一种伏环孢素的制备方法

本发明涉及化学合成，具体涉及一种伏环孢素的制备方法。

背景技术：

1、伏环孢素（voclosporin），是由加拿大isotechnika制药公司设计并合成，口服伏环孢素于2021年经美国食品药品监督管理局（fda）批准上市，商品名lupkynis。本品临床可用于治疗狼疮性肾炎。与同类药物相比，伏环孢素有一定的优势特点，其具有更高的免疫抑制活性，并且其中反式伏环孢素的免疫抑制活性是顺式的1.5倍，是环孢素a的5倍；并且与环孢素a相比毒副作用更小，肾毒性明显降低。该药已广泛的应用于治疗狼疮性肾炎，并且具有广阔的市场需求和开发前景。

2、而现有常用的伏环孢素合成路线如图1所示，路线以环孢素a为起始原料，首先将1位氨基酸的羟基用乙酰基保护，然后通过氧化得到乙酰-环孢素a醛，再与wittig试剂反应引入碳链，最后脱去乙酰基即可得到伏环孢素。

3、然而氧化反应的过程中，需要使用剧毒且昂贵的四氧化锇，同时使用烯丙基三苯基溴化磷反应后会生成三苯氧磷，其与伏环孢素极性相近，纯化困难，需多次使用不同极性的柱层析才能将其分离，使得反应后产率很低，严重影响反应的可操作性和经济效益。

4、因此，为了保证商业化产品质量，提高反应产率，需对生产过程中的工艺路线进行优化。

技术实现思路

1、为了解决上述技术问题，本发明的目的是提供一种伏环孢素的制备方法，以环孢素a为原料，能够便捷地合成伏环孢素，反应条件温和，收率高，纯度高，有效解决了现有技术中纯化困难、产率低以及可操作性和经济效益低等问题。

