用于在宿主细胞中异源表达蛋白质的产物和方法与流程

本公开提供了用于在宿主细胞中异源表达蛋白质的产物和方法。所提供的表达构建体、宿主细胞和方法产生增加所关注的异源蛋白质的产率的pnlp-1辅助蛋白。通过引用对序列表的并入本申请含有作为本公开的单独部分的计算机可读形式的序列表(文件名：57385_seqlisting.xml；3,457字节，创建于：2022年12月7日)，所述申请通过引用以其整体并入本文。

背景技术：

1、在如大肠杆菌(e.coli)等宿主细胞中异源表达蛋白质的核心挑战之一是形成错误折叠的蛋白质结构或不溶性蛋白质产物。在天然大肠杆菌系统中，分子伴侣蛋白介导细胞蛋白质的正确折叠。在大肠杆菌中表达的异源蛋白质通常不能被天然大肠杆菌分子伴侣正确折叠和溶解。已示出，表达来自生物体的非天然分子伴侣可以帮助介导异源蛋白质的正确折叠。因此，鉴定促进折叠的新型非天然分子伴侣是持续发展的领域。

2、本领域仍然需要用于异源蛋白质表达的经改善的宿主细胞和方法。

技术实现思路

1、本公开提供了用于在宿主细胞中制备异源蛋白质的产物和方法。

2、在本文中示出了革兰氏阴性细菌中生根瘤菌(mesorhizobium sp.)root172的蛋白质以增加宿主细胞，如细菌宿主细胞中的所关注的异源蛋白质的滴度。所述蛋白质在本文中被称为“pnlp-1”辅助蛋白。所述蛋白质先前在www.uniprot.org/uniprot/a0a0q8khv0上被称为假定的烷基氢过氧化物还原酶c。pnlp-1辅助蛋白的氨基酸序列描述于seq idno:2。

3、本公开提供了一种表达构建体，其包括：a)编码seq id no:2的辅助蛋白的多核苷酸，b)编码包括与seq id no:2至少90％相同的氨基酸序列的辅助蛋白的多核苷酸，或c)编码seq id no:2的辅助蛋白或编码包括与seq id no:2至少90％相同的氨基酸序列的辅助蛋白的多核苷酸，以及编码所关注的蛋白质的多核苷酸。所述辅助蛋白可以是中生根瘤菌root172蛋白。所述辅助蛋白可以是包括异源信号肽的融合蛋白。

4、本文所提供的编码表达构建体中的辅助蛋白的多核苷酸可以包括seq id no:1。所述编码所述辅助蛋白的多核苷酸可以与异源启动子可操作地连接。所述异源启动子可以是诱导型启动子或组成型启动子。所述表达构建体可以是染色体外构建体。所述表达构建体可以进一步包括以下中的一种或多种：异源启动子，所述异源启动子与编码所关注的蛋白质的多核苷酸可操作地连接；细菌复制起点；以及核糖体结合位点。

5、由本文提供的表达构建体编码的所关注的蛋白质可以是抗体产物、t细胞受体、嵌合抗原受体、酶或其任何片段。所关注的蛋白质可以含有一个或多个二硫键。

6、本公开提供了宿主细胞，其包括：a)本文所提供的表达构建体，或b)本文所提供的表达构建体和第二表达构建体，所述表达构建体不包含编码所关注的蛋白质的多核苷酸，所述第二表达构建体包括编码所关注的蛋白质的多核苷酸。所述宿主细胞可以是原核细胞。原核宿主细胞可以是大肠杆菌细胞。所述宿主细胞可以是真核细胞。真核宿主细胞可以是酵母细胞、昆虫细胞或哺乳动物细胞。

7、本文所提供的宿主细胞可以包括以下中的一种或多种：a)至少一种编码用于至少一个诱导型启动子的诱导物的转运蛋白的基因的基因功能的改变；b)至少一种编码使至少一个诱导型启动子的诱导物代谢的蛋白质的基因的基因功能的水平降低；c)至少一种编码涉及至少一个诱导型启动子的诱导物的生物合成的蛋白质的基因的基因功能的水平降低；d)影响宿主细胞质的还原/氧化环境的基因的基因功能的改变；e)编码还原酶的基因的基因功能的水平降低；f)至少一种编码至少一种二硫键异构酶蛋白的表达构建体；g)至少一种编码缺乏信号肽的dsbc形式的多核苷酸；以及h)至少一种编码ervlp的多核苷酸。

8、本公开提供了用于产生所关注的蛋白质的方法，所述方法包括在允许表达所述所关注的蛋白质的条件下温育本文所提供的宿主细胞。所述方法可以进一步包括纯化所述所关注的蛋白质。

9、本公开还提供了增加正确折叠的所关注的蛋白质的滴度的方法，所述方法包括在允许表达所述所关注的蛋白质的条件下温育本文所提供的宿主细胞。

技术特征：

1.一种表达构建体，其包括：

2.根据权利要求1所述的表达构建体，其中所述辅助蛋白是中生根瘤菌(mesorhizobium sp.)root172蛋白。

3.根据权利要求1或2所述的表达构建体，其中所述辅助蛋白包括seq id no:2。

4.根据权利要求1、2或3所述的表达构建体，其中所述辅助蛋白是包括异源信号肽的融合蛋白。

5.根据权利要求1、2、3或4所述的表达构建体，其中所述编码所述辅助蛋白的多核苷酸包括seq id no:1。

6.根据权利要求1、2、3、4或5所述的表达构建体，其中所述编码所述辅助蛋白的多核苷酸与异源启动子可操作地连接。

7.根据权利要求6所述的表达构建体，其中所述异源启动子是诱导型启动子或组成型启动子。

8.根据权利要求1、2、3、4、5、6或7所述的表达构建体，其中所述表达构建体是染色体外构建体。

9.根据权利要求1、2、3、4、5、6、7或8所述的表达构建体，其进一步包括异源启动子、细菌复制起点和核糖体结合位点中的一个或多个。

10.根据权利要求1、2、3、4、5、6、7、8或9所述的表达构建体，其中所述所关注的蛋白质是抗体产物、t细胞受体、嵌合抗原受体、酶或其任何片段。

11.根据权利要求1、2、3、4、5、6、7、8、9或10所述的表达构建体，其中所述所关注的蛋白质含有一个或多个二硫键。

12.一种宿主细胞，其包括：

13.根据权利要求12所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞是原核细胞。

14.根据权利要求13所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞是大肠杆菌(e.coli)细胞。

15.根据权利要求14所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞是真核细胞。

16.根据权利要求15所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞是酵母细胞、昆虫细胞或哺乳动物细胞。

17.根据权利要求12所述的宿主细胞，其中所述细胞包括以下中的一种或多种：

18.一种用于产生所关注的蛋白质的方法，所述方法包括在允许表达所述所关注的蛋白质的条件下温育根据权利要求10、11、12、13、14、15、16或17所述的宿主细胞。

19.根据权利要求18所述的方法，其进一步包括纯化所述所关注的蛋白质。

20.一种增加正确折叠的所关注的蛋白质的滴度的方法，所述方法包括在允许表达所述所关注的蛋白质的条件下温育根据权利要求10、11、12、13、14、15、16或17所述的宿主细胞。

技术总结本公开提供了用于在宿主细胞中异源表达蛋白质的产物和方法。所提供的表达构建体、细菌细胞和方法产生增加所关注的异源蛋白质的产率的PnlP‑1辅助蛋白。技术研发人员：M·甘德,A·E·多纳,C·瑞索,G·汉纳姆,A·施瓦茨受保护的技术使用者：ABSCI公司技术研发日：技术公布日：2024/8/16