对CD32a具有特异性的结合蛋白的制作方法

背景技术：

1、cd32(也称为fcyrll或fcgr2)是可以在多种免疫细胞(例如在血小板、嗜中性粒细胞、巨噬细胞和树突细胞)上发现的表面受体糖蛋白。在人类中，存在三种主要的cd32亚型：cd32a、cd32b和cd32c。

2、已知cd32a参与介导细菌活化的血小板反应，并在响应于损伤血管的血小板活化、粘附和聚集中起重要作用。此外，血小板上的cd32a在肝素诱导的血小板减少症(其是肝素疗法的危及生命的副作用)中起作用。

3、此外，已知cd32a活化对于产生t细胞抗肿瘤细胞免疫是必要且充分的。cd32a还与自身免疫和过敏有关。例如，已知cd32a诱导过敏和变态反应。另外，还已知cd32a受体的snph131r与多种效应偶联。cd32a与几种人类自身免疫性疾病(如类风湿性关节炎)和感染风险增加有关。

4、因此，检测和靶向cd32a已经变得高度相关。然而，主要的cd32亚型之间的同源性极高，并且因此，很难区分不同的类型。在hiv研究领域，cd32a最近被鉴定为潜在hiv储库标记物，由于在cd32b的存在下鉴定cd32a阳性细胞的小子集的技术挑战，因此这并非没有争议的讨论。由于缺乏可靠的cd32a特异性细胞检测试剂，因此必须使用依序、多轮、磁珠细胞分选方法来区分不同的cd32阳性免疫细胞子集，并从外周血分离少量cd4+cd32+t淋巴细胞。

5、在基因组水平上，商业qpcr引物对可用于区分cd32a与cd32b。然而，在细胞水平上并且更特别地对于检测细胞表面上的cd32a，需要结合蛋白，其能够区分cd32a与cd32b的高度同源的胞外结构域。市场上有几种cd32a抗体，然而大多数也结合cd32b。可以区分的那些是针对蛋白质的细胞内部分产生的，或者未验证其关于检测细胞表面上的cd32a的特异性。总之，不存在可以选择性结合细胞表面上的cd32a的已知抗体或抗体类似物。

6、本发明诸位发明人已经设计了结合蛋白，其能够选择性识别表达cd32a和cd32b的细胞的混合物中的cd32a阳性细胞，而无需事先耗尽cd32b阳性细胞群。所发现的结合蛋白特异性结合cd32a受体的胞外结构域。

技术实现思路

1、在第一方面，本发明提供了一种包含至少一个锚蛋白重复结构域的结合蛋白，其中所述至少一个锚蛋白重复结构域特异性结合cd32a，并且其中所述至少一个锚蛋白重复结构域包含具有选自以下的氨基酸序列的锚蛋白重复模块：

2、i)seq id:28、29和30，以及

3、ii)彼此独立地包含至多10个氨基酸取代的seq id no:28、29和30，

4、优选地其中所述取代彼此独立地在seq id no:28、29和30的位置1、3、4、6、14、15和/或27处和/或彼此独立地在seq id no:28、29和30的至多三个其他位置处。

5、在第二方面，本发明涉及一种包含至少一个锚蛋白重复结构域的结合蛋白，其中所述至少一个锚蛋白重复结构域特异性结合cd32a，并且其中所述至少一个锚蛋白重复结构域包含与选自seq id no:1-27的一个锚蛋白重复结构域具有至少70％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。

