抗PILRA抗体、其用途以及相关方法和试剂与流程

背景技术：

1、成对免疫球蛋白样2型受体α(pilra)是一种跨膜受体，其在多种免疫细胞(例如小胶质细胞)上表达，并且认为其在抑制性细胞信号通路中起作用。pilra的错义变体(g78r)与阿尔茨海默病(alzheimer′s disease)的风险降低相关。g78r变体改变唾液酸接合所必需的残基的相互作用，从而导致若干种pilra配体的结合减少。

2、仍然需要调节pilra活性的治疗剂。

技术实现思路

1、本文阐述了选择性地结合至食蟹猴pilra(cynopilra)和hpilra二者但对人类pilrb(hpilrb)的结合可能相对较低的抗体。我们已鉴定出容许期望选择性的表位。鉴于cynopilra与hpilrb之间的高度同源性，这种选择性概况非常有利，但也极具挑战性。在食蟹猴与人类蛋白质之间的结合相当容许在猴中进行研究，而不必依赖于替代分子。相比之下，结合至pilrb是不期望的，因为pilrb虽然具有与pilra高度类似的胞外域，但也具有不同的胞内域，预期所述胞内域具有不同或甚至相反的活性。

2、此外，具有本文所阐述的此选择性概况的某些抗体也结合至两种pilra变体形式(g78和r78)并且对其具有活性，鉴于每个变体的频率在世界不同地区变化很大，由此确保它们可用于多种群体中。

3、除开发非常有用的抗体以外，我们也获得与pilra生物学相关的重大发现，包括发现pilra信号传导的某些下游效应子，并且首次表征了在小胶质细胞中减少pilra受体信号传导的效应。这些见解首次容许将pilra配体阻断与细胞中的生物效应联系起来，这为药物发现以及测量已知pilra结合剂对细胞和动物的生物影响提供了新颖方法。

4、在一方面，本公开提供了特异性地结合至食蟹猴成对免疫球蛋白样2型受体α(cynopilra)的经分离抗体或其抗原结合片段，其中对cynopilra的结合亲和力为对人类成对免疫球蛋白样2型受体β(hpilrb)的结合亲和力的至少2倍(例如至少2倍、5倍、10倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍或100倍)。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段也结合至人类成对免疫球蛋白样2型受体α(hpilra)。

5、在另一方面，本公开提供了结合至人类成对免疫球蛋白样2型受体α(hpilra)和食蟹猴pilra(cynopilra)的经分离抗体或其抗原结合片段，其中对cynopilra的结合亲和力相对于对hpilra的结合亲和力在100倍内(例如在90倍、80倍、70倍、60倍、50倍、40倍、30倍、20倍、10倍、5倍或2倍内)。

6、在此方面的一些实施方案中，对cynopilra的结合亲和力相对于对hpilra的结合亲和力在50倍内(例如在45倍、40倍、35倍、30倍、25倍、20倍、15倍、10倍、5倍或2倍内)。在此方面的一些实施方案中，对cynopilra的结合亲和力相对于对hpilra的结合亲和力在25倍内(例如在20倍、15倍、10倍、9倍、8倍、7倍、6倍、5倍、4倍、3倍或2倍内)。在一些实施方案中，对cynopilra的结合亲和力相对于对hpilra的结合亲和力在10倍内(例如在9倍、8倍、7倍、6倍、5倍、4倍、3倍或2倍内)。在某些实施方案中，对cynopilra的结合亲和力相对于对hpilra的结合亲和力在5倍内(例如在4倍、3倍或2倍内)。在特定实施方案中，对cynopilra的结合亲和力相对于对hpilra的结合亲和力在2倍内。

7、在此方面的一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段以与hpilra和cynopilra相比较弱的亲和力结合至人类成对免疫球蛋白样2型受体β(hpilrb)。在一些实施方案中，对hpilra的结合亲和力为对hpilrb的结合亲和力的至少10倍(例如至少20倍、40倍、60倍、80倍、100倍、120倍、140倍、160倍、180倍、200倍、220倍、240倍、260倍、280倍或300倍)。在一些实施方案中，对hpilra的结合亲和力为对hpilrb的结合亲和力的至少25倍(例如至少30倍、35倍、40倍、45倍、50倍、55倍、60倍、80倍、100倍、120倍、140倍、160倍、180倍、200倍、220倍、240倍、260倍、280倍或300倍)。在某些实施方案中，对hpilra的结合亲和力为对hpilrb的结合亲和力的至少100倍(例如至少110倍、120倍、130倍、140倍、150倍、160倍、170倍、180倍、190倍、200倍、220倍、240倍、260倍、280倍或300倍)。

