云木香内酯及其药物组合物和应用

本发明属于药物。具体地，涉及云木香内酯a-n(lappanolides a-n,1-14)，及其制备方法和应用、药物组合物及其应用。

背景技术：

1、乙型肝炎病毒(hbv)是一种全球性传播的非细胞病变的嗜肝病毒，属于dna病毒，其感染导致的病毒型肝炎是全球四大传染病之一，严重者可致人死亡。据统计，目前全世界约有3亿人患有慢性hbv感染，全球每年新增感染超过150万，每年近100万人死于并发症。hbv慢性感染后可导致肝损伤，从而增加肝癌(hcc)的罹患。尽管出现了能够有效抑制病毒复制的强效抗病毒药物如：核苷/核苷酸类似物(na)和干扰素-α(ifn-α)，但由于共价闭环圆形dna(cccdna)的持续存在、hbv-dna整合到宿主基因组和免疫反应受损，乙肝病毒的治愈仍然很难实现。大多数患者通常需要终身服用此类药物，并且进行无限期的治疗以维持病毒抑制水平，其副作用和耐药性问题限制了此类药物的应用。因此，抗hbv和抗肝癌仍然是全球药物研发的焦点，研究者们致力于开发新的治疗策略和药物，寻找具有新作用机制、新靶标的结构多样的候选分子，以克服现有药物的限制，提高治疗效果，并减少毒副作用。

2、天然产物结构多样，具有多种生物活性，毒性低，特别是一些化合物在抗肿瘤方面显示了独特的优势。从天然产物中寻找新颖的活性分子是新药开发的重要途径。天然分子库是活性药物筛选来源的重要资源，为寻找新型抗乙肝病毒先导化合物或具有独特抗hbv机制的良好候选药物提供了巨大机会。国内外学者相继进行了大量的探索和研究，现已发现了许多具有抗hbv活性的天然化合物，主要涉及的结构类型包括：倍半萜类、三萜类、黄酮类、苯丙素类、蒽醌、氧杂蒽酮、生物碱和烯二炔类，其中倍半萜是萜类最大的类群。

3、云木香(saussurea lappa)为菊科风毛菊属植物，是云南的道地药材，是常用的中药之一，药用历史悠久，早在《神农本草经》中，云木香就被列为上品，如今，云木香已经被列入《中国药典》中，并以其根部入药，具有行气止痛、温中和胃的功效。基于云木香中的化学成分结构多样，药理活性丰富，研究人员通过大量的化学、药效学和机制研究，探讨了云木香的药用物质基础。研究发现云木香根的主要化学成分为：倍半萜、倍半萜二聚体、三萜、甾体、黄酮和木脂素等，药理学研究表明其具有抗炎、抗菌、抗肿瘤、抗hbv、胆汁淤积和肝脏保护等多种药理活性。特别是近年来，研究人员从云木香中报道了一些之前文献未经报道的倍半萜二聚体和氨基酸倍半萜杂合物，这些新发现的化合物在抗炎、抗菌、抗病毒等生物活性方面展现出了更加深入的研究潜力。该植物因其广泛的药用，新颖、多样的次生代谢产物及多种多样的生物活性，越来越受到国内外学者的广泛关注。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一类新的具有药用价值的式(i)所示的云木香内酯a-n(lappanolides a-n,1-14)，及其制备方法和应用，药物组合物及其应用，该类化合物对人肝癌细胞株(hepg2.2.15)具有细胞毒活性，能够用于制备抗hbv药物。迄今，现有技术中无云木香内酯a-n(lappanolides a-n,1-14)的报道，也没有其作为有效成分的药物组合物的报道，也没有其药物组合物在制备或治疗hbv药物中的应用报道。

2、为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下的技术方案：

3、本发明提供了云木香内酯，是14个倍半萜分子，云木香内酯a-n(lappanolides a-n,1-14)，具有如下式(i)所示结构：

4、

5、                                  

6、本发明提供了上述化合物1-14的制备方法，将云木香干燥根经粉碎后用体积分数为95％的乙醇回流提取若干次，浓缩至干，得到浸膏；随后将浸膏溶于水，加入乙酸乙酯萃取若干次，得到的有机层用聚酰胺拌样，经mci chp 20p柱层析，洗脱系统为甲醇–水，然后经tlc检测合并相同流分，共得到14个组分：fr.a1～fr.a14，对液质分析推测可能含有目标倍半萜的组分fr.a3～fr.a11合并得到混合物；该混合物经硅胶柱层析，依次用体积比为70:1，20:1，9:1，8:2，6:4，0:1的石油醚-丙酮进行梯度洗脱，将所得组分用tlc检测合并，得到6个组分：fr.1～fr.6；将含有目标倍半萜的组分fr.4经mci chp 20p柱层析，依次用体积分数为30％，40％，50％，70％，100％的甲醇-水进行洗脱得到5个组分：fr.4-1～fr.4-5；