6、在第三方面，本发明涉及包含编码本文所述的结合蛋白、n末端加帽重复和/或c末端加帽重复的核酸序列的核酸。

7、在另外的方面，本发明涉及一种包含第三方面的所述核酸的宿主细胞，其中其任选地表达本发明的结合蛋白。

8、在另外的方面，本发明涉及一种包含第三方面的所述核酸分子的载体。

9、在另外的方面，本发明涉及一种包含分子的颗粒，其中所述分子任选地是本文所述的结合蛋白。

10、在另外的方面，本发明涉及一种组合物，所述组合物包含本文所述的结合蛋白、本文所述的核酸、本文所述的宿主细胞、本文所述的载体、本文所述的颗粒或其中多种。

11、在另外的方面，本发明涉及一种药物组合物，所述药物组合物包含以下中的至少一种：本文所述的结合蛋白、核酸、宿主细胞、载体和/或颗粒。

12、在另外的方面，本发明涉及用于作为药剂使用的上述结合蛋白、核酸、宿主细胞、载体、颗粒、组合物或药物组合物。

13、在又另一方面，本发明涉及一种试剂盒，所述试剂盒包含上述结合蛋白、核酸、载体、宿主细胞、颗粒、组合物或药物组合物。

14、在本发明的一个方面，本文公开的结合蛋白、核酸、载体、颗粒、宿主细胞、组合物、药物组合物或试剂盒用于在病症的治疗、预防或诊断中使用。

技术特征：

1.一种包含至少一个锚蛋白重复结构域的结合蛋白，其中所述至少一个锚蛋白重复结构域特异性结合cd32a，并且其中所述至少一个锚蛋白重复结构域包含具有选自以下的氨基酸序列的至少一个锚蛋白重复单元：

2.一种包含至少一个锚蛋白重复结构域的结合蛋白，其中所述至少一个锚蛋白重复结构域特异性结合cd32a，并且

3.根据权利要求1或2所述的结合蛋白，其中所述至少一个锚蛋白重复结构域包含由根据seq id no:31的氨基酸序列组成的至少一个锚蛋白重复单元

4.根据权利要求3所述的结合蛋白，其中

5.根据权利要求3所述的结合蛋白，其中

6.根据权利要求3中任一项所述的结合蛋白，其中

7.根据权利要求3至6中任一项所述的结合蛋白，所述结合蛋白进一步包含n末端和/或c末端加帽重复结构域，优选地其中所述n末端和/或c末端加帽重复结构域具有不同于所述锚蛋白重复单元中的任何一个的氨基酸序列。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的结合蛋白，其中所述结合蛋白包括抗原结合蛋白，优选地其包括darpin，或者是darpin。

9.一种核酸，所述核酸包含编码根据权利要求1至8中任一项所述的结合蛋白的核酸。

10.一种载体，所述载体包含根据权利要求9所述的核酸或根据权利要求1-8中任一项所述的结合蛋白。

11.一种载体，所述载体展示至少一种根据权利要求1-8中任一项所述的结合蛋白。

12.一种药物组合物，所述药物组合物包含至少一种根据权利要求1至8中任一项所述的结合蛋白、或根据权利要求9所述的核酸、或根据权利要求10或11所述的载体以及药学上可接受的载体。

13.根据权利要求1至8中任一项所述的结合蛋白、根据权利要求9所述的核酸、根据权利要求10或11所述的载体或根据权利要求12所述的药物组合物，所述结合蛋白、所述核酸、所述载体或所述药物组合物用作药剂。

14.根据权利要求1至8中任一项所述的结合蛋白、根据权利要求9所述的核酸、根据权利要求10或11所述的载体或根据权利要求12所述的药物，所述结合蛋白、所述核酸、所述载体或所述药物用于在治疗、预防或诊断受试者的与改变的cd32a水平相关的病症中使用，优选地其中与改变的cd32a相关的所述病症是hiv相关障碍。

15.一种试剂盒，所述试剂盒包含根据权利要求1-8中任一项所述的结合蛋白、根据权利要求9所述的核酸、根据权利要求10或11所述的载体或根据权利要求12所述的药物组合物，所述试剂盒用于在治疗、预防或诊断受试者的与改变的cd32a水平相关的病症中使用，优选地其中与改变的cd32a相关的所述病症是hiv相关障碍。

技术总结本发明涉及包含锚蛋白重复、特别是特异性结合CD32a或特异性靶向CD32a阳性细胞的锚蛋白重复的结合蛋白。公开了编码此类结合蛋白的核酸、核酸、包含所述核酸的载体、包含所述结合蛋白的颗粒、包含所述核酸的宿主细胞、药物组合物，以及用于在医学和/或几种基因疗法中使用的这些中的任一种。技术研发人员：V·里赫特,J·哈特曼,C·布赫霍兹,K·西楚特克受保护的技术使用者：联邦疫苗和生物医学药物研究所保罗-埃利希研究所技术研发日：技术公布日：2024/9/2