8、在本文所阐述公开内容的方面的一些实施方案中，对cynopilra的结合亲和力为对hpilrb的结合亲和力的至少10倍(例如至少20倍、40倍、60倍、80倍或100倍)。在一些实施方案中，对cynopilra的结合亲和力为对hpilrb的结合亲和力的至少25倍(例如至少30倍、35倍、40倍、45倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍或100倍)。

9、在另一方面，本公开提供了结合至人类成对免疫球蛋白样2型受体α(hpilra)的经分离抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段结合至位于以下位置中的一者或多者处的一个或多个氨基酸：63、64、78、106、143、116-118和182-186，其中所述位置是参照seq id no：1的序列确定。

10、在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段结合至位于以下位置中的一者或多者处的一个或多个氨基酸：78、106和143。在某些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段结合至seq id no：1的g78、k106和e143。在某些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段结合至seq id no：136的r78、k106和e143。

11、在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段结合至位于以下位置中的一者或多者处的一个或多个氨基酸：63和64。在某些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段结合至seq id no：1的t63和a64。

12、在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段结合至位于以下位置中的一者或多者处的一个或多个氨基酸：106、116-118和182-186。在某些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段结合至seq id no：1的k106。在某些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段结合至seq id no：1的q116、k117和/或q118。在某些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段结合至seq id no：1的q182、g183、k184、r185和/或r186。

13、在本文所阐述公开内容的方面的一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含：

14、(a)重链cdr1(cdr-h1)序列，其与seq id no：4-11中的任一者的氨基酸序列具有至少90％的序列同一性(例如至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性)，或相对于seq id no：4-11中的任一者的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代；

15、(b)重链cdr2(cdr-h2)序列，其与seq id no：12-19中的任一者的氨基酸序列具有至少80％的序列同一性(例如至少82％、84％、86％、88％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性)，或相对于seq id no：12-19中的任一者的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代；

16、(c)重链cdr3(cdr-h3)序列，其与seq id no：20-29中的任一者的氨基酸序列具有至少80％的序列同一性(例如至少82％、84％、86％、88％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性)，或相对于seq id no：20-29中的任一者的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代；

17、(d)轻链cdr1(cdr-l1)序列，其与seq id no：30-38中的任一者的氨基酸序列具有至少90％的序列同一性(例如至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性)，或相对于seq id no：30-38中的任一者的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代；

18、(e)轻链cdr2(cdr-l2)序列，其与seq id no：39-46的氨基酸序列具有至少80％的序列同一性(例如至少82％、84％、86％、88％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性)，或相对于seq id no：39-46的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代；和

19、(f)轻链cdr3(cdr-l3)序列，其与seq id no：47-53中的任一者的氨基酸序列具有至少80％的序列同一性(例如至少82％、84％、86％、88％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性)，或相对于seq id no：47-53中的任一者的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代。

20、在一些实施方案中，所述氨基酸取代为保守取代。

21、在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段包含：

22、(i)cdr-h1，其包含seq id no：4的序列或相对于seq id no：4的序列的一个或多个保守取代；cdr-h2，其包含seq id no：12的序列或相对于seq id no：12的序列的一个或多个保守取代；cdr-h3，其包含seq id no：20的序列或相对于seq id no：20的序列的一个或多个保守取代；cdr-l1，其包含seq id no：30的序列或相对于seq id no：30的序列的一个或多个保守取代；cdr-l2，其包含seq id no：39的序列或相对于seq id no：39的序列的一个或多个保守取代；和cdr-l3，其包含seq id no：47的序列或相对于seq id no：47的序列的一个或多个保守取代；或

23、(ii)cdr-h1，其包含seq id no：5的序列或相对于seq id no：5的序列的一个或多个保守取代；cdr-h2，其包含seq id no：13的序列或相对于seq id no：13的序列的一个或多个保守取代；cdr-h3，其包含seq id no：22的序列或相对于seq id no：22的序列的一个或多个保守取代；cdr-l1，其包含seq id no：31的序列或相对于seq id no：31的序列的一个或多个保守取代；cdr-l2，其包含seq id no：39的序列或相对于seq id no：39的序列的一个或多个保守取代；和cdr-l3，其包含seq id no：47的序列或相对于seq id no：47的序列的一个或多个保守取代；或

