一种和声绣球组培快繁的方法

本发明属于植物组织培养，具体涉及一种和声绣球组培快繁的方法。

背景技术：

1、和声绣球是绣球中非常珍贵的品种，原产美国东南部，冬季能耐-15℃，适用于华北以南地区栽培，引进我国后广受欢迎。和声绣球株型高大，成株高度100～150cm，冠幅80～150cm，枝条挺拔、耐热耐寒。花期为6～10月，其花朵密集呈圆锥形，花序可达30cm左右，初开花时顶端呈浅绿色，中后期花色逐渐转白，秋季昼夜温差大会使其逐渐晕染上粉红色，花瓣颜色及质地也使其成为很好的干花材料。然而，和声绣球的圆锥花序由众多无性花构成，故种子繁殖困难，扦插繁殖速度慢，成活率低，难以满足规模化的生产需求。通过植物组织培养，可快速繁殖优质苗木，解决市场供需问题。

2、现有技术，栎叶绣球‘雪花’再生体系的建立(聂绍虎，分子植物育种，2020年)中公开了以栎叶绣球‘雪花’叶片为培养材料，通过不同浓度的激素组合处理，得到不同的培养基，进而建立了栎叶绣球‘雪花’的再生体系。可以看出，目前针对栎叶绣球快繁的培养基主要是针对幼嫩叶片组织培养的培养基。然而，本发明人在实验中发现，使用上述方法对‘和声’进行组织培养时发现培养周期较长，整个培养周期需要8～9月，且增殖效果不显著。另外，和声绣球的叶片只在春夏季有幼嫩叶片产生，仅用叶片做外植体材料会受到限制导致供应不足。

3、因此，需要提供一种能够针对和声绣球组织培养的方法。

技术实现思路

1、为了解决现有技术中对于栎叶绣球组织培养过程中存在培养周期长，增值效果不佳的问题。本发明提供了和声绣球组培快繁的方法。

2、为了解决上述技术问题，本发明的技术方案如下。

3、一种和声绣球组培快繁的方法，包括以下步骤，

4、将预处理的和声绣球幼嫩茎段或顶芽接种到诱导培养基中，光照和黑暗交替培养，顶/腋芽开始萌动，形成带有愈伤组织的小芽；每升所述诱导培养基为：ms培养基4.73g，6-ba 1.0～2.0mg，iba 0.2mg；

5、将带有愈伤组织的小芽转接入芽增殖培养基中进行增殖培养，光照和黑暗交替培养，得到增殖苗；每升所述芽增殖培养基为：ms培养基4.73g，6-ba 2.0～2.5mg，iba 0.1mg；

6、切下增殖苗接种到生根培养基中，进行光照和黑暗交替培养至生根；每升所述生根培养基为：ms培养基4.73g，iba0.3～0.5mg。

7、由于和声绣球的幼嫩叶片仅在春夏季节出现，该方法受季节影响大，外植体材料受季节限制导致供应不足。本发明通过选用和声绣球幼嫩茎段或顶芽为培养组织，并设计了专门针对幼嫩茎段或顶芽快繁的培养基，通过控制诱导培养基和增殖培养基中6-ba的浓度，进而有效提高了芽诱导率、芽增值系数，使芽诱导率可达到81.6％，增值系数达到8，并且培养周期仅为100～125d，极大程度地缩短了培养周期，相比于现有技术的8～9个月的培养周期，本发明极大地缩短了培养周期。

8、在一个优选实施例中，所述预处理的和声绣球幼嫩茎段或顶芽的具体处理过程如下：

9、选取长势良好且无病虫害的当年生未木质化的幼嫩茎段或顶芽，剪切至3～4cm作为外植体，放入洁净的烧杯中，瓶口处用纱布覆盖，在流水下冲泡1～2h；在超净工作台上，用酒精溶液处理外植体1～2min，而后将其转入至0.1％升汞溶液中，充分浸泡5～8min，期间轻轻摇晃；用无菌水冲洗4～6次，滤干水分，切割成长度为1.0～1.5cm的小段，得到预处理的和声绣球幼嫩茎段或顶芽。

10、其中，0.1％升汞溶液的配置过程具体如下：称取升汞1克，加入1000毫升蒸馏水混合后，得到0.1％升汞溶液。

11、在一个优选实施例中，所述0.1％升汞溶液中浸泡的时间为5～8min。该浸泡时间下，不仅能够有效提高消毒污染率，同时还能够有效降低消毒死亡率。浸泡时间延长虽然能够提高消毒污染率，但是会导致消毒死亡率的增加，影响后续的组织培养。

