一种脐带间充质干细胞原代培养基微载体培养工艺的制作方法

本发明属于细胞培育，尤其涉及一种脐带间充质干细胞原代培养基微载体培养工艺。

背景技术：

1、脐带间充质干细胞(uc-mscs)是一种来源于脐带间充质组织的多能干细胞，脐带是连接胎儿和胎盘的组织，脐带间充质是脐带的一部分，其中含有丰富的干细胞资源，uc-mscs具有许多独特的特性和潜在的临床应用价值。

2、脐带间充质干细胞在利用微载体进行培育过程中需要利用到培养板对细胞进行培育，而培养板在对细胞培育过程中需要将培养板转运到培养箱内部进行培养，而培养板在转运过程中需要人员进行拿取，人员在对培养板进行拿取过程中易产地摆动，从而造成细胞在运输过程中受到机械刺激或损伤的问题。

技术实现思路

1、本发明针对现有技术中培养板在转运过程中需要人员进行拿取，人员在对培养板进行拿取过程中易产地摆动，从而造成细胞在运输过程中受到机械刺激或损伤的问题，提出如下技术方案：

2、一种脐带间充质干细胞原代培养基微载体培养工艺，该工艺包括以下步骤：

3、步骤一：制备微载体：选取符合要求的微载体用的材料。

4、步骤二：优化培养基配方：针对脐带间充质干细胞的特性，优化培养基配方。

5、步骤三：微载体培养：将脐带间充质干细胞原代接种到预先制备的微载体上，利用微载体提供的三维支架结构，提供更接近自然生理环境的生长环境。

6、步骤四：预培养：将三维支架结构放入到培养板内部，然后将培养板放入到培养箱内部进行培养；

7、步骤五：优化培养条件：通过培养箱对培养环境进行调控；

8、步骤六：添加培养液：待预培养完成后，沿着细胞培养板内壁缓慢补加步骤二中的优化培养基配方，使其完全没过整个三维支架；

9、步骤七：再次培养：将通过步骤六的培养板放入培养箱进行再次培养；

10、步骤八：细胞检测和鉴定：对培养后的脐带间充质干细胞进行检测和鉴定。

11、优选的，所述培养板内部一体成型有多个凹环，所述凹环内部活动连接有平稳度机构，所述平稳度机构包括活动连接于凹环内部的圆球，所述圆球顶端安装有培养皿，所述培养皿内部安装有三维支架，所述圆球底端安装有配重锥形体，所述凹环内部以圆球的中心点成圆周阵列贯穿连接有四个支撑柱，四个所述支撑柱底端均一体成型有螺纹杆，所述培养板底端固定安装有同步连接机构。

12、优选的，所述圆球顶端一体成型有丝杆，所述丝杆和培养皿之间通过螺纹连接，所述培养皿底端对应丝杆外侧位置处开设有螺纹槽，所述圆球底端一体成型有螺纹柱且螺纹柱和配重锥形体之间通过螺纹连接，所述配重锥形体顶端焊接有内螺纹环，所述内螺纹环和螺纹柱外侧之间通过螺纹连接。

13、优选的，所述螺纹柱外侧设置有十字杆，所述十字杆顶端四角处均一体成型有内螺纹套环，所述内螺纹套环和螺纹杆之间通过螺纹连接。

14、优选的，所述十字杆顶端对称嵌入安装有套管，所述套管内壁粘接有橡胶挤压垫，所述橡胶挤压垫内部通过摩擦滑动连接有圆杆且圆杆顶端和凹环底端之间固定连接。

15、优选的，所述同步连接机构包括固定安装于培养板底端的定位套且定位套的数量共设置为两个，所述定位套内部滑动连接有限位杆，所述限位杆底端卡接安装有工字板，所述工字板顶端对称嵌入安装有固定销，所述固定销外侧转动连接有转动板。

16、优选的，所述十字杆一端位于转动板一侧位置处开设有定位槽，所述定位槽的高度等于转动板的厚度。

17、优选的，所述凹环内壁和培养皿外侧之间的间距为0.5cm，所述凹环、培养皿和圆球三者之间的中心点处于同一垂直线上。

18、优选的，所述橡胶挤压垫的内径小于圆杆的外径。

19、本发明的有益效果为：

20、(1)防止由于培养板在转运过程中人员拿取时因抖动而造成培养皿内部的三维支架产生晃动的问题，从而可以确保细胞在培养过程中得到良好的支撑和附着，避免细胞在运输过程中受到不必要的机械刺激或损伤，有利于细胞的正常生长和稳定扩增，同时可以减少细胞的损失和培养基的浪费，降低成本，提高资源利用效率；

21、(2)使得培养皿在放置过程中保持稳定的状态，防止培养皿在放置过程中由于外界震动或者风而导致产生培养皿产生偏转的问题，进而使得培养皿更加稳定，进一步使得培养皿内部的三维支架更加稳定，稳定的三维支架能够提供一致的生长环境，有助于保持培育条件的稳定性和一致性，从而确保培育结果的准确性和可重复性；

