人广谱交叉反应性流感单克隆抗体及其使用方法与流程

本发明涉及流感中和抗体及其使用方法。

背景技术：

1、流感大流行代表对人类健康最大的急性感染威胁之一。接种疫苗依然是预防季节性流感和大流行性流感及其并发症的主要手段。诱导针对多种亚型流感病毒的广谱免疫的“通用”流感疫苗已经成为医学研究中长期追求的目标。最近发现了与ha茎上的高度保守疏水袋结合的人广谱中和“异源亚型”抗体(sbnab)，这一发现重新激起技术人员研制这种疫苗的努力。然而，在季节性流感的血清或h5n1疫苗中，或者在商业静脉内免疫球蛋白(ivig)制剂中，仅检测到极低浓度的sbnab。

2、人们一直在努力生产用于抗流感病毒免疫疗法的单克隆抗体(mab)和药物。具体地，致力于开发一种能中和所有各种流感病毒株的治疗性化合物。目前，仅报道了少数能够实现该目标的mab。这些mab通过淘选噬菌体抗体文库和从接种疫苗的志愿者筛选b细胞来分离。然而，对广谱中和流感抗体特征的更深入理解可以用于在更合理的设计方法中掺入某些结构决定簇，以发现和产生广泛的一组中和流感抗体。

3、因此，非常需要能够广谱中和流感病毒的附加单克隆抗体，以及通过合理的设计方法提高此类抗体的亲和力或功效的方法。

技术实现思路

1、本发明的各方面涉及中和流感病毒的分离的单克隆抗体。例如，流感病毒是甲型流感病毒。例如，本发明的分离的单克隆抗体中和甲型流感病毒i组和ii组毒株。

2、在实施方案中，该分离的单克隆抗体包含：重链，该重链包含具有氨基酸序列gftfsnyg(seq id no:7)的cdr1；具有氨基酸序列isfdgskk(seq id no:8)的cdr2，和具有氨基酸序列caklpspyyfdsrfvwvaasafhfw(seq id no:9)的cdr3；和轻链，该轻链包含具有氨基酸序列ssniggnt(seq id no:10)的cdr1；具有氨基酸序列tns(seq id no:11)的cdr2；和具有氨基酸序列caawddslngqvf(seq id no:12)的cdr3；重链，该重链包含具有氨基酸序列gftfsnyg(seq id no:7)的cdr1；具有氨基酸序列isfdgskk(seq id no:8)的cdr2，和具有氨基酸序列caklpspyyfdsrfvwvaasafhfw(seq id no:9)的cdr3；和轻链，该轻链包含具有氨基酸序列ssniggnt(seq id no:10)的cdr1；具有氨基酸序列tns(seq id no:11)的cdr2；和具有氨基酸序列caawdnslngqvf(seq id no:13)的cdr3；或重链，该重链包含具有氨基酸序列gftfsnyg(seq id no:7)的cdr1；具有氨基酸序列isfdgskk(seq id no:8)的cdr2，和具有氨基酸序列caklpspyyfdsrfvwvaasafhfw(seq id no:9)的cdr3；和轻链，该轻链包含具有氨基酸序列ssnigxnt(seq id no:14)的cdr1；具有氨基酸序列tns(seq id no:11)的cdr2；和具有氨基酸序列caawddslngqvf(seq id no:12)的cdr3；并且其中该分离的单克隆抗体还在fc区中包含至少一个突变。在实施方案中，x不是甘氨酸。在实施方案中，x是丝氨酸。

3、本发明的各方面还涉及分离的单克隆抗体，其中所述抗体包含vh氨基酸序列seqid no:2和vl氨基酸序列seq id no:4；或vh氨基酸序列seq id no:2和vl氨基酸序列seqid no:6；并且其中该分离的单克隆抗体还在fc区中包含至少一个突变。例如，fc区中的至少一个突变包括l234a、l235a、k322a、l234f、l235e、p329g、p331s、n297a、n297d和n297q氨基酸置换。例如，突变的fc区包含l234a和l235a氨基酸置换。

4、在实施方案中，抗体是去糖基化的。

5、在实施方案中，抗体与流感病毒的ha茎区结合。

6、在实施方案中，抗体是igg1或igg4。例如，igg4包括稳定化的igg4。

7、在实施方案中，抗体与治疗剂或诊断剂相关。例如，治疗剂是毒素、放射性标记、sirna、小分子或细胞因子。

8、在实施方案中，抗体包括人抗体、人源化抗体、嵌合抗体或镶嵌抗体。

9、本发明的各方面还涉及多特异性抗体。例如，多特异性抗体是双特异性抗体或三特异性抗体。例如，双特异性抗体包括如本文所述与第一抗原结合的抗体，和与第二抗原免疫特异性结合的抗体。例如，与第二抗原免疫特异性结合的抗体包括抗乙型流感ha或抗甲型流感na。