12、在一个优选实施例中，所述酒精中浸泡的时间为1～2min。

13、在一个优选实施例中，所述酒精的浓度为70％。

14、在一个优选实施例中，所述诱导培养基、所述增殖培养基和所述生根培养基的ph均为5.8～6.0。

15、在一个优选实施例中，每升诱导培养基、每升芽增殖培养基和每升生根培养基均含有：蔗糖20～30g和琼脂粉6～8g。

16、在一个优选实施例中，所述带有愈伤组织的小芽的培养中，光照和黑暗交替培养的时间为50～60d；

17、所述增殖苗的培养中，光照和黑暗交替培养的时间为40～50d；

18、所述生根的培养中，光照和黑暗交替培养的时间为10～15d。

19、在一个优选实施例中，所述光照和黑暗替培养条件为：

20、温度为23～25℃；

21、光照强度为2300～2700lx，光照时间为14～16h；

22、黑暗时间为8～10h。

23、与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

24、(1)本发明提供了一种针对和声绣球组培快繁的方法，通过选用和声绣球幼嫩茎段或顶芽进行培养，有效解决了和声绣球叶片无法全年培养的问题。本发明中的培养基是专门针对幼嫩茎段或顶芽快繁的培养基，通过控制诱导培养基和增殖培养基中6-ba的浓度，进而有效提高了芽诱导率、芽增值系数，使芽诱导率可达到81.6％，增值系数达到8。利用本发明的方法，能够有效缩短培养周期，整个培养周期仅为100～125d。

25、(2)本发明采用0.1％升汞溶液和酒精对和声绣球幼嫩茎段或顶芽进行预处理，能够解决目前采用酒精和2％的次氯酸钠消毒对和声绣球叶片消毒中存在消毒不彻底的问题。并且通过控制在0.1％升汞溶液中的浸泡时间，在保证消毒效果的基础上，还能够有效降低了消毒死亡率。

26、(3)本发明整个组培方法易于操作，增殖扩繁比例高，商品率高，能够大大降低了生产成本，提高繁殖速度和苗的整齐度，并提高性状稳定性，从而建立更适合绣球-和声快速繁殖的工厂化生产体系。

技术特征：

1.一种和声绣球组培快繁的方法，其特征在于，包括以下步骤，

2.根据权利要求1所述的一种和声绣球组培快繁的方法，其特征在于，所述预处理的和声绣球幼嫩茎段或顶芽的具体处理过程如下：

3.根据权利要求2所述的一种和声绣球组培快繁的方法，其特征在于，所述0.1％升汞溶液中浸泡的时间为5～8min。

4.根据权利要求2所述的一种和声绣球组培快繁的方法，其特征在于，所述酒精中浸泡的时间为1～2min。

5.根据权利要求2所述的一种和声绣球组培快繁的方法，其特征在于，所述酒精的浓度为70％。

6.根据权利要求1所述的一种和声绣球组培快繁的方法，其特征在于，所述诱导培养基、所述增殖培养基和所述生根培养基的ph均为5.8～6.0。

7.根据权利要求1所述的一种和声绣球组培快繁的方法，其特征在于，每升诱导培养基、每升芽增殖培养基和每升生根培养基均含有：蔗糖20～30g和琼脂粉6～8g。

8.根据权利要求1所述的一种和声绣球组培快繁的方法，其特征在于，所述带有愈伤组织的小芽的培养中，光照和黑暗交替培养的时间为50～60d；

9.根据权利要求8所述的一种和声绣球组培快繁的方法，其特征在于，所述光照和黑暗替培养条件为：

技术总结本发明提供了一种和声绣球组培快繁的方法，属于植物组织培养技术领域，采用0.1％升汞溶液和酒精对和声绣球幼嫩茎段或顶芽进行预处理，在保证消毒效果的基础上，还能够有效降低了消毒死亡率。通过选用和声绣球幼嫩茎段或顶芽进行培养，有效解决了现有栎叶绣球培养方法周期长以及仅以幼嫩叶片作为外植体，材料受限制供应不足的问题，并针对幼嫩茎段或顶芽快繁设计的培养基，通过控制诱导培养基和增殖培养基中6‑BA的浓度，进而有效提高了芽诱导率、芽增殖系数，使芽诱导率可达到81.6％，增殖系数达到8。整个组培方法易于操作，增殖扩繁比例高，降低了生产成本，提高繁殖速度和苗的整齐度，从而建立和声绣球快速繁殖的工厂化生产体系。技术研发人员：胡晓晴,战杜鹃,朱强根,甄成,黄莉莉,汪晨鑫,章泽涛受保护的技术使用者：丽水学院技术研发日：技术公布日：2024/8/16