24、(iii)cdr-h1，其包含seq id no：6的序列或相对于seq id no：6的序列的一个或多个保守取代；cdr-h2，其包含seq id no：14的序列或相对于seq id no：14的序列的一个或多个保守取代；cdr-h3，其包含seq id no：23的序列或相对于seq id no：23的序列的一个或多个保守取代；cdr-l1，其包含seq id no：32的序列或相对于seq id no：32的序列的一个或多个保守取代；cdr-l2，其包含seq id no：40的序列或相对于seq id no：40的序列的一个或多个保守取代；和cdr-l3，其包含seq id no：48的序列或相对于seq id no：48的序列的一个或多个保守取代；

25、(iv)cdr-h1，其包含seq id no：7的序列或相对于seq id no：7的序列的一个或多个保守取代；cdr-h2，其包含seq id no：15的序列或相对于seq id no：15的序列的一个或多个保守取代；cdr-h3，其包含seq id no：24的序列或相对于seq id no：24的序列的一个或多个保守取代；cdr-l1，其包含seq id no：33的序列或相对于seq id no：33的序列的一个或多个保守取代；cdr-l2，其包含seq id no：41的序列或相对于seq id no：41的序列的一个或多个保守取代；和cdr-l3，其包含seq id no：49的序列或相对于seq id no：49的序列的一个或多个保守取代；或

26、(v)cdr-h1，其包含seq id no：7的序列或相对于seq id no：7的序列的一个或多个保守取代；cdr-h2，其包含seq id no：15的序列或相对于seq id no：15的序列的一个或多个保守取代；cdr-h3，其包含seq id no：25的序列或相对于seq id no：25的序列的一个或多个保守取代；cdr-l1，其包含seq id no：34的序列或相对于seq id no：34的序列的一个或多个保守取代；cdr-l2，其包含seq id no：42的序列或相对于seq id no：42的序列的一个或多个保守取代；和cdr-l3，其包含seq id no：49的序列或相对于seq id no：49的序列的一个或多个保守取代；或

27、(vi)cdr-h1，其包含seq id no：8的序列或相对于seq id no：8的序列的一个或多个保守取代；cdr-h2，其包含seq id no：16的序列或相对于seq id no：16的序列的一个或多个保守取代；cdr-h3，其包含seq id no：26的序列或相对于seq id no：26的序列的一个或多个保守取代；cdr-l1，其包含seq id no：35的序列或相对于seq id no：35的序列的一个或多个保守取代；cdr-l2，其包含seq id no：43的序列或相对于seq id no：43的序列的一个或多个保守取代；和cdr-l3，其包含seq id no：50的序列或相对于seq id no：50的序列的一个或多个保守取代。

28、在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含：

29、(a)cdr-h1序列，其包含gx1tfx2x3x4x5x6h(seq id no：74)的序列，其中x1为f或y；x2为d或i；x3为d或g；x4为y或f；x5为a或y；并且x6为m或i；

30、(b)cdr-h2序列，其包含x1x2x3x4x5sgx6x7x8(seq id no：75)的序列，其中x1为g或w；x2为f、m或i；x3为s或n；x4为w或p；x5为n或e；x6为s或d；x7为i或t；并且x8为g或t；

31、(c)cdr-h3序列，其包含x1x2x3x4x5x6x7x8x9fdx10(seq id no：76)的序列，其中x1为d或不存在；x2为k或g；x3为s或n；x4为i或w；x5为s、g或n；x6为a或f；x7为a或p；x8为g或d；x9为r或t；并且x10为y、s或f；

32、(d)cdr-l1序列，其包含x1x2sx3x4ix5x6yln(seq id no：77)的序列，其中x1为q或r；x2为a或s；x3为r或q；x4为r、g或s；x5为n或s；并且x6为n或i；

33、(e)cdr-l2序列，其包含x1asx2lx3x4(seq id no：78)的序列，其中x1为d或v；x2为n或s；x3为e或q；并且x4为t或s；和

34、(f)cdr-l3序列，其包含qqx1x2x3x4px5t(seq id no：79)的序列，其中x1为y或s；x2为d或y；x3为n或s；x4为l或a；并且x5为l或f。

