细胞系，经2.5mm氯化铵处理后，病毒造成的细胞病变被明显抑制，且病毒相关基因表达明显降低。

6、本发明实施例中选取的两种实验用鱼异育银鲫和斑马鱼分别是cyhv2和svcv的主要宿主，用于建立cyhv2和svcv的病毒感染模型；两种鱼类细胞系分别是来源于svcv和gcrv重要宿主的细胞系，通过建立鱼体及细胞感染病毒的疾病模型，以及对病毒相关基因表达的检测，可知nh4cl适用于水生病毒(尤其是cyhv2、svcv及gcrv)的病毒防治。

7、nh4cl作为预防或治疗cyhv2、svcv及gcrv病毒感染的药物或添加剂，药物能够以浸泡或口服剂形式使用，具有给药剂量低，成分单一，防治效果佳的优点。

技术特征：

1.含有铵根的离子化合物在制备防治水生病毒感染的药物或添加剂中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的水生病毒为鲤疱疹病毒、草鱼呼肠孤病毒及鲤春病毒血症病毒。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述的含有铵根的离子化合物为nh4cl。

技术总结本发明公开了氯化铵在防治鲤疱疹病毒Ⅱ型（cyprinid herpesvirus 2,CyHV2）、草鱼呼肠孤病毒（Grass carp reovirus,GCRV）及鲤春病毒血症病毒（Spring viraemia of carp virus,SVCV）感染中的应用，实验动物及细胞感染模型的结果显示，氯化铵能够对CyHV2、GCRV及SVCV感染的鱼体或细胞起到显著的保护作用，进一步分子生物学实验结果显示氯化铵处理后病毒相关基因转录水平及蛋白表达被显著抑制。因此，氯化铵能够作为防治CyHV2、GCRV及SVCV感染的药物或者添加剂，并具有使用剂量无毒安全，保护效果佳的优点。技术研发人员：李顺,陆龙凤,李卓聪,陈丹丹受保护的技术使用者：中国科学院水生生物研究所技术研发日：技术公布日：2024/8/5