一种蛋白纳米复合物、含其的靶向递送系统及其应用

本发明属于生物，具体涉及一种蛋白纳米复合物、含有所述蛋白纳米复合物的靶向递送系统及其应用，还涉及一种制备所述蛋白纳米复合物的方法和制备所述的靶向递送系统的方法。

背景技术：

1、癌症转移是由生长中的肿瘤脱落的循环肿瘤细胞的血源性传播引起的。在转移中，血小板可以被肿瘤细胞招募和激活，并直接与循环肿瘤细胞相互作用，形成聚集体，从而促进肿瘤的转移。一旦建立转移，目前的治疗方法往往不能提供有效的肿瘤转移治疗结果。因此，消除循环肿瘤细胞可能会防止转移并改善癌症患者的生存。免疫疗法在癌症治疗和消除转移方面获得了巨大的关注，但由于免疫细胞对肿瘤的浸润不足和免疫抑制的肿瘤微环境，其疗效受到很大的阻碍。同时，很大一部分患者对免疫没有应答。

2、目前肿瘤转移治疗亟需不依赖于免疫疗法的新技术方案。

技术实现思路

1、为解决现有技术中使用免疫疗法抑制肿瘤转移的疗效欠佳的问题，本发明提供一种蛋白纳米复合物、含其的靶向递送系统及其应用，以及制备所述蛋白纳米复合物的方法和制备所述的靶向递送系统的方法。本发明的蛋白纳米复合物或靶向递送系统可实现靶向杀伤肿瘤细胞抑制其转移，而不需要激活免疫反应，具有较佳的安全性。

2、本发明技术方案的第一方面提供了一种蛋白纳米复合物，其由蛋白和多酚组装而成；所述蛋白包含颗粒酶和穿孔素，所述颗粒酶和穿孔素的质量比为4:1。

3、在一些优选的实施方案中，所述蛋白与多酚的质量比为1:(25-40)。优选地，所述蛋白与多酚的质量比为1:(30-35)，例如1:32.5。在一个具体的实施方案中，所述蛋白的浓度为0.2mg/ml，所述多酚的浓度为6.25mg/ml。

4、在一些优选的实施方案中，所述蛋白纳米复合物的粒径为80-90nm例如80-150nm。

5、在一个优选的实施方案中，所述蛋白纳米复合物的粒径为86.70±0.24nm。

6、在一些优选的实施方案中，所述颗粒酶为颗粒酶b；和/或，所述多酚为单宁酸。

7、本发明技术方案的第二方面提供了一种制备所述蛋白纳米复合物的方法，其包括以下步骤：

8、(1)将颗粒酶和穿孔素溶解于溶液中；和/或，在溶解的过程中进行搅拌或涡旋；

9、(2)将(1)所得的溶液与含单宁酸的溶液混合，所述多酚的浓度为0.5-16mg/ml；优选5-10mg/ml。

10、在一些优选的实施方案中，所述方法还包括将(2)所得的溶液搅拌或涡旋的步骤。

11、在一个具体的实施方案中，所述方法中步骤(2)的搅拌或涡旋的时间为3min。

12、本发明技术方案的第三方面提供了一种由如第二方面所述方法制备的蛋白纳米复合物。

13、本发明技术方案的第四方面提供了一种靶向递送系统，其包含所述的蛋白纳米复合物和血小板。

14、在一些优选的实施方案中，所述蛋白纳米复合物修饰在所述血小板的表面。

15、在一些优选的实施方案中，所述血小板为鼠源或人源；

16、本发明技术方案的第五方面提供了一种制备所述靶向递送系统的方法，其包括以下步骤：将所述蛋白纳米复合物与血小板孵育，以使蛋白吸附在所述血小板的表面；

17、优选地，血小板与蛋白纳米复合物的数量质量比为1-10×1010个/mg例如2.5×1010个/mg。

18、本发明技术方案的第六方面还提供了所述蛋白纳米复合物或所述靶向递送系统在制备抑制肿瘤转移药物中的应用。

19、在一些优选的实施方案中，所述肿瘤为黑色素瘤或乳腺癌。

20、在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。

21、本发明所用试剂和原料均市售可得。

22、本发明的积极进步效果在于：

23、本发明提供了一种蛋白纳米复合物及含其的靶向递送系统，采用本发明的靶向递送系统可有效靶向肿瘤细胞，并释放颗粒酶b和穿孔素，在体内和体外均可有效应用；施用所述靶向递送系统后，小鼠的肺部转移被显著抑制。本发明的靶向递送系统无需激活免疫反应，具有良好的血液相容性和生物相容性，安全性较佳。

技术特征：

1.一种蛋白纳米复合物，其特征在于，其由蛋白和多酚组装而成；所述蛋白包含颗粒酶和穿孔素，所述颗粒酶和穿孔素的质量比为4:1。

2.如权利要求1所述的蛋白纳米复合物，其特征在于所述蛋白纳米复合物的粒径为80-150nm；和/或，所述蛋白与多酚的质量比为1:(25-40)优选1:(30-35)，例如1:32.5；

3.如权利要求1所述的蛋白纳米复合物，其特征在于，所述颗粒酶为颗粒酶b；和/或，所述多酚为单宁酸。

4.一种制备如权利要求1-3所述的蛋白纳米复合物的方法，其特征在于，其包括以下步骤：

5.一种由如权利要求4所述的方法所制备的蛋白纳米复合物。

6.一种靶向递送系统，其特征在于，其包含如权利要求1-3或5所述的蛋白纳米复合物和血小板。

7.如权利要求6所述的靶向递送系统，其特征在于，所述蛋白纳米复合物修饰在所述血小板的表面；和/或，所述血小板为鼠源或人源。

8.一种制备如权利要求7所述的靶向递送系统的方法，其特征在于，其包括以下步骤：

9.如权利要求1-3或5所述的蛋白纳米复合物或如权利要求6或7所述的靶向递送系统在制备抑制肿瘤转移药物中的应用。

10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述肿瘤为黑色素瘤或乳腺癌。

技术总结本发明公开了一种蛋白纳米复合物、含其的靶向递送系统及其应用。所述蛋白纳米复合物其由蛋白和多酚组装而成；所述蛋白包含颗粒酶和穿孔素，所述颗粒酶和穿孔素的质量比为4:1。所述靶向递送系统包含所述的蛋白纳米复合物和血小板。本发明还公开了一种制备所述蛋白纳米复合物的方法和制备所述的靶向递送系统的方法。本发明提供的靶向递送系统可实现靶向杀伤肿瘤细胞从而显著抑制其转移，不需要激活免疫反应，具有较佳的安全性。技术研发人员：顾臻,俞计成,杨银贤受保护的技术使用者：浙江大学技术研发日：技术公布日：2024/9/12