22、(3)能够对培养皿的角度进行偏转的目的，偏转后的培养皿导致细胞在不同区域受到不同的力学刺激，促使细胞形态发生变化，增加细胞形态的多样性，同时模拟细胞在体内受到的力学环境，有助于研究细胞在生理条件下的生长和功能表现。

技术特征：

1.一种脐带间充质干细胞原代培养基微载体培养工艺，其特征在于，该工艺包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种脐带间充质干细胞原代培养基微载体培养工艺，其特征在于，所述培养板(1)内部一体成型有多个凹环(2)，所述凹环(2)内部活动连接有平稳度机构(3)，所述平稳度机构(3)包括活动连接于凹环(2)内部的圆球(31)，所述圆球(31)顶端安装有培养皿(33)，所述培养皿(33)内部安装有三维支架(4)，所述圆球(31)底端安装有配重锥形体(35)，所述凹环(2)内部以圆球(31)的中心点成圆周阵列贯穿连接有四个支撑柱(36)，四个所述支撑柱(36)底端均一体成型有螺纹杆(37)，所述培养板(1)底端固定安装有同步连接机构(5)。

3.根据权利要求2所述的一种脐带间充质干细胞原代培养基微载体培养工艺，其特征在于，所述圆球(31)顶端一体成型有丝杆(32)，所述丝杆(32)和培养皿(33)之间通过螺纹连接，所述培养皿(33)底端对应丝杆(32)外侧位置处开设有螺纹槽，所述圆球(31)底端一体成型有螺纹柱(34)且螺纹柱(34)和配重锥形体(35)之间通过螺纹连接，所述配重锥形体(35)顶端焊接有内螺纹环，所述内螺纹环和螺纹柱(34)外侧之间通过螺纹连接。

4.根据权利要求3所述的一种脐带间充质干细胞原代培养基微载体培养工艺，其特征在于，所述螺纹柱(34)外侧设置有十字杆(39)，所述十字杆(39)顶端四角处均一体成型有内螺纹套环(38)，所述内螺纹套环(38)和螺纹杆(37)之间通过螺纹连接。

5.根据权利要求4所述的一种脐带间充质干细胞原代培养基微载体培养工艺，其特征在于，所述十字杆(39)顶端对称嵌入安装有套管(310)，所述套管(310)内壁粘接有橡胶挤压垫(311)，所述橡胶挤压垫(311)内部通过摩擦滑动连接有圆杆(312)且圆杆(312)顶端和凹环(2)底端之间固定连接。

6.根据权利要求2所述的一种脐带间充质干细胞原代培养基微载体培养工艺，其特征在于，所述同步连接机构(5)包括固定安装于培养板(1)底端的定位套(51)且定位套(51)的数量共设置为两个，所述定位套(51)内部滑动连接有限位杆(52)，所述限位杆(52)底端卡接安装有工字板(53)，所述工字板(53)顶端对称嵌入安装有固定销(54)，所述固定销(54)外侧转动连接有转动板(55)。

7.根据权利要求5所述的一种脐带间充质干细胞原代培养基微载体培养工艺，其特征在于，所述十字杆(39)一端位于转动板(55)一侧位置处开设有定位槽(313)，所述定位槽(313)的高度等于转动板(55)的厚度。

8.根据权利要求2所述的一种脐带间充质干细胞原代培养基微载体培养工艺，其特征在于，所述凹环(2)内壁和培养皿(33)外侧之间的间距为0.5cm，所述凹环(2)、培养皿(33)和圆球(31)三者之间的中心点处于同一垂直线上。

9.根据权利要求6所述的一种脐带间充质干细胞原代培养基微载体培养工艺，其特征在于，所述橡胶挤压垫(311)的内径小于圆杆(312)的外径。

技术总结本发明属于细胞培育技术领域，公开了一种脐带间充质干细胞原代培养基微载体培养工艺，包括以下步骤：步骤一：制备微载体：选取符合要求的微载体用的材料。步骤二：优化培养基配方：针对脐带间充质干细胞的特性，优化培养基配方。步骤三：微载体培养：将脐带间充质干细胞原代接种到预先制备的微载体上，利用微载体提供的三维支架结构，提供更接近自然生理环境的生长环境。能够使得培养板在运输过程中内部的培养皿和三维支架保持稳定，确保细胞在培养过程中得到良好的支撑和附着，避免细胞在运输过程中受到不必要的机械刺激或损伤，有利于细胞的正常生长和稳定扩增，同时可以减少细胞的损失和培养基的浪费，降低成本，提高资源利用效率。技术研发人员：谢振卿,潘挺,刘欢,王迪,莫有鸿,王汉裕受保护的技术使用者：广州科厉生物科技有限公司技术研发日：技术公布日：2024/8/27