一种银耳孢子胞外多糖及其制备方法与应用

本发明属于真菌多糖应用，具体涉及一种银耳孢子胞外多糖及其制备方法与应用。

背景技术：

1、银耳多糖被认为是与营养和人体健康有关的主要活性成分，具有多种有益的生物活性及功效，如抗氧化、免疫调节、调节肠道菌群等作用，被用作滋补保健佳品。目前银耳多糖主要是从子实体中提取，但已有研究表明，通过深层液体发酵法获取银耳多糖是可行的。近年来，液态深层发酵技术逐步替代传统子实体提取，解决了菌菇栽培地域气候限制多、时间成本高的产业瓶颈，推动了食药用真菌多糖产业的快速发展。

2、随着社会的发展和人们饮食结构的改变，使得糖尿病、高血压、高血脂等代谢疾病患病率逐年上升。糖尿病是一种以血糖升高为特征的代谢紊乱，目前最主要的患病类型是2型糖尿病，主要表现为血液、肝脏等组织糖脂水平的异常改变，与血脂异常、糖尿病肾病、动脉粥样硬化和心血管疾病密切相关。高脂血症是一种由于脂质代谢紊乱引起的脂质含量增加的疾病，也与动脉粥样硬化、冠心病、脑出血等心血管疾病的发生息息相关，严重影响人体健康。目前市场上多有各种用于降糖、降脂的药物，但这些药物存在低血糖、恶心腹泻、肝脏损伤、肌损害等副作用。因此，开发天然无毒无副作用的降糖降脂成分，从而制备成预防或治疗高血糖、血脂的食品或药物具有深远的意义。

技术实现思路

1、本发明所要解决的技术问题是针对现有技术中深层发酵银耳多糖的应用局限，提供一种银耳孢子胞外多糖。

2、本发明还要解决的技术问题是提供上述银耳孢子胞外多糖的制备方法。

3、本发明最后要解决的技术问题是提供上述银耳孢子胞外多糖的应用。

4、为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

5、一种银耳孢子胞外多糖tfpb，所述的银耳孢子胞外多糖的单糖组成及相应的单糖摩尔百分比为：甘露糖：葡萄糖醛酸：葡萄糖：木糖：岩藻糖：半乳糖：阿拉伯糖＝53.31％～55％：4.63％～6.6％：2.25％～5.1％：19.98％～25.2％：8.76％～14.63％：1.69％～1.8％：0.47％～0.67％。

6、其中，所述的银耳孢子胞外多糖的分子量为1000～1500kda；优选的分子量为1183.48～1200.77kda。

7、其中，所述的银耳孢子胞外多糖甘露糖以→2,3)-manp-(1→、manp-(1→、→3)-manp-(1→、→3,4)-manp-(1→连接，木糖以→4)-xylp-(1→和xylp-(1→残基形式连接，岩藻糖以→3)-fucp-(1→和fucp-(1→连接，葡萄糖以glcp-(1→形式存在，少量的半乳糖以→6)-galp-(1→、→3,4)-galp-(1→和→3,6)-galp-(1→连接。

8、上述银耳孢子胞外多糖的制备方法也在本发明所保护的范围之内，具体的，利用银耳tremella fuciformis s-41cgmcc no.40060发酵制备得到银耳孢子胞外多糖。

9、进一步的，利用银耳tremella fuciformis s-41cgmcc no.40060发酵制备得到发酵液，经粗提得到银耳孢子胞外粗多糖，再经离子交换柱纯化得到银耳孢子胞外多糖。

10、其中，所述的银耳tremella fuciformis s-41cgmcc no.40060，该菌株于2021年3月21日分离自福建古田的银耳子实体，已于2022年01月14日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌株号：s-41，分类命名：银耳tremella fuciformis，保藏编号：cgmcc no.40060，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。该菌株的详细信息已公开在专利cn117187080a和cn117187237a中。

11、其中，所述的利用银耳tremella fuciformis s-41cgmcc no.40060发酵制备得到发酵液，具体是将银耳菌株的种子液接种于发酵培养基中发酵培养制备得到发酵液。

12、其中，所述的种子液，是将活化后的银耳菌株接种至种子培养基中进行种子培养得到的。

13、具体的，所述的种子培养基配方为：葡萄糖5～30g/l，酵母粉1～5g/l，蛋白胨1～5g/l，硫酸镁0.1～2g/l，磷酸二氢钾1～10g/l，磷酸氢二钾0.1～2g/l，余下为水。

14、具体的，所述的种子培养，其条件为：20～32℃，转速150～200rpm条件下培养3～5天。

15、其中，所述的发酵，其发酵培养基配方为：葡萄糖50～70g/l、玉米浆5～10g/l、硫酸镁0.5～2g/l、磷酸氢二钾1～5g/l、磷酸二氢钾0.5～2g/l；发酵条件为：20～32℃，150～200rpm条件下培养7～10天。

16、其中，所述的粗提包括浓缩、除蛋白、醇沉提取多糖、透析、冷冻干燥的步骤。

17、具体的，所述的粗提包括将发酵液离心后，取上清液蒸发浓缩，利用sevage法脱去蛋白得到过滤液，再利用乙醇醇沉提取过滤液中的多糖，经透析、冷冻干燥得到银耳孢子胞外粗多糖的步骤。

18、具体的，所述的浓缩为浓缩至上清液体积的1/3～1/5；所述的乙醇，其加入量为过滤液体积的3～5倍。

19、其中，所述的离子交换树脂纯化包括将银耳孢子胞外粗多糖溶于水制得粗多糖溶液，上样至离子交换柱进行梯度洗脱，收集单一峰洗脱液进行透析、除盐后冷冻干燥得到银耳孢子胞外多糖的步骤。

20、具体的，所述的粗多糖溶液，其浓度为5～10g/l，溶剂为水；所述的梯度洗脱，以0～2mol/l nacl溶液进行梯度洗脱，梯度洗脱条件为：流速0.5～2ml/min，温度20～30℃。

21、进一步的，所述的nacl溶液浓度为：0、0.3mol/l、0.7mol/l和2mol/l。

22、上述银耳孢子胞外多糖在制备降血糖药物和/或降血脂药物中的应用也在本发明所保护的范围之内。

23、具体的，对高脂饮食和链脲菌素诱导的2型糖尿病小鼠模型进行不同剂量的银耳孢子胞外多糖治疗，通过测定相关指标探究了银耳孢子胞外多糖对糖尿病小鼠的体内降糖降脂活性。结果发现，银耳孢子胞外多糖能改善高脂饮食导致的肥胖；显著降低小鼠的空腹血糖水平，提高糖尿病小鼠的糖耐量，改善小鼠的胰岛素抵抗；降低tg、tc、ldl-c水平，提高hdl-c水平；降低alt、ast、akp肝酶水平。因此，银耳孢子胞外多糖具有优异的降糖降脂活性。

24、有益效果：

25、本发明利用银耳孢子发酵制备得到了一种分子量为1000～1500kda的多糖tfpb，该银耳孢子胞外多糖制备方式简单，条件易控制，成本低周期短，可实现大规模生产，有望替代传统高成本的子实体多糖，也可作为调节血糖、血脂潜在的选择进行单用或和西药联用，从而减少二甲双胍等西药在降血糖、血脂过程中产生的依赖性，降低其毒副作用。

26、本发明制备得到的银耳孢子胞外多糖具有优异的降糖、降脂活性，可用于开发天然无毒无副作用的预防或治疗高血糖血脂的功能食品或药物。