一种藜麦中降压活性多肽的制备方法及应用

本发明涉及生物，特别涉及一种藜麦中降压活性多肽的制备方法及应用。

背景技术：

1、藜麦(chenopodium quinoa willd.)，是藜科藜属植物。藜麦是唯一一种全谷物完全蛋白质碱性食物，蛋白质含量高达14-23％，品质与奶粉和肉类相当。并且富含多种氨基酸，均衡含有人体必需的全部9种必需氨基酸，比例适当而且易于吸收，优于谷物和豆类，尤其富含植物中缺乏的赖氨酸、锰、铁、钾等矿物质含量极高，平均是谷物的3-10倍。藜麦还富含不饱和脂肪酸、类黄酮、b族维生素和e族维生素、胆碱、甜菜碱、叶酸、植物甾醇、脂肪酸、a-亚麻酸、葡聚糖等多种有益化合物。同时，藜麦不含麸质，拥有高膳食纤维、零胆固醇、低脂、低热量、低升糖。藜麦具有均衡补充营养，修复体质，增强免疫力，调节内分泌，降三高、提高机体应激能力，预防疾病，抗氧化，抗癌，减肥，辅助治疗等效果。是慢性病患者，高营养需求人群和工作繁忙人士的首选食物。

2、食源性生物活性肽与其他生物活性肽相比具有无毒无害效果温和无副作用等更加安全的特点，近年来众多研究学者通过不同制备方式将核桃、辣木籽、螺旋藻、桑叶、芝麻等植物作为蛋白原料提取制备出了具有明显血管紧张素转换酶(ace)抑制活性的生物活性肽，而藜麦作为优良营养作物已被发现其生物活性肽具有抗糖、抗压、抗炎、抗菌等作用。

技术实现思路

1、本发明所要解决的技术问题是提供一种藜麦中降压活性多肽的制备方法及应用，制备得到四条多肽氨基酸序列，且四条肽均未被报道过且具有一定血管紧张素转化酶抑制能力。

2、本发明所要解决的技术问题是通过以下技术方案来实现的：

3、本申请的一个目的在于提供一种藜麦中降压活性多肽的制备方法，包括以下步骤：

4、(1)藜麦蛋白的提取：将藜麦打碎磨粉过60目筛，与醋酸溶液按质量体积比1:5比例混合，浸提后离心，收集上清液，旋转蒸发和冷冻干燥，得到藜麦蛋白；

5、(2)藜麦多肽制备：将藜麦蛋白复溶成底物浓度为5％的溶液，加入木瓜蛋白酶，调节ph为6.2，在55.7℃下酶解3h，100℃水浴锅中灭酶10min，冷却后离心，收集上清液；

6、(3)离子交换层析：使用0.002mol/l的tris-hcl缓冲液和初始缓冲液+0.3mol/lnacl等度洗脱，流速3ml/min，进样量2ml，280nm波长处检测吸光度，收集各洗脱峰并测定各洗脱峰的ace抑制率；

7、(4)葡聚糖凝胶sephadex g-15分离纯化：将样品加在凝胶柱中，用超纯水进行洗脱，进样量2ml，流速3ml/min，收集各洗脱峰并测定ace抑制率；

8、(5)rp-hplc分离纯化：使用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，乙腈/甲酸水溶液进行梯度洗脱，洗脱条件为流动相a乙腈，b含0.1％甲酸的超纯水，梯度洗脱：洗脱梯度：2％～56％ b 12min，56％～95％ b 4min，95％～95％ b 5min，95％～2％ b 2min，2％～2％ b2min。检测波长280nm柱温35℃，进样量100μl，流速1ml·min-1，自动进样，手动收集各峰处的液体，组分分别浓缩，并测定ace抑制率。

9、优选地，步骤(1)中，所述藜麦蛋白提取步骤中使用的醋酸溶液浓度为0.1mol/l；浸提条件为：在40℃下浸提3小时；离心条件为：5000r/min离心30min。