35、在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段包含：

36、(i)cdr-h1，其包含seq id no：4的序列；cdr-h2，其包含seq id no：12的序列；cdr-h3，其包含seq id no：20的序列；cdr-l1，其包含seq id no：30的序列；cdr-l2，其包含seq id no：39的序列；和cdr-l3，其包含seq id no：47的序列；或

37、(ii)cdr-h1，其包含seq id no：5的序列；cdr-h2，其包含seq id no：13的序列；cdr-h3，其包含seq id no：22的序列；cdr-l1，其包含seq id no：31的序列；cdr-l2，其包含seq id no：39的序列；和cdr-l3，其包含seq id no：47的序列；或

38、(iii)cdr-h1，其包含seq id no：6的序列；cdr-h2，其包含seq id no：14的序列；cdr-h3，其包含seq id no：23的序列；cdr-l1，其包含seq id no：32的序列；cdr-l2，其包含seq id no：40的序列；和cdr-l3，其包含seq id no：48的序列。

39、在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含：

40、(i)cdr-h1，其包含seq id no：7的序列；cdr-h2，其包含seq id no：15的序列；cdr-h3，其包含seq id no：24的序列；cdr-l1，其包含seq id no：33的序列；cdr-l2，其包含seq id no：41的序列；和cdr-l3，其包含seq id no：49的序列；或

41、(ii)cdr-h1，其包含seq id no：7的序列；cdr-h2，其包含seq id no：15的序列；cdr-h3，其包含seq id no：25的序列；cdr-l1，其包含seq id no：34的序列；cdr-l2，其包含seq id no：42的序列；和cdr-l3，其包含seq id no：49的序列；或

42、(iii)cdr-h1，其包含seq id no：8的序列；cdr-h2，其包含seq id no：16的序列；cdr-h3，其包含seq id no：26的序列；cdr-l1，其包含seq id no：35的序列；cdr-l2，其包含seq id no：43的序列；和cdr-l3，其包含seq id no：50的序列。

43、在特定实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含：cdr-h1，其包含seq id no：7的序列；cdr-h2，其包含seq id no：15的序列；cdr-h3，其包含seq id no：24的序列；cdr-l1，其包含seq id no：33的序列；cdr-l2，其包含seq id no：41的序列；和cdr-l3，其包含seq id no：49的序列。

44、在特定实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含：cdr-h1，其包含seq id no：7的序列；cdr-h2，其包含seq id no：15的序列；cdr-h3，其包含seq id no：25的序列；cdr-l1，其包含seq id no：34的序列；cdr-l2，其包含seq id no：42的序列；和cdr-l3，其包含seq id no：49的序列。

45、在一些实施方案中，本文所阐述的经分离抗体或抗原结合片段包含与seq id no：54-63中的任一者具有至少85％序列同一性(例如至少86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的重链可变区(vh)序列。在一些实施方案中，本文所阐述的经分离抗体或抗原结合片段包含与seq id no：54-63中的任一者具有至少90％序列同一性(例如至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的vh序列。在一些实施方案中，本文所阐述的经分离抗体或抗原结合片段包含与seq id no：54-63中的任一者具有至少95％序列同一性(例如至少96％、97％、98％或99％序列同一性)的vh序列。在一些实施方案中，本文所阐述的经分离抗体或抗原结合片段包含含有seq id no：54-63中的任一者的序列的vh序列。

46、在一些实施方案中，本文所阐述的经分离抗体或抗原结合片段包含与seq id no：137-144中的任一者具有至少85％序列同一性(例如至少86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的重链可变区(vh)序列。在一些实施方案中，本文所阐述的经分离抗体或抗原结合片段包含与seq id no：137-144中的任一者具有至少90％序列同一性(例如至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的vh序列。在一些实施方案中，本文所阐述的经分离抗体或抗原结合片段包含与seq id no：137-144中的任一者具有至少95％序列同一性(例如至少96％、97％、98％或99％序列同一性)的vh序列。在一些实施方案中，本文所阐述的经分离抗体或抗原结合片段包含含有seq id no：137-144中的任一者的序列的vh序列。

47、在一些实施方案中，本文所阐述的经分离抗体或抗原结合片段包含与seq id no：64-73中的任一者具有至少85％序列同一性(例如至少86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的轻链可变区(vl)序列。在一些实施方案中，本文所阐述的经分离抗体或抗原结合片段包含与seq id no：64-73中的任一者具有至少90％序列同一性(例如至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的vl序列。在一些实施方案中，本文所阐述的经分离抗体或抗原结合片段包含与seq id no：64-73中的任一者具有至少95％序列同一性(例如至少96％、97％、98％或99％序列同一性)的vl序列。在一些实施方案中，本文所阐述的经分离抗体或抗原结合片段包含含有seq id no：64-73中的任一者的序列的vl序列。

