快速测定宠物食品和宠物补剂中二甲基砜含量的方法与流程

[]本发明属于分析化学，具体地说是一种快速测定宠物食品和宠物补剂中二甲基砜含量的方法。

背景技术：

0、[背景技术]

1、二甲基砜(dimethyl sulfone)，简称为msm，是一种天然存在于自然界中的含硫有机化合物，是自然界硫循环的一部分，作为一种内源性细胞代谢物和硫供体，广泛存在于动物和人体中，具有抗炎、抗氧化、抗癌、预防疾病、增强机体免疫力等作用。

2、近年来，宠物行业在国内外发展迅速，猫狗作为伴侣动物被越来越多人喜爱，很多人甚至将宠物视为家庭成员，对它们关心爱护。但宠物都逃不开寿命有限的困扰，宠物在8～10岁时身体机能就会开始衰退，抵抗力下降，骨骼关节出现问题。因为宠物不能通过语言与人类交流，宠物的健康问题不易被主人发现。各种疾病也会给宠物的生活带来很大的不适与痛苦，因此越来越多的宠物主人开始关注和购买功能性宠物食品和宠物补剂，希望给宠物带来更好的生活质量。在2018年农业农村部第21号公告中，二甲基砜被列入《国家饲料添加剂品种目录》成为一种猫狗专用添加剂，允许作为宠物营养补充剂添加到宠物食品中。目前研究发现二甲基砜可以滋养宠物皮肤和毛发，保护关节，提升免疫力，其作为新型饲料添加剂在宠物行业中将会有广泛的应用前景。

3、然而.有市场就会有利益纷争，有不法商家在宠物食品和宠物补剂中虚假添加二甲基砜，给宠物食品行业带来严重的负面影响。目前市面上还没有确定可行的宠物食品或宠物补剂中二甲基砜含量检测方法，这使得宠物食品中二甲基砜含量检测工作难以开展，市场监管也难以进行。二甲基砜相对分子质量较小，具有挥发性，在分析过程中容易受到样品中杂质的干扰。而宠物食品成分较复杂，其中干扰物多，分析难度本较大，常规检测方法显然不适用于宠物食品和宠物补剂中的msm。

4、因此，建立一个准确、稳定、快速且抗干扰能力强的宠物食品和宠物补剂中二甲基砜含量的检测方法迫在眉睫。

技术实现思路

0、[技术实现要素：]

1、本发明的目的就是要解决上述的不足而提供一种快速测定宠物食品和宠物补剂中二甲基砜含量的方法，经提取、快速净化后用气相色谱-质谱联用仪检测，同位素内标法定量，快速测定宠物食品和宠物补剂中二甲基砜含量，该测定方法准确、快速、高效，可快速有效的减少或消除样品基质干扰，以及可有效校正基质效应，消除实验误差，提高检测的准确度和精密度。

2、为实现上述目的设计一种快速测定宠物食品和宠物补剂中二甲基砜含量的方法，包括以下步骤：

3、1)样品预处理：将宠物食品或宠物补剂样品粉碎后混合均匀，装入洁净干燥的密封瓶中，密封备用；

4、2)样品的提取：称取适量样品，使用乙腈提取得到样品提取液，样品与乙腈按照固液比为1g:5ml的比例；

5、3)样品的净化：将步骤2)所得样品提取液经quechers净化得上机分析溶液；

6、4)采用气相色谱-质谱联用仪测定步骤3)所得上机分析溶液；

7、5)采用同位素内标法定量溶液中二甲基砜的浓度，计算得到样品中二甲基砜的含量。

8、进一步地，步骤1)中，将样品用粉碎机粉碎至均匀，粉碎后的颗粒大小不大于2mm，避光密封保存。

9、进一步地，步骤1)中，若样品经粉碎后颗粒大小仍不均匀，则将经粉碎后的样品过2mm筛后再混合均匀。

10、进一步地，步骤2)中，称样前再次混匀样品，准确称取1.0g样品，置于50ml具盖离心管中，加入100μl的500mg/l二甲基砜-d6同位素内标溶液，混匀，加入5ml乙腈，使用涡旋振荡器以1500rpm的转速振荡5min，然后使用超声波提取器在35℃下超声提取5min，将含有样品的离心管使用高速离心机以6000r/min离心10min后取上清液得到样品提取液。

11、进一步地，步骤3)中，将步骤2)中得到的样品提取液置于15ml具盖离心管中，加入quechers快速净化样品前处理所用混合盐，边摇晃离心管边加入混合盐以防止结块，使用涡旋振荡器以1500rpm的转速振荡5min，然后将含有样品提取液的离心管使用高速离心机以6000r/min离心10min，取上清液经0.22μm的聚四氟乙烯滤膜过滤后得上机分析溶液。

12、进一步地，步骤3)中，所述混合盐包括n-丙基乙二胺、石墨化炭黑、c18和硫酸镁，n-丙基乙二胺、石墨化炭黑、c18、硫酸镁的质量比为400mg：400mg：400mg：1200mg。

13、进一步地，步骤4)中，所述气相色谱-质谱联用仪的测定条件为：

14、1)气相色谱柱：db-ffap；30m×250μm×0.25μm；

15、2)进样口温度：250℃；

16、3)进样方式：不分流模式；

17、4)流速：1ml/min；

18、5)进样体积：1μl；

19、6)炉温升温程序见下表：

20、 升温速率(℃/min) 炉温(℃) 保持时间(min) <![cdata[¹⁰⁰]]> <![cdata[²]]> 15 240 5 postrun 245 5

21、7)离子源电离方式：电子轰击源；

22、8)电离能量：70ev；

23、9)离子源温度：230℃；

24、10)传输线温度：230℃；

25、11)四级杆温度：150℃；

26、12)采集模式：sim/scan；

27、13)目标物和同位素内标的特征离子见下表：

28、 名称 定量离子m/z 定性离子m/z 二甲基砜 79 94、63 d6-二甲基砜 82 100、66

29、。

30、进一步地，步骤5)中，根据步骤4)采集的数据，测得二甲基砜和同位素二甲基砜内标物的相应峰面积，以标准系列工作液中二甲基砜与内标的浓度比为横坐标，以二甲基砜峰面积与内标的峰面积比为纵坐标，绘制标准曲线，将试样溶液中二甲基砜峰面积和内标物的峰面积之比带入标准曲线得到样品溶液中二甲基砜的浓度。

31、进一步地，步骤5)中，根据样品溶液中二甲基砜的浓度，通过以下公式计算得到样品中二甲基砜的含量：

32、

33、公式中：

34、c为试样中二甲基砜的含量，单位为mg/kg；

35、a为由标准曲线得到的样品溶液中二甲基砜的浓度，单位为mg/l；

36、v为样品的最终定容体积，单位为ml；

37、m为试样的取样量，单位为g；

38、df为稀释倍数。

39、本发明同现有技术相比，具有如下优点：

40、(1)本发明提供了一种样品中的二甲基砜通过乙腈提取，使用quechers快速样品前处理净化后，用气相色谱-质谱联用仪进行测定，同位素内标法定量的检测方法，适用于猫粮、狗粮、宠物零食等多种类型的宠物食品和宠物营养补充剂；

41、(2)本发明检测方法快速、准确、抗干扰能力强，quechers方法可以快速有效的减少或消除样品基质干扰；

42、(3)本发明同位素内标法定量可以有效校正基质效应，消除实验误差，提高检测的准确度和精密度；

43、(4)本发明所述方法最低定量浓度较低为5mg/kg，能满足市场上多种检测需求，值得推广应用。