10、本发明的各方面还涉及产生如本文所述抗体的细胞。

11、更进一步，本发明的各方面涉及一种包含如本文所述抗体和药学上可接受的载剂、赋形剂或稀释剂的组合物。

12、另外的方面涉及编码如本文所述分离的单克隆抗体的核酸序列、包含该核酸序列的载体，以及/或者包含该载体的细胞。

13、另外，本发明的各方面还涉及一种包含如本文所述抗体的纳米颗粒。

14、本发明的各方面涉及一种预防或治疗由流感病毒引起的疾病或病症的方法。在实施方案中，该方法包括向有遭受所述疾病或病症风险的受试者施用治疗有效量的如本文所述抗体，或包含该抗体的组合物。实施方案可以还包括向受试者施用抗病毒剂。在实施方案中，将抗体或组合物静脉内施用于受试者。

技术特征：

1.一种中和流感病毒的分离的单克隆抗体，所述分离的单克隆抗体包含：

2.一种分离的单克隆抗体，其中所述抗体包含：

3.根据权利要求1或2所述的分离的单克隆抗体，其中所述fc区中的所述至少一个突变包括l234a、l235a、k322a、l234f、l235e、p329g、p331s、n297a、n297d和n297q氨基酸置换。

4.根据权利要求1或2所述的分离的单克隆抗体，其中所述突变的fc区包含l234a和l235a氨基酸置换。

5.根据权利要求1所述的分离的单克隆抗体，其中x不是甘氨酸。

6.根据权利要求1所述的分离的单克隆抗体，其中x是丝氨酸。

7.根据权利要求1或2所述的分离的单克隆抗体，其中所述抗体是去糖基化的。

8.根据权利要求1或2所述的抗体，其中所述抗体与所述流感病毒的的ha的茎区结合。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的抗体，其中所述流感病毒是甲型流感病毒。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的抗体，其中所述抗体中和甲型流感病毒组i和组ii毒株。

11.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体是igg1或igg4。

12.根据权利要求11所述的抗体，其中所述igg4包括稳定化的igg4。

13.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其与治疗剂或诊断剂相关。

14.根据权利要求13所述的抗体，其中所述治疗剂是毒素、放射性标记、sirna、小分子或细胞因子。

15.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体包括人抗体、人源化抗体、嵌合抗体或镶嵌抗体。

16.一种双特异性抗体，所述双特异性抗体包含根据权利要求1所述的抗体和与第二抗原免疫特异性结合的抗体。

17.根据权利要求16所述的双特异性抗体，其中与第二抗原免疫特异性结合的所述抗体包括抗乙型流感ha或抗甲型流感na。

18.一种细胞，所述细胞产生根据权利要求1至17中任一项所述的抗体。

19.一种组合物，所述组合物包含根据权利要求1至17中任一项所述的抗体和药学上可接受的载剂、赋形剂或稀释剂。

20.一种核酸序列，所述核酸序列编码根据权利要求1或权利要求2所述的分离的单克隆抗体。

21.一种载体，所述载体包含根据权利要求20所述的核酸。

22.一种细胞，所述细胞包含根据权利要求21所述的载体。

23.一种纳米颗粒，所述纳米颗粒包含根据权利要求1至17中任一项所述的抗体。

24.一种预防或治疗由流感病毒引起的疾病或病症的方法，所述方法包括向有遭受所述疾病或病症风险的受试者施用治疗有效量的根据权利要求1或权利要求2所述的抗体，或者根据权利要求19所述的组合物。

25.根据权利要求24所述的方法，还包括向所述受试者施用抗病毒剂。

26.根据权利要求24所述的方法，其中将所述抗体或组合物静脉内施用于所述受试者。

技术总结本发明提供了对于与流感病毒的HA蛋白的茎结构域结合很重要的结构决定簇，以及基于这些决定簇产生高亲和力中和性流感病毒抗体的结构决定簇使用方法。本发明还提供了测定流感病毒疫苗功效的工具。本发明还提供了可用于确定流感病毒疫苗在受试者中的功效，或者用于预测既往对疫苗或流感病毒感染的免疫暴露或抗原反应性的分子标签。技术研发人员：W·A·马拉斯科,H·U·拉姆斯特德受保护的技术使用者：丹娜-法伯癌症研究所技术研发日：技术公布日：2024/9/9