一种D-葡萄糖酸-δ-内酯中D-甘露糖酸-δ-内酯的定量检测方法与流程

本发明属于化学制药和药物分析，涉及一种d-葡萄糖酸-δ-内酯中差向异构体的定量检测方法。更具体地说，本发明涉及一种d-葡萄糖酸-δ-内酯中d-甘露糖酸-δ-内酯的定量检测方法。

背景技术：

1、d-葡萄糖酸-δ-内酯(简称d-葡萄糖酸-δ-内酯，gdl)为白色晶体或结晶性粉末，极易溶于水，微溶于乙醇，不溶于乙醚。d-葡萄糖酸-δ-内酯是目前国际上公认的无毒食品添加剂，可用于制造豆腐的凝固剂、制造面包的膨松剂、制造沙拉的保鲜剂、制造奶酪的酸味剂、制造香肠腊肉的保色剂。也可作为工业添加剂，在牙膏中作为清洗剂有助于清除牙垢，在混凝土中作为减水剂降低水的比例，增强水泥的初期强度。此外，d-葡萄糖酸-δ-内酯在医药领域还被广泛用于钠-葡萄糖协同转运蛋白2(sglt-2)抑制剂类降糖药物的合成。

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3、例如，阿斯利康开发的达格列净，勃林格殷格翰公司研制的恩格列净，以及强生公司开发的坎格列净等sglt-2抑制剂类降糖药物的合成工艺中，均使用d-葡萄糖酸-δ-内酯作为关键起始物料，用于其分子中糖元结构片段的构建。

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5、在药物的合成过程中，物料带入的杂质也会参与药物合成的各步化学反应，生成相应的新杂质，从而进一步影响到药物的纯度、药效，甚至增大药物的毒副作用。所以，药物的质量控制包括对其合成过程中使用到的各物料的质量控制。同样，d-葡萄糖酸-δ-内酯作为合成恩格列净、达格列净等sglt-2抑制剂类降糖药物的关键起始物料，其所含的特征杂质也会在很大程度上影响到恩格列净、达格列净的特征杂质谱。

6、d-葡萄糖酸-δ-内酯产业化的制备工艺通常采用化学催化氧化法，即在过渡金属钯的催化作用下，以活性炭为载体，将d-葡萄糖催化氧化为d-葡萄糖酸，d-葡萄糖酸再在一定条件下发生分子内酯化反应得到d-葡萄糖酸-δ-内酯。

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8、酯化反应是一个可逆反应，d-葡萄糖酸很难实现完全转化，所以，d-葡萄糖酸-δ-内酯中通常含有d-葡萄糖酸。其次，d-d-葡萄糖酸-δ-内酯化过程中，更倾向于生成构象更稳定的六元环内酯，即d-葡萄糖酸-δ-内酯，但同时也可能会生成五元环内酯。所以，d-葡萄糖酸-δ-内酯中通常含有五元环的d-葡萄糖酸-γ-内酯。最重要的是，酯化反应通常在酸的催化作用下进行，d-葡萄糖酸羧基α位碳上的羟基在酸性条件下容易发生消旋，生成其羧基α位的差向异构体，内酯化后即生成d-甘露糖酸-δ-内酯。所以，d-葡萄糖酸-δ-内酯中通常含有c2位的差向异构体d-甘露糖酸-δ-内酯。

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10、如何有效检测d-葡萄糖酸-δ-内酯中上述的潜在杂质，对于d-葡萄糖酸-δ-内酯的质量控制以及后续恩格列净、达格列净原料药成品的质量控制都具有非常重要的意义。其中，d-葡萄糖酸和d-葡萄糖酸-γ-内酯因结构上与d-葡萄糖酸-δ-内酯具有较大的差异。所以，通常这两种杂质在常规的色谱系统下，利用通用检测器(如：示差检测器和cad检测器)和常规色谱柱即可实现有效的分离和定量检测。现有技术中d-葡萄糖酸-δ-内酯的分析方法含量通常采用滴定的方式测定，相关物质的检测如葡萄糖、葡萄糖酸和d-葡萄糖酸-γ-内酯通常使用高效液相色谱法检测。