48、在一些实施方案中，本文所阐述的经分离抗体或抗原结合片段包含与seq id no：145-149中的任一者具有至少85％序列同一性(例如至少86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的轻链可变区(vl)序列。在一些实施方案中，本文所阐述的经分离抗体或抗原结合片段包含与seq id no：145-149中的任一者具有至少90％序列同一性(例如至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的vl序列。在一些实施方案中，本文所阐述的经分离抗体或抗原结合片段包含与seq id no：145-149中的任一者具有至少95％序列同一性(例如至少96％、97％、98％或99％序列同一性)的vl序列。在一些实施方案中，本文所阐述的经分离抗体或抗原结合片段包含含有seq id no：145-149中的任一者的序列的vl序列。

49、在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段包含：

50、(i)包含seq id no：54的vh序列和包含seq id no：65的vl序列；或

51、(ii)包含seq id no：56的vh序列和包含seq id no：66的vl序列；或

52、(iii)包含seq id no：57的vh序列和包含seq id no：67的vl序列；或

53、(iv)包含seq id no：58的vh序列和包含seq id no：68的vl序列；或

54、(v)包含seq id no：59的vh序列和包含seq id no：69的vl序列；或

55、(vi)包含seq id no：60的vh序列和包含seq id no：70的vl序列。

56、在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段包含：

57、(i)包含seq id no：54的vh序列和包含seq id no：65的vl序列；或

58、(ii)包含seq id no：56的vh序列和包含seq id no：66的vl序列；或

59、(iii)包含seq id no：57的vh序列和包含seq id no：67的vl序列。

60、在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段包含：

61、(i)包含seq id no：137的vh序列和包含seq id no：145的vl序列；或

62、(ii)包含seq id no：140的vh序列和包含seq id no：145的vl序列；或

63、(iii)包含seq id no：143的vh序列和包含seq id no：146的vl序列；或

64、(iv)包含seq id no：143的vh序列和包含seq id no：149的vl序列。

65、在一些实施方案中，所述抗体包含形成fc结构域的两个fc多肽。在一些实施方案中，一个或全部两个fc多肽包含与seq id no：94的序列具有至少90％(例如至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％)同一性的序列。

66、在一些实施方案中，所述抗体为igg1。

67、在一些实施方案中，所述抗体为全长抗体。

68、在另一方面，本公开提供了结合至人类成对免疫球蛋白样2型受体α(hpilra)的经分离抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段所识别的表位与选自由表1中的抗体克隆1-39组成的组的抗体克隆所识别的表位相同或基本上相同。

69、在此方面的一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段所识别的表位与选自由抗体克隆2、4和5组成的组的抗体克隆所识别的表位相同或基本上相同。

70、在本文所阐述的经分离抗体或其抗原结合片段的一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段拮抗hpilra活性。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段阻断唾液酸化蛋白质与hpilra的结合。在一些实施方案中，唾液酸化蛋白质为唾液酸化npdc1、panp、hsv-1 gb、colec12、c4a、c4b、dag1或clec4g。

71、在本文所阐述的经分离抗体或其抗原结合片段的一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段增强或增加egfr或stat3的磷酸化；或抑制或减少stat1的磷酸化。

72、在本文所阐述的经分离抗体或其抗原结合片段的一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段增强细胞迁移(例如小胶质细胞迁移)。

73、在本文所阐述的经分离抗体或其抗原结合片段的一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段增强抗炎性基因或蛋白质表达。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段增强il1rn基因表达。

74、在本文所阐述的经分离抗体或其抗原结合片段的一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段降低促炎性细胞因子蛋白质表达或分泌。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段降低tnf、il-6和/或ip-10表达。

75、在本文所阐述的经分离抗体或其抗原结合片段的一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段提高细胞呼吸。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段增加线粒体呼吸。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段增加非线粒体呼吸。

76、在本文所阐述的经分离抗体或其抗原结合片段的一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段增加脂肪酸代谢(例如增加脂肪酸氧化)。

77、在本文所阐述的经分离抗体或其抗原结合片段的一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段增加atp产生。