7、其中含目标倍半萜的组分fr.4-2经硅胶cc，以石油醚-乙酸乙酯体积比为8:2，6:4，1:1，0:1依次洗脱得到4个组分：fr.4-2-1～fr.4-2-4；其中含目标倍半萜的组分fr.4-2-2经硅胶cc，用二氯甲烷–甲醇按体积比100:1，50:1，10:1，0:1依次洗脱得到4个组分：fr.4-2-2-1～fr.4-2-2-4；其中含化合物2和8的组分fr.4-2-2-2经hplc进行制备，得到化合物2和8；其中含目标倍半萜的组分fr.4-2-2-3经hplc进行制备，得到7个亚组分fr.4-2-2-3-1～fr.4-2-2-3-7；其中含化合物12的组分fr.4-2-2-3-1再经半制备hplc进行纯化，得到化合物11；其中含化合物12的组分fr.4-2-2-3-2经硅胶cc，以二氯甲烷–甲醇体积比40:1等度洗脱，根据tlc检测结果，得到化合物12；其中含化合物5的组分fr.4-2-2-3-3经硅胶cc，以二氯甲烷–甲醇体积比40:1洗脱得到化合物5；其中含化合物9的组分fr.4-2-2-3-4硅胶cc，以二氯甲烷–甲醇体积比35:1洗脱，根据tlc检测结果，得到化合物9；其中含化合物1的组分fr.4-2-2-3-5硅胶cc，以二氯甲烷–甲醇体积比35:1等度洗脱，根据tlc检测结果，得到化合物1；

8、含目标倍半萜的组分fr.4-3经硅胶cc，以石油醚-丙酮体积比6:1等度洗脱，根据tlc检测结果，分为6个组分：fr.4-3-1～fr.4-3-6；其中含化合物3的组分fr.4-3-1经hplc进行制备，得到化合物3；其中含化合物4和7的组分fr.4-3-2经硅胶cc，以石油醚-乙酸乙酯体积比2:1等度洗脱，根据tlc检测结果，得到化合物4和7；其中含化合物10和14的组分fr.4-3-3经半制备hplc进行纯化，得到化合物10和14；其中含化合物6和13的组分fr.4-3-4经ods柱层析，依次用甲醇-水按体积分数为20％，30％，35％，40％，50％，100％依次进行洗脱，得到6个组分：fr.4-3-4-1～fr.4-3-4-6；最后含化合物6和13的组分fr.4-3-4-3经hplc进行制备，得到化合物6和13。

9、本发明提供了上述化合物1-14在制备抗hbv药物中的应用。本发明对所述应用的方法没有特殊的限定，选用本领域熟知的方法即可。

10、本发明同时还提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括上述的式(i)化合物1-14的至少一种和药学上可接受的载体或赋型剂。

11、并此，还提供了所述的药物组合物在制备抗肝癌药物中的应用。

12、当所述化合物1-14中的至少一种用于制备抗hbv药物时，本发明优选将所述化合物1-14直接使用，或以药物组合物的形式使用。

13、本发明提供的药物组合物，包括上述化合物1-14中的至少一种和药学上可接受的载体或赋型剂。在本发明中，所述药学上可接受的载体或赋型剂优选为固体、半固体或液体稀释剂，填料以及药物制品辅剂。本发明对所述药学上可接受的载体或赋型剂没有特殊的限定，选用本领域熟知的、对人和动物无毒且惰性的药学上可接受的载体和/或赋型剂即可。

14、本发明对所述药物组合物的制备方法没有特殊的限定，直接将化合物1-14中的至少一种与药学上可接受的载体或赋型剂混合即可，本发明对所述混合的过程没有特殊的限定，选用本领域熟知的过程能够得到药物组合物即可。

15、本发明提供了上述技术方案所述药物组合物在制备抗hbv药物中的应用。本发明对所述应用的方法没有特殊的限定，选用本领域熟知的方法即可。

16、在本发明中，当所述药物组合物用于制备抗hbv药物时，所述组合物在药物中的含量优选为0.1～99％；在所述药物组合物中，所述化合物1-14中的至少一种在药物组合物中的含量优选为0.5～90％。本发明的药物组合物优选以单位体重服用量的形式使用。在本发明中，所制备的药物优选可经注射(静注、肌注)和口服两种形式给药。