NbRALF5成熟多肽、烟草瞬时表达促进调节剂及其制备方法和应用

本发明属于植物多肽，尤其涉及到一种nbralf5成熟多肽、烟草瞬时表达促进调节剂及其制备方法和应用。

背景技术：

1、烟草作为一种经典的模式植物，其在科学研究领域的重要性尤为突出，特别是在外源基因的瞬时表达研究方面。烟草植物的叶片结构特性使其容易通过农杆菌介导的方法进行遗传转化，这一过程不仅操作简便，而且转化效率高，能在短时间内实现目标基因的有效导入。一旦基因成功转入，烟草细胞能够迅速启动外源基因的表达，通常在几天内即可观测到相应的表型变化或蛋白质产物，为研究人员提供了一个快速验证基因功能和蛋白质特性(如活性、定位)的高效平台。

2、此外，烟草瞬时表达系统还具备高通量处理能力，能够在短时间内生产大量的重组蛋白，极大提高了生产效率，降低了成本，这对于生物制药、工业酶制剂的规模化生产，以及农业生物制品的开发而言，是一个极具吸引力的选择。尤其是在面对全球性疫情或突发公共卫生事件时，快速响应的蛋白生产能力显得尤为重要。在代谢工程研究中，烟草同样展现出巨大潜力。通过瞬时过表达或抑制调控代谢途径的关键酶，科研人员可以在短期内重新编程烟草的次生代谢，定向合成高价值的天然产物，如抗氧化剂、抗癌药物前体以及其他具有药用价值的化合物。这种方法不仅缩短了从实验室到产业化的周期，也拓宽了利用植物生产特殊化学品的可行路径。

3、不过，要充分挖掘烟草瞬时表达系统的潜力，提升表达效率和目标产物的专一性是当前面临的主要挑战。这要求科研人员不断探索和开发新型的基因表达调控工具，如优化的启动子、rna干扰技术、crispr-cas系统以及高效的翻译调控元件，以实现对外源基因表达的精细化控制。这些技术进步不仅将加速作物遗传改良的步伐，推动医药蛋白的高效生产，还将为解析生命科学的基本问题提供强大的技术支撑，进一步拓展植物生物技术的应用边界。ralf是一种已知对植物生长发育有显著影响的多肽激素。研究表明，这类多肽能调控植物细胞增殖、分化和应激响应，但其在基因表达调控中的具体作用机制，尤其是在瞬时表达系统中的应用，尚未得到充分探索。

技术实现思路

1、本发明提供一种nbralf5成熟多肽、烟草瞬时表达促进调节剂及其制备方法和应用，该nbralf5成熟多肽烟草瞬时表达促进剂可以提高重组蛋白在烟草中的表达水平，显著促进烟草瞬时表达效率。

2、为了解决上述技术问题，本发明提供了一种nbralf5成熟多肽，所述nbralf5成熟多肽的氨基酸序列如下所示：

3、pcsrrgasyynckpgaqanpysrgcsaitrcrs。

4、本发明还提供了一种nbralf5成熟多肽烟草瞬时表达促进调节剂，所述烟草瞬时表达促进调节剂以nbralf5成熟多肽为主要功能成份，所述nbralf5成熟多肽的氨基酸序列如下所示：

5、pcsrrgasyynckpgaqanpysrgcsaitrcrs。

6、作为优选，所述烟草瞬时表达促进调节剂中加入有选自乙酰丁香酮、mgcl2的辅助剂。

7、本发明还提供了上述任一项技术方案所述的nbralf5成熟多肽烟草瞬时表达促进调节剂的制备方法，包括如下步骤：

8、将nbralf5成熟多肽粉末溶解于水中，配制成浓度为30mmol/l的nbralf5成熟多肽母液，备用；

9、将定量的2-(n-吗啉)乙磺酸一水合物加入到配制的ms液体培养基中，配制成3-5mmol/l的2-(n-吗啉)乙磺酸溶液，调节溶液ph值为5.8-6.0，充分混合，溶解均匀后，得到2-(n-吗啉)乙磺酸溶液；

10、将所得nbralf5成熟多肽母液加入到2-(n-吗啉)乙磺酸溶液中，搅拌均匀，得到nbralf5成熟多肽烟草瞬时表达促进剂。

11、作为优选，nbralf5成熟多肽的浓度为20-30μmol/l，2-(n-吗啉)乙磺酸的浓度为3mmol/l。

12、可以理解的是，上述s1、s2步骤可以相互替换，可以s1在先配制，也可以s2在先配制，这里并不做具体要求。此外，所配制的nbralf5成熟多肽母液需现用现配，若超过30天不使用，母液-70℃储存；若30天之内使用，母液-20℃储存，一周之内4℃储存即可。