78、在本文所阐述的经分离抗体或其抗原结合片段的一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段不激活外周免疫细胞。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段不激活中性粒细胞和单核细胞。

79、在本文所阐述的经分离抗体或其抗原结合片段的一些实施方案中，所述抗体为单克隆抗体。在一些实施方案中，所述抗体为嵌合抗体。在一些实施方案中，所述抗体为人源化抗体。在一些实施方案中，抗体为全人类抗体。在一些实施方案中，所述抗原结合片段为fab、f(ab′)2、scfv或二价scfv。

80、在另一方面，本公开提供了与本文所阐述的经分离抗体或其抗原结合片段竞争与hpilra结合的抗体或其抗原结合片段。

81、在另一方面，本公开提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含本文所阐述的经分离抗体或其抗原结合片段和药学上可接受的载剂。

82、在另一方面，本公开提供了一种多核苷酸，其包含编码本文所阐述的经分离抗体或其抗原结合片段的核酸序列。在另一方面，本公开提供了一种载体，其包含含有编码本文所阐述的经分离抗体或其抗原结合片段的核酸序列的多核苷酸。在另一方面，本公开提供了一种宿主细胞，所述宿主细胞包含含有编码本文所阐述的经分离抗体或其抗原结合片段的核酸序列的多核苷酸。

83、在另一方面，本公开提供了一种用于产生经分离抗体或其抗原结合片段的方法，所述方法包括在表达多核苷酸所编码的所述经分离抗体或其抗原结合片段的条件下培养宿主细胞。

84、在另一方面，本公开提供了一种药盒，所述药盒包含：本文所阐述的经分离抗体或其抗原结合片段或本文所阐述的药物组合物；和其使用说明书。

85、在另一方面，本公开提供了一种治疗受试者的神经退行性疾病的方法，所述方法包括向所述受试者施用本文所阐述的经分离抗体或其抗原结合片段或本文所阐述的药物组合物。在一些实施方案中，所述神经退行性疾病选自由以下组成的组：阿尔茨海默病、原发性年龄相关tau蛋白病、进行性核上性麻痹(psp)、额颞叶痴呆、17号染色体相关的额颞叶痴呆伴帕金森症(frontotemporal dementia with parkinsonism linked to chromosome17)、嗜银颗粒性痴呆、肌萎缩性侧索硬化、关岛型肌萎缩性侧索硬化/帕金森症-痴呆复合症(amyotrophic lateral sclerosis/parkinsonism-dementia complex of guam，als-pdc)、皮质基底核变性、慢性创伤性脑病、克雅病(creutzfeldt-jakob disease)、拳击手型痴呆、弥漫性神经原纤维缠结伴钙化症、唐氏综合征(down′s syndrome)、家族性英国型痴呆(familial british dementia)、家族性丹麦型痴呆(familial danish dementia)、杰茨曼-斯脱司勒-史茵克病(gerstmann-straussler-scheinker disease)、全脑胶质细胞tau蛋白病、瓜德罗普帕金森症伴痴呆(guadeloupean parkinsonism with dementia)、瓜德罗普psp、哈勒沃登-施帕茨病(hallevorden-spatz disease)、遗传性弥漫性白质脑病合并轴索球样变(hdls)、亨廷顿病(huntington′s disease)、包涵体肌炎、多系统萎缩、强直性肌营养不良、那须-哈库拉病(nasu-hakola disease)、神经原纤维缠结优势型痴呆、c型尼曼-匹克病(niemann-pick disease type c)、苍白球-脑桥-黑质变性、帕金森病(parkinson′sdisease)、皮克病(pick's disease)、脑炎后帕金森症、朊蛋白脑淀粉样血管病、进行性皮质下神经胶质瘤病、亚急性硬化性全脑炎和仅缠结型痴呆。在特定实施方案中，所述神经退行性疾病为阿尔茨海默病。

86、在另一方面，本公开提供了一种用于确定分子是否对pilra蛋白具有活性的方法，所述方法包括：(a)使表达所述pilra蛋白的细胞与所述分子接触；(b)在步骤(a)之前、与其同时或在其之后，使与步骤(a)中相同类型的具有较低pilra表达的细胞与所述分子接触；以及(c)在两种细胞中测量以下中的一者：磷酸化stat3(pstat3)水平、磷酸化stat1(pstat1)水平、磷酸化egfr(pegfr)水平、钙粘蛋白表达、整联蛋白表达和小胶质细胞迁移，其中这些测量值中的一者在细胞之间的水平变化指示所述分子对步骤(a)的pilra蛋白具有活性。

