一种白血病干细胞分子标志物及其在白血病中的应用

本发明属于生物，具体涉及一种白血病干细胞分子标志物及其在白血病预后预测或治疗白血病中的应用。

背景技术：

1、白血病是一种源于造血干细胞的恶性克隆性疾病，复杂的发病机制与生物、物理、化学、遗传等多因素关联。其中骨髓中的白血病细胞增殖失控，导致正常造血受到抑制，恶性细胞可浸润到其它器官。在白血病中以急性髓系白血病(acute myeloid leukemia，aml)最为常见。

2、aml是一种血液系统恶性肿瘤，由髓系原始细胞克隆增殖、分化受阻引发一系列临床症状及体征。在现有的治疗体系下，aml的预后不容乐观，5年总生存率仅有30.5％。究其原因，aml疾病的克隆异质性，即同一患者体内存在的少数白血病干细胞(leukemia stemcell，lsc)亚群体是引起疾病难治复发及不良预后的主要根源。因而，深入研究lsc生物学特性及干性维持的机理是开发新的靶向治疗策略、提高aml预后的重要前提。

3、lsc最初被认为富集于cd34+cd38-细胞群体，但后续研究表明lsc可存在于不同免疫表型的细胞群体中。近些年随着单细胞技术的发展，研究者们利用更多的分子标记，包括蛋白表面标记组合以及直接应用转录组特征，对lsc群体进行了更为精准地界定，为研究lsc特异机理提供了重要的依据。

4、lgals3bp，又称mac2bp、90k或gal-3bp，最早在鉴定乳腺癌、神经母细胞瘤等实体肿瘤分泌的肿瘤相关抗原时被发现。lgals3bp具有胞内或分泌型蛋白的存在形式。在肿瘤研究领域，既往报道发现，绝大多数情况下体液或肿瘤组织中高水平的lgals3bp在多种实体肿瘤类型中均与较差的预后相关。功能上，lgals3bp能够抑制肿瘤免疫、促进肿瘤增殖、粘附及迁移等从而发挥促癌作用。

5、然而，尚未有关于lgals3bp在白血病尤其是aml以及lsc中的功能报道。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明的首要目的在于提供一种白血病干细胞分子标志物lgals3bp及其作为分子标志物在白血病预后预测以及治疗上的应用。该分子标志物lgals3bp在lsc中特异高表达，可作为aml的预后预测标志物，为aml预后提供临床策略。同时，lgals3bp有助于白血病细胞的存活及干性的维持，通过靶向敲低该基因能够为开发aml靶向药物以及提供临床靶向治疗方案提供新的思路和路径。

2、为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

3、本发明第一方面提供了检测生物样本中lgals3bp表达量的检测试剂在制备白血病预后预测产品中的应用。

4、本发明第二方面提供了一种用于白血病预后预测的产品，所述产品中含有检测生物样本中lgals3bp表达量的检测试剂

5、在本发明的一些具体的实施方式中，本文中所述白血病为急性髓系白血病。

6、在本发明的一些具体的实施方式中，本文中所述产品主要指的是非诊断或治疗目的的体外检测产品，可以是制剂、芯片或试剂盒，该产品可对白血病患者的预后进行预测。

7、在本发明的一些具体的实施方式中，所述生物样本为白血病患者的骨髓白血病干细胞或骨髓单个核细胞，具体的取样方式可采用本领域中已知的骨髓穿刺技术。

8、可以理解的是，本文中所述的lgals3bp表达量是指lgals3bp的蛋白表达量或其mrna表达量。

9、本文中所述的检测试剂可以是通过本领域中常规的检测技术检测lgals3bp的蛋白表达量或其mrna表达量的试剂，所述的检测技术具体可提及的实例包括但不限于核酸测序技术、聚合酶链式反应、实时荧光定量聚合酶链式反应、蛋白质印迹法(westernblotting)或流式细胞术。

10、可以理解的是，本文中所述的产品中除包括检测lgals3bp的蛋白表达量或其mrna表达量的试剂，根据检测技术的不同而包括相应检测技术所需的辅助试剂，例如总rna抽提试剂、逆转录试剂、实时荧光定量聚合酶链式反应试剂等，具体可根据产品和检测技术需要进行设计。

11、在本发明的一些具体的实施方式中，所述产品执行如下方法：

12、获取受试者的生物样本，并检测所述生物样本中lgals3bp的表达量。

13、进一步的，所述方法还包括根据lgals3bp的表达量，判断其表达量是否增高或降低的步骤。在本发明的一些具体的实施方式中，所述判断根据lgals3bp的表达量的阈值进行，高于阈值则判断表达量高，提示预后较差。可以理解的是，这里所述的阈值为相对定量，根据检测方法的不同而有所区别，在本发明的一些实施例中，所述阈值可以是分子标志物lgals3bp在健康人群骨髓单个核细胞中的平均表达量；在本发明的另一些实施例中，所述阈值可以是同一患者的非白血病干细胞中lgals3bp的表达量，这里的非白血病干细胞可以是aml患者中健康的造血干祖细胞(hematopoietic stem and progenitor cell，hspc)或aml原始细胞中非lsc样细胞；在本发明的另一些实施例中，所述的阈值还可以是通过回顾性分析临床病理结果并利用spss软件绘制roc曲线，获得auc值和cut off值确定。

14、本发明第三方面提供了lgals3bp抑制剂在制备治疗白血病或抑制细胞干性的药物中的应用。

15、本发明第四方面提供了一种治疗白血病或抑制细胞干性的药物，所述药物包括lgals3bp的抑制剂。

16、本文中所述的lgals3bp抑制剂是指能够抑制lgals3bp的活性、下调lgals3bp的表达水平或者沉默lgals3bp的试剂。

17、该药物通过抑制lgals3bp的活性、下调lgals3bp的表达水平或者沉默lgals3bp，从而能够抑制细胞干性，从而抑制白血病的发生发展。

18、在本发明的一些具体的实施方式中，所述lgals3bp的抑制剂为lgals3bp的shrna，所述shrna具有如seq id no.4或seq id no.7所示的核苷酸序列。

19、可以理解的是，所述药物还包括能够与所述抑制剂相配伍的其他药类或药学上可接受的载体和/或辅料等，具体可根据药物的剂型等进行设计，这里不再具体阐述。

20、此外，药物中lgals3bp的抑制剂可通过本领域中已知的技术进行确定，这里不再赘述。

21、本发明的有益效果：

22、本发明提供了分子标志物lgals3bp在白血病预后预测和治疗中的应用，该分子标志物lgals3bp在白血病干细胞中高表达，并且高表达患者的预后明显差于低表达患者(p＝0.033)，具有显著性差异。

23、进一步的，本发明功能实验证实该基因有助于白血病细胞的存活及干性的维持，将该分子敲减以后，在体外1个月的培养中细胞增殖减少至60％，在1-2周的集落形成实验中将白血病细胞系u937以及thp-1的集落形成能力减少至30％以下，在模式动物的骨髓及脾脏中敲减组的白血病细胞比例能够下降至10-20％。说明可针对该基因开放相应的靶向治疗药物，为aml的靶向治疗提供新的策略。