11、但c2位的差向异构体杂质d-甘露糖酸-δ-内酯结构与d-葡萄糖酸-δ-内酯极其相似，仅在c2上存在一个手性构象差异，且紫外吸收弱，在一般色谱系统下实现分离和定量检测难度极大。也并未见有现有技术报道d-葡萄糖酸-δ-内酯中c2差向异构体d-甘露糖酸-δ-内酯的定量检测方法。但d-葡萄糖酸-δ-内酯作为列净类药物的关键起始物料，差相异构体如不严格控制，则该异构体杂质一直参与后续反应，并带入原料药成品中，给最终产品质量带来巨大风险。因此，开发快速、灵敏有效的分析方法定量检测d-葡萄糖酸-δ-内酯中d-甘露糖酸-δ-内酯含量具有非常重要的意义。

技术实现思路

1、本发明提供了一种d-葡萄糖酸-δ-内酯中d-甘露糖酸-δ-内酯的定量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

2、(1)d-葡萄糖酸-δ-内酯供试样品经还原反应衍生为d-山梨糖醇，该供试样品中所含的杂质d-甘露糖酸-δ-内酯同样也会经还原反应衍生为d-甘露糖醇，

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4、(2)利用高效液相色谱仪，经钙柱色谱柱分离步骤(1)衍生所得混合物，在示差检测器中可定量检测d-山梨糖醇中d-甘露糖醇的含量，即为d-葡萄糖酸-δ-内酯中d-甘露糖酸-δ-内酯的含量。

5、本发明所述的定量检测方法，其特征在于，步骤(1)中d-葡萄糖酸-δ-内酯供试样品的衍生步骤包括：供试样品分散在有机溶剂中，经还原剂还原、淬灭、浓缩，得到衍生混合物用于步骤(2)。

6、本发明所述的定量检测方法，其特征在于，步骤(1)中d-葡萄糖酸-δ-内酯供试样品的还原反应中，还原剂选自硼氢化钾、硼氢化钠、二异丁基氢化铝，有机溶剂选自四氢呋喃。

7、本发明所述的定量检测方法，其特征在于，步骤(1)还原反应中还原剂用量为d-葡萄糖酸-δ-内酯供试样品的4～6摩尔当量。

8、本发明所述的定量检测方法，其特征在于，步骤(1)还原反应的温度选择60～70℃。

9、本发明所述的定量检测方法，其特征在于，步骤(2)中高效液相色谱仪的检测条件为：色谱柱选自钙柱或其等效柱；流速0.5ml/min±0.05ml/min；进样量20μl；柱温80℃±2℃；示差检测器温度50℃±2℃；运行时间30min～60min；流动相为纯化水。

10、本发明所述的定量检测方法，为一种新的定量检测方法，未见有文献报道，具有显著的实用性。

技术特征：

1.一种d-葡萄糖酸-δ-内酯中d-甘露糖酸-δ-内酯的定量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的定量检测方法，其特征在于，步骤(1)中d-葡萄糖酸-δ-内酯供试样品的衍生步骤包括：供试样品分散在有机溶剂中，经还原剂还原、淬灭、浓缩，得到衍生混合物用于步骤(2)。

3.如权利要求1或2所述的定量检测方法，其特征在于，步骤(1)中d-葡萄糖酸-δ-内酯供试样品的还原反应中，还原剂选自硼氢化钾、硼氢化钠、二异丁基氢化铝，有机溶剂选自四氢呋喃。

4.如权利要求3所述的定量检测方法，其特征在于，步骤(1)还原反应中还原剂用量为d-葡萄糖酸-δ-内酯供试样品的4～6摩尔当量。

5.如权利要求3所述的定量检测方法，其特征在于，步骤(1)还原反应的温度选择60～70℃。

6.如权利要求1所述的定量检测方法，其特征在于，步骤(2)中高效液相色谱仪的检测条件为：色谱柱选自钙柱或其等效柱；流速0.5ml/min±0.05ml/min；进样量20μl；柱温80℃±2℃；示差检测器温度50℃±2℃；

技术总结本发明提供了一种D‑葡萄糖酸‑δ‑内酯中D‑甘露糖酸‑δ‑内酯的定量检测方法。该方法可快速、灵敏、有效的定量检测出D‑葡萄糖酸‑δ‑内酯中D‑甘露糖酸‑δ‑内酯含量。技术研发人员：汪海波,肖扬,金辉,金诗苑,于安生,邓杰,徐恬静,欧阳晓辉,张春娥,冯尚军受保护的技术使用者：浙江宏元药业股份有限公司技术研发日：技术公布日：2024/9/9