自生物矿化修饰的溶瘤腺病毒及其制备方法与应用与流程

本发明涉及一种自生物矿化修饰的溶瘤腺病毒及其制备方法与应用，涉及生物矿化、溶瘤病毒治疗领域和药物感染效率优化领域。

背景技术：

1、溶瘤腺病毒(oadv)是一种有前景的癌症治疗剂，它能够选择性地感染和杀死癌细胞，而对正常细胞影响较小。然而，oadv在体内的应用受到多种因素的限制，如肝固存和宿主免疫反应等。为提高oadv的感染效率和治疗效果，研究人员可通过基因工程手段对oadv进行改造，例如，研究人员可能会对oadv的衣壳进行改造，使其能够更有效地识别和结合到癌细胞表面的特定受体上。此外，还有一些研究尝试通过改变oadv的基因组，使其能够表达具有抗肿瘤作用的蛋白质。但现有的改造方法往往需要复杂的操作，且可能对oadv的稳定性产生影响；而且，由于宿主免疫反应的存在，oadv在体内的寿命较短，这限制了其治疗效果；此外，oadv的感染效率还受到癌细胞上car表达水平的限制，这使得oadv对某些类型的癌症的治疗效果不佳。

技术实现思路

1、针对上述现有技术，为提高oadv的稳定性和免疫原性，改善oadv在体内的寿命，本发明提供了一种自生物矿化修饰的溶瘤腺病毒及其制备方法与应用。

2、本发明是通过以下技术方案实现的：

3、一种自生物矿化修饰的溶瘤腺病毒的制备方法，步骤如下：

4、(一)将w6p基因与载体连接，构建含有w6p基因的重组腺病毒表达载体；转染，病毒包装，扩增和纯化，得到oadv-w6p；

5、(二)通过生理条件，使得磷酸钙矿化在生物条件下被生物诱导到oadv的表面，形成矿物外观，得到自生物矿化修饰的溶瘤腺病毒。

6、进一步地，所述w6p基因的核苷酸序列如seq id no.2所示。

7、进一步地，所述载体为padeasy-1载体。

8、进一步地，所述步骤(二)的具体操作为：将oadv-w6p与cacl2-k2hpo4混合溶液混合，混合溶液中cacl2的浓度为10mm，k2hpo4的浓度为5mm，调节溶液的ph值至7.4，在37℃下孵育24小时，在此过程中，磷酸钙矿化在被生物诱导到oadv的表面，磷酸钙晶体在oadv的表面析出，形成矿物外观，得到自生物矿化修饰的溶瘤腺病毒oadv-w6-cap。

9、利用上述方法制备得到的自生物矿化修饰的溶瘤腺病毒。

10、上述自生物矿化修饰的溶瘤腺病毒在制备抗肿瘤药物中的应用。

11、进一步地，所述自生物矿化修饰的溶瘤腺病毒联合pd-1抑制因子或cd47抑制因子在制备抗肿瘤药物中的应用。

12、进一步地，所述肿瘤选自胰腺癌、乳腺癌、结直肠癌等。

13、本发明的自生物矿化修饰的溶瘤腺病毒，经研究发现，不仅提高了car阴性癌症细胞的感染效率和治疗效果，而且保护它们免受预先存在的中和抗体的中和。本发明的研究还发现，在小鼠皮下肿瘤模型中，通过全身注射oadv-w6-cap，显示出提高的抗肿瘤有效性。本发明的研究还发现，oadv-w6-cap引发的抗癌免疫反应依赖于cd8+t细胞，其介导对同一肿瘤的长期免疫记忆和全身抗肿瘤免疫。本发明的研究还发现，通过加入pd-1或cd47抑制因子，可增强oadv-w6-cap的抗癌功效，并提高荷瘤动物的完全缓解率。

14、本发明的自生物矿化修饰的溶瘤腺病毒，取得了如下有益效果：

15、(1)本发明通过在活oadv表面基因工程潜在成核肽w6p，赋予了oadv自我生物矿化的能力，提高了其启动cap矿化的能力，从而解决了car依赖性细胞进入的局限性，并提高了oadv的转导效率。

16、(2)本发明的oadv-w6-cap系统保护腺病毒免受预先存在的抗体的中和，避免了先天免疫反应，并在多种小鼠皮下肿瘤模型中取得了显着的抗肿瘤疗效。这一结果表明，本发明的oadv-w6-cap系统在提高oadv的治疗效果方面具有显著优势。