2、本发明解决上述技术问题的技术方案如下：提供一种伏环孢素的制备方法，其制备路线为：

3、；

4、该制备方法具体包括以下步骤：

5、（1）将化合物m0在碱性条件下与乙酰化化试剂反应，得化合物m1；

6、（2）将步骤（1）所得化合物m1与氧化剂一发生氧化反应，得化合物m2；

7、（3）将步骤（2）所得化合物m2与氧化剂二发生氧化反应，得化合物m3；

8、（4）将步骤（3）所得化合物m3在碱性条件下与horner-wittig试剂反应，得化合物1a；

9、（5）将步骤（4）所得化合物1a与还原剂发生选择性还原反应，得化合物1aa；

10、（6）将步骤（5）所得化合物1aa与脱水剂发生脱水反应，得化合物m4；

11、（7）将步骤（6）所得化合物m4在碱性条件下发生脱乙酰保护，得化合物m5，即伏环孢素。

12、进一步，步骤（1）中，碱液为吡啶，乙酰化化试剂为乙酸酐；化合物m0、乙酸酐和吡啶摩尔比为1:10:15。

13、进一步，步骤（2）中，氧化剂一为锇酸钾二水合物和n-甲基吗啉氧化物；化合物m1、锇酸钾二水合物和n-甲基吗啉氧化物摩尔比为1:0.03:2。

14、进一步，步骤（3）中，氧化剂二为高碘酸钠；化合物m2和氧化剂二摩尔比为1:2。

15、进一步，步骤（4）中，碱液为碳酸钾，horner-wittig试剂为丙酮基磷酸二乙酯；化合物m3、丙酮基磷酸二乙酯和碳酸钾摩尔比为1:3:3。

16、进一步，步骤（5）中，还原剂为硼氢化钠和七水氯化铈；化合物1a、硼氢化钠和七水氯化铈摩尔比为1:2:2。

17、进一步，步骤（6）中，脱水剂为对甲苯磺酸一水合物；化合物1aa和对甲苯磺酸一水合物摩尔比为1:0.3。

18、进一步，步骤（7）中，碱液为碳酸钾；化合物m4和碳酸钾摩尔比为1:8。

19、进一步，步骤（1）中，在-10-35 ℃反应1-3 d。

20、进一步，步骤（2）和（3）中，在0-25 ℃反应5-24 h。

21、进一步，步骤（4）中，在0-25 ℃反应3 d。

22、进一步，步骤（5）中，在0-25 ℃反应3-5 h。

23、进一步，步骤（6）中，在0-120 ℃反应1-3 h。

24、进一步，步骤（7）中，在0-25 ℃反应1-3 d。

25、具体地，本发明提供的伏环孢素的制备方法，包括以下步骤：

26、（1）将化合物m0、吡啶和dmap溶于二氯甲烷中，在冰浴条件下搅拌0.5 h至0 ℃，然后将乙酸酐溶于二氯甲烷中，缓慢滴加到反应体系中，搅拌至室温，在35 ℃下搅拌反应3d，点板检测反应完全后，加水搅拌0.5 h，静置分层，水层用二氯甲烷萃取3次，合并有机相，再将有机相依次用1 n盐酸、水、饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，得化合物m1；

27、（2）将化合物m1、锇酸钾二水合物溶于丙酮和水，在冰浴条件下搅拌0.5 h至0 ℃，然后将n-甲基吗啉氧化物溶于水中，分批次缓慢滴加到反应体系中，滴加完成后恢复至室温，搅拌反应36 h，点板检测反应完全后，真空浓缩去除大部分丙酮，再加入亚硫酸氢钠溶液搅拌0.5 h，用乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，再将有机相依次用水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，得化合物m2；

28、（3）将化合物m2溶于甲醇中，在冰浴条件下搅拌0.5 h，然后将高碘酸钠溶于水中，缓慢滴加至反应体系中，滴加完成后自然恢复至室温，搅拌反应24 h，点板检测反应完全后，硅藻土过滤，少量甲醇洗涤，滤液中加入饱和硫代硫酸钠溶液搅拌0.5 h淬灭反应，真空浓缩去除大部分甲醇，又有固体析出再次使用硅藻土过滤，少量甲醇洗涤，真空浓缩去除大部分甲醇，乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，将有机相依次用水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，得化合物m3；

29、（4）将化合物m3溶于四氢呋喃中，在冰浴条件下搅拌0.5 h，加入碳酸钾，然后将丙酮基磷酸二乙酯分批次加入反应体系中，升温至室温反应3 d，点板检测反应完全后，真空浓缩去除四氢呋喃，再溶于乙酸乙酯和水的混合溶液中，静置分层，水层用乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，将有机相依次用水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，得淡黄色油状物粗品；最后经柱层析洗脱分离纯化，得化合物1a；

30、（5）将化合物1a溶于无水甲醇中，0 ℃下搅拌0.5 h，加入七水氯化铈，然后将硼氢化钠缓慢加入反应体系中，缓慢搅拌至室温反应0.5 h，点板检测反应完全后，加水搅拌0.5h，真空浓缩去除大部分甲醇，水层用乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，将有机相依次用水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，得化合物1aa；

31、（6）在氩气气氛下，将化合物1aa溶于甲苯中，加入对甲苯磺酸，在120 ℃回流搅拌反应2 h，点板检测反应完全后，将反应产物降至室温，依次用水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，得黄色泡沫状固体粗品；最后经柱层析洗脱分离纯化，得化合物m4；

32、（7）将化合物m4溶于甲醇中，并加水，然后加入碳酸钾搅拌反应2 d，点板检测反应完全后，减压浓缩去除大部分甲醇，水层用乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，依次用0.5 n盐酸、水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，得伏环孢素粗品；最后经柱层析洗脱分离纯化，得化合物m5，即伏环孢素。

33、本发明具有以下有益效果：

34、1、本发明以环孢素a为原料，通过乙酰保护、氧化反应、horner-wittig反应、还原、脱水和脱乙酰化反应合成得到伏环孢素。通过本发明方法能够便捷地合成伏环孢素，反应条件温和，收率高，纯度高，有利于在商业化生产时以更为便捷和更高的产率得到伏环孢素，具有优异的应用前景。

35、2、本发明在氧化反应使用更为安全易得的k2oso4·2h2o，反应收率为 88%；使用反应条件温和、副产物易溶于水而除去的 horner-wittig 试剂丙酮基磷酸二乙酯与乙酰csa 醛偶联反应制备中间体 1a，产率可达 87%；后续经硼氢化钠 nabh4、七水氯化铈cecl3·7h2o 选择性还原羰基后和对甲苯磺酸脱水也可得到乙酰伏环孢素，两步产率都在80%以上。该优化路线反应条件温和、操作简单、纯化便捷，反应总产率达 28%，比原始路线提高了一倍。