一种脱细胞羊膜材料及其制备方法与在制备眼表修复材料中的应用与流程

本发明涉及眼科材料制备，具体涉及一种脱细胞羊膜材料及其制备方法与在制备眼表修复材料中的应用。

背景技术：

1、羊膜是单层上皮细胞互相连接构成的薄膜；是胎膜最内一层，是一层半透明的薄膜，与覆盖在胎盘、脐带的羊膜层相连接。在眼科临床中，羊膜可以作为一种生物材料用于治疗眼表损伤；具有重要的应用价值。

2、如中国发明专利cn202210366231.9公开了一种脱细胞冻干羊膜产品的制备工艺，通过对胎盘剥离、分型，对羊膜进行化学处理、清洗、脱细胞、再清洗、冷冻干燥、切割成型、内包装、辐照灭菌、外包成品的工艺，针对有绒毛层和无绒毛层两种羊膜型号，能够有效进行脱细胞，且充分考虑到羊膜透明、体积小等不易于换液以及冷冻干燥后尺寸难精准控制的关键点，合理规划生产工艺，提高羊膜的成品率，促进羊膜产业发展。

3、然而，发明人在研究中发现，参照上述方法制备得到的脱细胞羊膜材料，其促进细胞增殖作用不强，将其用于眼表损伤修复时，修复的周期较长，有待进一步提高。

技术实现思路

1、为了解决现有技术中存在的至少之一的技术问题，本发明提供了一种脱细胞羊膜材料及其制备方法与在制备眼表修复材料中的应用。

2、本发明解决上述技术问题的技术方案如下：

3、本发明首先提供了一种脱细胞羊膜材料的制备方法，其包含如下步骤：

4、(1)取胎盘，将羊膜从胎盘上进行分离，接着用细胞刮匙去除羊膜表面多余的组织，得无绒毛层羊膜；

5、(2)将经过步骤(1)处理后的无绒毛层羊膜进行清洗，得清洗后的无绒毛层羊膜；

6、(3)将清洗后的无绒毛层羊膜放入脱细胞试剂中进行脱细胞处理，得脱细胞羊膜；

7、(4)将脱细胞羊膜进行清洗，接着放入含天然提取物的乙醇溶液中进行浸泡处理；

8、(5)取出经步骤(4)处理过的脱细胞羊膜，再经干燥、剪切以及辐照灭菌后，得所述的脱细胞羊膜材料。

9、本发明提供了一种全新的脱细胞羊膜材料的制备方法；研究表明，在本发明所述的制备方法中，通过将脱细胞羊膜进行天然提取物浸泡处理制备得到的脱细胞羊膜材料，其具有较好的促进细胞增殖作用。

10、优选地，步骤(1)所述的胎盘在分离羊膜处理前，进行病原体筛查。

11、优选地，步骤(2)中所述的清洗，是指用含青霉素的生理盐水进行清洗。

12、优选地，所述的含青霉素的生理盐水中青霉素的浓度为0.1～0.3mg/ml。

13、最优选地，所述的含青霉素的生理盐水中青霉素的浓度为0.2mg/ml。

14、优选地，步骤(3)中所述的脱细胞试剂是指含有triton x-100以及脱氧胆酸钠的水溶液。

15、优选地，脱细胞试剂中triton x-100的含量为0.1～1g/ml；脱氧胆酸钠的含量为0.1～1g/ml；

16、最优选地，脱细胞试剂中triton x-100的含量为0.5g/ml；脱氧胆酸钠的含量为0.5g/ml。

17、优选地，步骤(4)含天然提取物的水溶液中的天然提取物通过如下方法制备得到：

18、藏红花和灵芝粉碎后用有机溶剂进行提取，提取结束后取提取液，浓缩干燥后得藏红花-灵芝有机溶剂提取物；

19、取藏红花-灵芝有机溶剂提取物即得所述的天然提取物。

20、优选地，所述的有机溶剂为丙酮。

21、优选地，藏红花和灵芝的重量比为4～6:1～3。

22、最优选地，藏红花和灵芝的重量比为5:2。

23、优选地，中药藏红花和灵芝的总重量与有机溶剂的用量比为1kg:8～12l。

24、最优选地，中药藏红花和灵芝的总重量与有机溶剂的用量比为1kg:10l。

25、优选地，所述的天然提取物的制备方法具体还包括如下步骤：

26、取藏红花-灵芝有机溶剂提取物，上大孔树脂柱；先用体积分数为26～29％的乙醇水溶液洗脱去除杂质；接着再用体积分数为41～43％的乙醇水溶液洗脱，收集体积分数为41～43％的乙醇水溶液洗脱下来的洗脱液，浓缩干燥后即得所述的天然提取物。

27、最优选地，所述的促进组织再生物质的制备方法具体还包括如下步骤：

28、取藏红花-灵芝有机溶剂提取物，上大孔树脂柱；先用体积分数为28％的乙醇水溶液洗脱去除杂质；接着再用体积分数为42％的乙醇水溶液洗脱，收集体积分数为42％的乙醇水溶液洗脱下来的洗脱液，浓缩干燥后即得所述的天然提取物。