87、在一些实施方案中，步骤(a)的细胞天然表达pilra蛋白。在一些实施方案中，具有较低pilra表达的细胞的pilra蛋白被敲除。在特定实施方案中，细胞为小胶质细胞，例如imicroglia。在一些实施方案中，细胞为pilra lof imicroglia。

88、在一些实施方案中，步骤(a)的细胞经工程化或修饰以表达或过表达pilra蛋白。在一些实施方案中，具有较低pilra表达的细胞天然表达pilra蛋白或者未经工程化或修饰以表达pilra蛋白。

89、在一些实施方案中，所述分子来自分子文库。在某些实施方案中，已知所述分子结合pilra蛋白。在其他实施方案中，不知晓所述分子是否结合pilra蛋白。在某些实施方案中，所述分子为抗体、肽、有机小分子或核酸。

90、在另一方面，本公开提供了一种用于确定结合pilra蛋白的分子是否调节pilra表达细胞中的信号传导反应或活性的方法，所述方法包括：(a)使所述细胞与所述分子接触；以及(b)测量以下中的一者：磷酸化stat3(pstat3)水平、磷酸化stat1(pstat1)水平、磷酸化egfr(pegfr)水平、钙粘蛋白表达、整联蛋白表达和小胶质细胞迁移，其中所述测量值中的一者的水平变化指示所述分子调节pilra表达细胞中的信号传导反应或活性。

91、在一些实施方案中，所述变化为当分子接触细胞时，相对于没有所述分子的情形下细胞中的水平，所述测量值中的一者的水平增加或减少。例如，在一些实施方案中，所述变化为pstat3水平增加，例如pstat3 y705水平和/或pstat3 s727水平增加。在另一个实例中，所述变化为pegfr水平增加。在另一个实例中，所述变化为游动蛋白(例如钙粘蛋白、整联蛋白，例如本文所阐述的那些蛋白质中的任一者)的表达水平和/或细胞分泌增加。在另一个实例中，所述变化为细胞(例如小胶质细胞)迁移增加，其可使用细胞迁移测定(例如实施例4中所阐述)来测量和量化。

92、在一些实施方案中，所述细胞处于体外测定中。在其他实施方案中，所述细胞在哺乳动物中。在一些实施方案中，步骤(a)包括向哺乳动物施用所述分子。

93、在一些实施方案中，所述细胞为小胶质细胞、髓样细胞、单核细胞或中性粒细胞。

94、在另一方面，本公开提供了一种工程化的人类诱导型多能干细胞(ipsc)或细胞系，其中所述ipsc已经修饰(即经遗传工程化)以表达编码pilra蛋白的r78变体或g78变体的基因的两个拷贝。在一些实施方案中，所述ipsc在内源性基因组位点处经修饰。

95、在另一方面，本公开提供了一种源自人类诱导型多能干细胞(ipsc)的工程化小胶质细胞模型，其中所述ipsc已经修饰(即经遗传工程化)以表达编码pilra蛋白的r78变体或g78变体的基因的两个拷贝。在一些实施方案中，所述ipsc在内源性基因组位点处经修饰。在一些实施方案中，所述工程化小胶质细胞模型是通过定向分化得到。

96、在另一方面，本公开提供了一种匹配的细胞系对，其中：(a)所述对的第一细胞系对于编码pilra蛋白的r78变体的基因为纯合的；并且(b)所述对的第二细胞系对于编码pilra蛋白的g78变体的基因为纯合的，其中所述对的第一细胞系和第二细胞系都源自相同的亲代细胞系，并且一种或两种细胞系的内源性pilra基因已经工程化。在一些实施方案中，所述亲代细胞系对于编码pilra蛋白的r78变体的基因为纯合的。在其他实施方案中，所述亲代细胞系对于编码pilra蛋白的g78变体的基因为纯合的。在一些实施方案中，所述亲代细胞系对于编码pilra蛋白的r78变体和g78变体的基因为杂合的。

97、在匹配的细胞系对的一些实施方案中，包括第三细胞系，所述第三细胞系对于编码pilra蛋白的g78变体和r78变体的基因为杂合的。在一些实施方案中，所述第三细胞系源自对于编码pilra蛋白的r78变体或g78变体的基因为纯合的亲代细胞系。