17、(3)本发明的oadv-w6-cap与pd-1或cd47阻断联合应用在小鼠肿瘤模型中也取得了良好的疗效，表明本发明的oadv-w6-cap系统可以与其他抗癌治疗方式联合使用，提高治疗效果。

18、(4)本发明的oadv-w6-cap在表达car高和car阴性的癌症细胞中的转导效率显著提高，克服了car缺乏型肿瘤中的低基因转移效率，显示出了优于现有技术的感染效率。

19、(5)本发明的oadv-w6-cap上调了癌症细胞中pd-l1的表达，可能使肿瘤对免疫检查点阻断敏感，从而提高了治疗效果。

20、本发明的自生物矿化修饰的溶瘤腺病毒，提高了oadv的稳定性和免疫原性，改善了oadv在体内的寿命，提高了治疗效果；而且，克服了癌细胞上car表达水平的限制，提高了oadv的感染效率。本发明的自生物矿化修饰的溶瘤腺病毒，在生物矿化技术、溶瘤病毒治疗以及药物感染效率优化等应用领域可以有广泛的应用，特别是在生物矿化技术领域，本发明通过在活oadv表面基因工程潜在成核肽w6p，赋予了腺病毒自我生物矿化的能力，这一创新性的方法有望在生物材料制备、组织修复等领域得到应用。在溶瘤病毒治疗领域，本发明的oadv-w6-cap系统保护腺病毒免受预先存在的抗体的中和，避免了先天免疫反应，并在多种小鼠皮下肿瘤模型中取得了显着的抗肿瘤疗效，展示了广阔的临床应用前景。在药物感染效率优化领域，本发明的oadv-w6-cap基因转移效率的倍数增加与癌症细胞中car表达水平呈负相关，这一发现为提高药物感染效率提供了新的思路和方法。同时，本发明的oadv-w6-cap还可能与其他免疫治疗药物联合使用，以增强对癌症的免疫反应，满足了市场对高效、安全的癌症治疗方案的需求。

21、本发明使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义。

技术特征：

1.一种自生物矿化修饰的溶瘤腺病毒的制备方法，其特征在于，步骤如下：

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述w6p基因的核苷酸序列如seq idno.2所示。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述载体为padeasy-1载体。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(二)的具体操作为：将oadv-w6p与cacl2-k2hpo4混合溶液混合，混合溶液中cacl2的浓度为10mm，k2hpo4的浓度为5mm，调节溶液的ph值至7.4，在37℃下孵育24小时，在此过程中，磷酸钙矿化在被生物诱导到oadv的表面，磷酸钙晶体在oadv的表面析出，形成矿物外观，得到自生物矿化修饰的溶瘤腺病毒oadv-w6-cap。

5.利用权利要求1～4中任一项所述的制备方法制备得到的自生物矿化修饰的溶瘤腺病毒。

6.权利要求5所述的自生物矿化修饰的溶瘤腺病毒在制备抗肿瘤药物中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述自生物矿化修饰的溶瘤腺病毒联合pd-1抑制因子或cd47抑制因子在制备抗肿瘤药物中的应用。

8.根据权利要求6或7所述的应用，其特征在于：所述肿瘤选自胰腺癌、乳腺癌、结直肠癌。

技术总结本发明公开了一种自生物矿化修饰的溶瘤腺病毒，涉及生物矿化技术领域、溶瘤病毒治疗领域和药物感染效率优化领域，通过以下方法制备得到：(一)将W6p基因与载体连接，构建重组腺病毒表达载体；转染，病毒包装，扩增和纯化，得到oADV‑W6p；(二)通过生理条件，使得磷酸钙矿化在生物条件下被生物诱导到oADV的表面，形成矿物外观，即得。所述自生物矿化修饰的溶瘤腺病毒在制备抗肿瘤药物中的应用。本发明的自生物矿化修饰的溶瘤腺病毒，提高了oADV的稳定性和免疫原性，改善了oADV在体内的寿命，克服了癌细胞上CAR表达水平的限制，提高了oADV的感染效率。本发明的自生物矿化修饰的溶瘤腺病毒，在生物矿化技术、溶瘤病毒治疗以及药物感染效率优化等应用领域有广泛的应用。技术研发人员：王世兵,牟晓洲受保护的技术使用者：浙江省人民医院技术研发日：技术公布日：2024/8/20