29、在本发明所述制备方法中，将脱细胞羊膜采用将藏红花-灵芝有机溶剂提取物物进一步通过本发明上述大孔树脂洗脱条件制备得到的天然提取物进行浸泡处理，相比于采用藏红花-灵芝有机溶剂提取物作为天然提取物进行浸泡处理，可以大幅提高制备得到的脱细胞羊膜材料的促进细胞增殖作用。

30、此外，发明人在研究中还发现，本发明的大孔树脂洗脱条件也十分关键；将脱细胞羊膜必须采用将藏红花-灵芝有机溶剂提取物进一步通过本发明上述大孔树脂洗脱条件制备得到的天然提取物进行浸泡处理，相比于采用藏红花-灵芝有机溶剂提取物作为天然提取物进行浸泡处理，才能进一步大幅提高制备得到的脱细胞羊膜材料的促进细胞增殖作用；然而，采用将藏红花-灵芝有机溶剂提取物物进一步通过其它大孔树脂洗脱条件制备得到的天然提取物进行浸泡处理，并不能进一步大幅提高制备得到的脱细胞羊膜材料的促进细胞增殖作用。

31、优选地，骤(4)含天然提取物的乙醇溶液中天然提取物的质量分数为0.5～2％。

32、最优选地，骤(4)含天然提取物的乙醇溶液中天然提取物的质量分数为1％。

33、优选地，骤(4)含天然提取物的乙醇溶液中的乙醇溶液是指体积分数为75％的乙醇溶液。

34、优选地，步骤(4)中的浸泡处理的时间为3～6h。

35、最优选地，步骤(4)中的浸泡处理的时间为5h。

36、本发明还提供了一种上述制备方法制备得到的脱细胞羊膜材料。

37、本发明还提供了一种上述脱细胞羊膜材料在制备眼表修复材料中的应用。

38、有益效果：本发明提供了一种全新的脱细胞羊膜材料的制备方法；研究表明，在本发明所述的制备方法中，通过将脱细胞羊膜进行天然提取物浸泡处理制备得到的脱细胞羊膜材料，其具有较好的促进细胞增殖作用。因此，将本发明制备得到的脱细胞羊膜材料用于眼表损伤修复时，有助于缩短修复周期，具有重要的应用价值。

技术特征：

1.一种脱细胞羊膜材料的制备方法，其特征在于，包含如下步骤：

2.根据权利要求1所述的脱细胞羊膜材料的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述的胎盘在分离羊膜处理前，进行病原体筛查。

3.根据权利要求1所述的脱细胞羊膜材料的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述的清洗，是指用含青霉素的生理盐水进行清洗。

4.根据权利要求3所述的脱细胞羊膜材料的制备方法，其特征在于，所述的含青霉素的生理盐水中青霉素的浓度为0.1～0.3mg/ml；

5.根据权利要求1所述的脱细胞羊膜材料的制备方法，其特征在于，步骤(3)中所述的脱细胞试剂是指含有triton x-100以及脱氧胆酸钠的水溶液。

6.根据权利要求5所述的脱细胞羊膜材料的制备方法，其特征在于，脱细胞试剂中triton x-100的含量为0.1～1g/ml；脱氧胆酸钠的含量为0.1～1g/ml；

7.根据权利要求1所述的脱细胞羊膜材料的制备方法，其特征在于，步骤(4)含天然提取物的水溶液中的天然提取物通过如下方法制备得到：

8.根据权利要求1所述的脱细胞羊膜材料的制备方法，其特征在于，骤(4)含天然提取物的乙醇溶液中天然提取物的质量分数为0.5～2％；

9.权利要求1～8任一项所述的制备方法制备得到的脱细胞羊膜材料。

10.权利要求9所述的脱细胞羊膜材料在制备眼表修复材料中的应用。

技术总结本发明公开了一种脱细胞羊膜材料及其制备方法与在制备眼表修复材料中的应用。所述的制备方法，其包含如下步骤：(1)取胎盘，将羊膜从胎盘上进行分离，接着用细胞刮匙去除羊膜表面多余的组织，得无绒毛层羊膜；(2)将经过步骤(1)处理后的无绒毛层羊膜进行清洗，得清洗后的无绒毛层羊膜；(3)将清洗后的无绒毛层羊膜放入脱细胞试剂中进行脱细胞处理，得脱细胞羊膜；(4)将脱细胞羊膜进行清洗，接着放入含天然提取物的乙醇溶液中进行浸泡处理；(5)取出经步骤(4)处理过的脱细胞羊膜，再经干燥、剪切以及辐照灭菌后，得所述的脱细胞羊膜材料。研究表明，通过本发明所述方法制备得到的脱细胞羊膜材料，具有较好的促进细胞增殖作用。技术研发人员：官习鹏,钟杏霞,陈诗浩,曹昭昭受保护的技术使用者：广州悦清再生医学科技有限公司技术研发日：技术公布日：2024/8/16