98、在另一方面，本公开提供了一种产生具有经修饰的pilra基因的髓样细胞系或能够分化成髓样细胞系的干细胞系(例如ipsc系)的方法，所述方法包括：(a)确定现有髓样细胞系或现有干细胞系对于编码pilra蛋白的r78变体的基因是否为纯合的、对于编码pilra蛋白的g78变体的基因是否为纯合的、或对于编码pilra蛋白的r78和g78变体的基因是否为杂合的；以及(b)通过修饰编码pilra蛋白的基因对细胞系进行工程化，以产生对于编码pilra蛋白的r78变体或pilra蛋白的g78变体的基因为纯合的工程化细胞系，其中所述工程化细胞系在经工程化之前对于编码所选变体的基因不为纯合的。

99、在另一方面，本公开提供了一种产生匹配的细胞系对的方法，所述方法包括：(a)确定现有髓样细胞系或能够分化成髓样细胞系的现有干细胞系(例如ipsc系)对于编码pilra蛋白的r78变体的基因是否为纯合的、对于编码pilra蛋白的g78变体的基因是否为纯合的、或对于编码pilra蛋白的r78和g78变体的基因是否为杂合的；以及(b)(i)通过修饰编码pilra蛋白的基因对第一细胞系进行工程化，以产生对于编码pilra蛋白的r78变体的基因为纯合的工程化细胞系，和/或(ii)通过修饰编码pilra蛋白的基因对第二细胞系进行工程化，以产生对于编码pilra蛋白的g78变体的基因为纯合的工程化细胞系。

100、在一些实施方案中，所述工程化细胞系在经工程化之前对于编码所选变体的基因不为纯合的。

101、在某些实施方案中，步骤(a)的现有细胞系对于pilra蛋白的r78变体为纯合的，并且步骤(b)的工程化包括修饰现有细胞系，以产生对于编码pilra蛋白的g78变体的基因为纯合的工程化细胞系。

102、在其他实施方案中，步骤(a)的现有细胞系对于pilra蛋白的g78变体为纯合的，并且步骤(b)的工程化包括修饰现有细胞系，以产生对于编码pilra蛋白的r78变体的基因为纯合的工程化细胞系。

103、在一些实施方案中，步骤(a)的现有细胞系对于编码pilra蛋白的r78和g78变体的基因为杂合的，并且步骤(b)的工程化包括修饰现有细胞系，以产生对于编码pilra蛋白的r78变体的基因为纯合的工程化细胞系和对于编码pilra蛋白的g78变体的基因为纯合的工程化细胞系。

104、在另一方面，本公开提供了一种从现有髓样细胞系或能够分化成髓样细胞系的现有干细胞系(例如ipsc系)产生对于编码pilra蛋白的r78和g78变体的基因为杂合的匹配的细胞系对的方法，所述方法包括：(a)对现有细胞系进行工程化，以产生对于编码pilra蛋白的r78变体的基因为纯合的第一工程化细胞系；以及(b)对步骤(a)中所产生的细胞系或现有细胞系进行工程化，以产生对于编码pilra蛋白的g78变体的基因为纯合的第二工程化细胞系。

105、在另一方面，本公开提供了一种从现有髓样细胞系或能够分化成髓样细胞系的现有干细胞系(例如ipsc系)产生对于编码pilra蛋白的r78和g78变体的基因为杂合的匹配的细胞系对的方法，所述方法包括：(a)对现有细胞系进行工程化，以产生对于编码pilra蛋白的g78变体的基因为纯合的第一工程化细胞系；以及(b)对步骤(a)中所产生的细胞系或现有细胞系进行工程化，以产生对于编码pilra蛋白的r78变体的基因为纯合的第二工程化细胞系。

106、在另一方面，本公开提供了一种从现有髓样细胞系或能够分化成髓样细胞系的现有干细胞系(例如ispc系)产生对于编码pilra蛋白的r78变体的基因为纯合的匹配的细胞系对的方法，所述方法包括：对现有细胞系进行工程化，以产生对于编码pilra蛋白的g78变体的基因为纯合的工程化细胞系。

107、在另一方面，本公开提供了一种从现有髓样细胞系或能够分化成髓样细胞系的现有干细胞系(例如ipsc系)产生对于编码pilra蛋白的g78变体的基因为纯合的匹配的细胞系对的方法，所述方法包括：对现有细胞系进行工程化，以产生对于编码pilra蛋白的r78变体的基因为纯合的工程化细胞系。