一种鸭呼肠孤病毒σC蛋白单克隆抗体及其杂交瘤细胞株和应用

本发明属于生物免疫学，具体涉及一种鸭呼肠孤病毒σc蛋白单克隆抗体及其杂交瘤细胞株和应用。

背景技术：

1、鸭呼肠孤病毒(duck reovirus，drv)是呼肠孤病毒科正呼肠孤病毒属禽呼肠孤病毒的成员之一。

2、鸭呼肠孤病毒属于呼肠孤病毒科，正呼肠孤病毒属，呈二十面体对称结构，有囊膜的双链rna节段病毒，病毒粒子直径约为60-80nm，基因组全长为约23.4kb。根据其病毒基因组的双链rna节段的大小，分为l(l1、l2、l3)、m(m1、m2、m3)和s(s1、s2、s3、s4)共十个节段。drv除了s1节段含有3个顺反子外，即含有3个开放阅读框，分别编码p10、p18和σc蛋白，其余9个节段仅含有单个顺反子，对应编码1种蛋白。其中，σc蛋白是drv的主要衣壳蛋白，参与病毒的吸附、增殖，能够促进合胞体形成，并且可以诱导机体产生特异性抗体和保护性中和抗体，因此σc蛋白成为鸭呼肠孤病毒新型基因工程疫苗和诊断试剂研发的首选抗原。

3、目前鸭呼肠孤病毒的检测技术包括：病毒分离、rt-pcr、rt-qpcr、间接免疫荧光(ifa)、elisa等方法，但检测所需时间长，成本昂贵，并且目前尚无针对鸭呼肠孤病毒的检测的商品化试剂盒。

技术实现思路

1、为了克服上述现有技术的缺点和不足，本发明的目的是提供一种鸭呼肠孤病毒σc蛋白单克隆抗体及其杂交瘤细胞株和应用，以解决现有技术检测鸭呼肠孤病毒检测时间长以及成本昂贵的问题。

2、本发明解决上述技术问题的技术方案如下：提供一种鸭呼肠孤病毒σc蛋白单克隆抗体，该单克隆抗体的重链可变区具有vh cdr1、vh cdr2和vh cdr3三个互补决定区，分别由seq id no.5、seq id no.6和seq id no.7所示氨基酸序列组成；轻链可变区具有vlcdr1、vl cdr2和vl cdr3三个互补决定区，分别由seq id no.8、seq id no.9和seq idno.10所示氨基酸序列组成。

3、本发明的有益效果为：本发明用纯化鸭呼肠孤病毒drv-th11株的重组免疫σc蛋白免疫balb/c小鼠，通过细胞融合技术，筛选出1株能稳定分泌鸭呼肠孤病毒σc蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞，获得鸭呼肠孤病毒σc蛋白单克隆抗体；通过对杂交瘤细胞测序，获得鸭呼肠孤病毒σc蛋白单克隆抗体的轻链和重链序列。

4、在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进：

5、进一步，重链可变区的氨基酸序列如seq id no.2所示，轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.4所示。

6、进一步，鸭呼肠孤病毒σc蛋白单克隆抗体亚型为igg2。

7、本发明的另一目的在于提供一种核酸分子，可以编码上述抗鸭呼肠孤病毒σc蛋白单克隆抗体。

8、本发明的另一目的在于提供一种表达载体，包括上述核酸分子。

9、本发明的另一目的在于提供一种分泌如权利上述鸭呼肠孤病毒σc蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，该杂交瘤细胞株为小鼠杂交瘤细胞1d5e8，其保藏号为cgmccno.45840，于2024年4月10日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。

10、本发明的另一目的在于提供上述鸭呼肠孤病毒σc蛋白单克隆抗体在制备检测鸭呼肠孤病毒的试剂盒中的应用。

11、进一步，试剂盒为western blot检测用试剂盒。

12、进一步，试剂盒为间接免疫荧光ifa检测试剂盒。

13、进一步，试剂盒为免疫组织化学ihc检测试剂盒。

14、本发明具有以下有益效果：本发明提供了一种杂交瘤细胞株，能够分泌鸭呼肠孤病毒σc蛋白单克隆抗体，该抗体具有高特异性和稳定性，可以特异性识别感染鸭呼肠孤病毒的细胞，适用于免疫学检测。

技术特征：

1.一种鸭呼肠孤病毒σc蛋白单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体的重链可变区具有vh cdr1、vh cdr2和vh cdr3三个互补决定区，分别由seq id no.5、seq id no.6和seqid no.7所示氨基酸序列组成；轻链可变区具有vl cdr1、vl cdr2和vl cdr3三个互补决定区，分别由seq id no.8、seq id no.9和seq id no.10所示氨基酸序列组成。

2.根据权利要求1所述的鸭呼肠孤病毒σc蛋白单克隆抗体，其特征在于，所述重链可变区的氨基酸序列如seq id no.2所示，所述轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.4所示。

3.根据权利要求2所述的鸭呼肠孤病毒σc蛋白单克隆抗体，其特征在于，其亚型为igg2。

4.一种核酸分子，其特征在于，所述核酸分子为编码权利要求1-3任一项所述的抗鸭呼肠孤病毒σc蛋白单克隆抗体的核酸分子。

5.一种表达载体，其特征在于，所述载体包括权利要求4所述的核酸分子。

6.一种分泌如权利要求1-3任一项所述的鸭呼肠孤病毒σc蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于，所述杂交瘤细胞株为小鼠杂交瘤细胞1d5e8，其保藏号为cgmccno.45840，于2024年4月10日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。

7.权利要求1-3任一项所述的鸭呼肠孤病毒σc蛋白单克隆抗体在制备检测鸭呼肠孤病毒的试剂盒中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述试剂盒为western blot检测用试剂盒。

9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述试剂盒为间接免疫荧光ifa检测试剂盒。

10.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述试剂盒为免疫组织化学ihc检测试剂盒。

技术总结本发明公开了一种鸭呼肠孤病毒σC蛋白单克隆抗体及其杂交瘤细胞株和应用，属于生物免疫学技术领域。本发明用纯化鸭呼肠孤病毒DRV‑TH11株的重组免疫σC蛋白免疫BALB/c小鼠，通过细胞融合技术，筛选出能稳定分泌鸭呼肠孤病毒σC蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞，获得鸭呼肠孤病毒σC蛋白单克隆抗体；通过对杂交瘤细胞测序，获得鸭呼肠孤病毒σC蛋白单克隆抗体的轻链和重链序列，重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。本发明制备得到的抗体具有高特异性和稳定性，可以特异性识别感染鸭呼肠孤病毒的细胞，适用于免疫学检测。技术研发人员：陈宗艳,黄聪,陈鸿军受保护的技术使用者：中国农业科学院上海兽医研究所（中国动物卫生与流行病学中心上海分中心）技术研发日：技术公布日：2024/9/9