10、优选地，步骤(2)中，使用的木瓜蛋白酶用量为10456u/g，酶解温度为55.7℃，ph为6.2，酶解时间为3小时。

11、优选地，步骤(3)中，所述离子交换层析步骤中使用的tris-hcl缓冲液的ph值为7.0。

12、本申请的又一目的在于提供一种藜麦蛋白源的ace抑制肽，所述ace抑制肽是根据上述方法制备得到。

13、优选地，所述ace抑制肽具有下列氨基酸序列：

14、grcpgglccsk、atpaptpvh、hgsgygv或spfanrl。

15、本申请的再一目的在于提供一种药物组合物，所述药物组合物包含藜麦蛋白源的ace抑制肽。

16、优选地，所述药物组合物用于治疗高血压。

17、本申请的又一目的在于提供一种功能食品，所述功能食品包含藜麦蛋白源的ace抑制肽。

18、优选地，所述功能食品用于降低血压。

19、本发明上述技术方案，具有如下有益效果：

20、本申请通过单因素实验和响应面实验确定了藜麦蛋白酶解的最佳工艺参数，以及通过离子交换层析、葡聚糖凝胶层析和反相高效液相色谱分离纯化技术，成功从藜麦中提取并纯化出具有血管紧张素转换酶(ace)抑制活性的多肽。通过质谱鉴定筛选得到的四条多肽氨基酸序列均为未被报道过的新肽段。多肽具有血管紧张素转换酶(ace)抑制活性，有助于降低血压，对于高血压患者具有潜在的辅助治疗作用。本申请的制备工艺采用的酶解条件和层析技术能够高效地从藜麦中分离出具有生物活性的多肽，提高了制备工艺的效率。

技术特征：

1.一种藜麦中降压活性多肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的藜麦中降压活性多肽的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述藜麦蛋白提取步骤中使用的醋酸溶液浓度为0.1mol/l；浸提条件为：在40℃下浸提3小时；离心条件为：5000r/min离心30min。

3.根据权利要求1所述的藜麦中降压活性多肽的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，使用的木瓜蛋白酶用量为10456u/g，酶解温度为55.7℃，ph为6.2，酶解时间为3小时。

4.根据权利要求1所述的藜麦中降压活性多肽的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述离子交换层析步骤中使用的tris-hcl缓冲液的ph值为7.0。

5.一种藜麦蛋白源的ace抑制肽，其特征在于，所述ace抑制肽是根据权利要求1-4中任一所述方法制备得到。

6.根据权利要求5所述的藜麦蛋白源的ace抑制肽，其特征在于，所述ace抑制肽具有下列氨基酸序列：

7.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含权利要求5-6任一所述的藜麦蛋白源的ace抑制肽。

8.根据权利要求7所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物用于治疗高血压。

9.一种功能食品，其特征在于，所述功能食品包含权利要求5-6任一所述的藜麦蛋白源的ace抑制肽。

10.根据权利要求9所述的功能食品，其特征在于，所述功能食品用于降低血压。

技术总结本发明公开了一种藜麦中降压活性多肽的制备方法及应用，该制备方法包括以下步骤：(1)藜麦蛋白的提取；(2)藜麦多肽制备；(3)离子交换层析；(4)葡聚糖凝胶Sephadex G‑15分离纯化；(5)RP‑HPLC分离纯化，获得目的多肽。本发明通过上述技术获得具有血管紧张素转换酶(ACE)抑制活性的多肽。通过质谱鉴定筛选得到的四条多肽氨基酸序列均为未被报道过的新肽段。多肽具有ACE抑制活性，有助于降低血压，对于高血压患者具有潜在的辅助治疗作用。本申请的制备工艺采用的酶解条件和层析技术能够高效地从藜麦中分离出具有生物活性的多肽，提高了制备工艺的效率。技术研发人员：魏东,冯亭亭,尚鹤婷,栗慧,武天煜,高优伟,赵蕙新,褚明娟受保护的技术使用者：河北北方学院技术研发日：技术公布日：2024/9/9