13、本发明还提供了一种根据上述任一项技术方案所述的nbralf5成熟多肽烟草瞬时表达促进剂在提高烟草瞬时表达方面的应用。

14、作为优选，应用时，包括两种操作方式：

15、将nbralf5成熟多肽添加到烟草瞬时表达侵染液中，即可提高烟草瞬时表达效率；或者

16、利用nbralf5成熟多肽2-(n-吗啉)乙磺酸溶液处理待侵染烟草，使其充分吸收成熟多肽溶液，提高瞬时转化效率。

17、作为优选，将nbralf5成熟多肽添加到烟草瞬时表达侵染液中时，所述烟草瞬时表达促进调节剂仅包含nbralf5成熟多肽，其工作浓度在20-30μmol/l，ph 6.0。

18、作为优选，利用nbralf5成熟多肽2-(n-吗啉)乙磺酸溶液处理待侵染烟草时，至少提前一周将待侵染烟草放入含有nbralf5成熟多肽的营养液中，使nbralf5成熟多肽被充分吸收。

19、作为优选，nbralf5成熟多肽的浓度范围为20-30μmol/l，2-(n-吗啉)乙磺酸的浓度为3-5mmol/l，且溶液的ph值维持在5.8-6.0之间。

20、作为优选，2-(n-吗啉)乙磺酸水溶液通过将2-(n-吗啉)乙磺酸一水合物融入ms液态培养介质制备而成。

21、可以理解的是，选用2-(n-吗啉)乙磺酸作为nbralf5成熟多肽的溶剂是鉴于它作为一种创新生物缓冲剂，能更有效地辅助肽段发挥其预期效能。值得注意的是，nbralf5成熟肽段浓度可灵活选取20-30μmol/l之间的任意值，2-(n-吗啉)乙磺酸的浓度可具体为3、4或5mmol/l，溶液ph亦可精确到5.8或6.0。

22、本发明所取得的积极优势和有益效果在于：

23、1、本发明提供的nbralf5成熟多肽瞬时表达促进剂中的nbralf5成熟多肽为人工合成得到的成熟多肽，获取便利，可大批量合成；

24、2、本发明提供的烟草瞬时表达促进剂的配制和使用方法简单，可操作性强，对于施用人员不需要经过特殊培训，操作便利、实用；

25、3、本发明提供的烟草瞬时表达促进剂对蛋白表达增强效果明显，不会造成不良反应，效果有益。

技术特征：

1.一种nbralf5成熟多肽，其特征在于，所述nbralf5成熟多肽的氨基酸序列如下所示：

2.一种nbralf5成熟多肽烟草瞬时表达促进调节剂，其特征在于，所述烟草瞬时表达促进调节剂以nbralf5成熟多肽为主要功能成份，所述nbralf5成熟多肽的氨基酸序列如下所示：

3.根据权利要求2所述的烟草瞬时表达促进调节剂，其特征在于，所述烟草瞬时表达促进调节剂中加入有选自乙酰丁香酮、mgcl2的辅助剂。

4.根据权利要求3所述的nbralf5成熟多肽烟草瞬时表达促进调节剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，nbralf5成熟多肽的浓度为20-30μmol/l，2-(n-吗啉)乙磺酸的浓度为3mmol/l。

6.根据权利要求2或3所述的nbralf5成熟多肽烟草瞬时表达促进剂在提高烟草瞬时表达方面的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，应用时，包括两种操作方式：

8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，将nbralf5成熟多肽添加到烟草瞬时表达侵染液中时，所述烟草瞬时表达促进调节剂仅包含nbralf5成熟多肽，其工作浓度在20-30μmol/l，ph 6.0。

9.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，利用nbralf5成熟多肽2-(n-吗啉)乙磺酸溶液处理待侵染烟草时，至少提前一周将待侵染烟草放入含有nbralf5成熟多肽的营养液中，使nbralf5成熟多肽被充分吸收。

10.根据权利要求9述的应用，其特征在于，nbralf5成熟多肽的浓度范围为20-30μmol/l，2-(n-吗啉)乙磺酸的浓度为3-5mmol/l，且溶液的ph值维持在5.8-6.0之间；

技术总结本发明提供了一种NbRALF5成熟多肽、烟草瞬时表达促进调节剂及其制备方法和应用，属于植物多肽技术领域。本发明提供的NbRALF5成熟多肽的氨基酸序列如下所示：PCSRRGASYYNCKPGAQANPYSRGCSAITRCRS。该NbRALF5成熟多肽烟草瞬时表达促进剂可以提高重组蛋白在烟草中的表达水平，显著促进烟草瞬时表达效率。技术研发人员：赵薇,张湘茹,移健琛,杨晓北,卢敬晗,孙雨娜,周路阳受保护的技术使用者：河北工程大学技术研发日：技术公布日：2024/8/20