使用菌体外膜组分的检测猪螺杆菌抗体的方法与流程

本发明涉及使用猪螺杆菌外膜组分的测定猪螺杆菌抗体的方法。

背景技术：

1、目前，已知由helicobacter pylori(寄生在人胃中的微好氧性革兰氏阴性螺杆菌，以下，称为“幽门螺杆菌”)导致的感染与慢性胃炎、胃溃疡、十二指肠溃疡、胃癌、胃粘膜相关淋巴组织(malt)淋巴瘤、弥漫性大细胞型b细胞淋巴瘤等相关。作为幽门螺杆菌的感染检查方法，主要采用分离培养法、尿素呼气试验(ubt)、血清、尿中的幽门螺杆菌抗体效价的测定(elisa和乳胶凝集法)、便中的幽门螺杆菌抗原测定(免疫层析法)、胃活组织检查检体的快速尿素酶试验(rut)。

2、但是，近年来，随着由幽门螺杆菌诊断、除菌的普及带来的幽门螺杆菌感染率降低，作为幽门螺杆菌以外的对人诱发严重胃病的螺杆菌，nhph(非幽门螺杆菌螺杆菌(non-helicobacter pylori hericobacters)；幽门螺杆菌以外的螺杆菌)逐渐成为问题。nhph包括helicobacter suis(以下为猪螺杆菌(h.suis))、毕氏螺杆菌(h.bizzozeronnii)、猫螺杆菌(h.felis)、h.salmonis、h.ailurogastricus、h.cynogasticus、h.baculiformis、鼬鼠螺杆菌(h.mustelae)、h.acinonychls、h.cetorum及海尔曼螺杆菌(h.heilmannii)，其中，从人胃中发现的大部分为猪螺杆菌。

3、幽门螺杆菌仅感染灵长类，只有在婴幼儿期可设想来自近亲属的感染，而猪螺杆菌则与年龄无关，自猪、猴等动物感染。

4、猪螺杆菌在约10万年前就已寄生于猴的胃中。之后，在1.5万年前变为也可感染猪。伴随猪的家畜化，感染爆发性扩散，变为也可感染人(非专利文献1)。对从世界各地分离的181株猪螺杆菌基因的mlst(多位点序列分型，multi locus sequencing typing)进行了分析，结果，基于感染宿主动物而形成了独立的簇，但从人分离的株未形成独立的簇，而是包含于猪的簇，因此将针对人的感染源判定为猪(非专利文献2)。因此，就猪和人而言，需要感染诊断和除菌剂。

5、作为猪螺杆菌的感染检查方法，报道了血清中猪螺杆菌抗体效价的测定(elisa和乳胶凝集法)(专利文献1、2)。

6、现有技术文献

7、专利文献

8、专利文献1：日本特开2016-10331号公报

9、专利文献2：国际公开wo2019/225639号

10、非专利文献

11、非专利文献1：flahou等，ismj.，jan；12(1)：77-86.doi:10.1038/ismej.2017.145

12、非专利文献2：e.rimbara等，proc natl acad sci usa 2021vol.118issue13e2026337118.doi:10.1073/pnas.2026337118.

13、非专利文献3：haesebrouck f.等，helicobacter，16(4)，339-340，2011doi:10.1111/j.1523-5378.2011.00849.x

14、非专利文献4：a.d.augustin等，front.med.，2019，6，188，doi:10.3389/fmed.2019.00188

15、(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/31555648)

技术实现思路

1、发明所要解决的课题

2、本发明的目的为提供使用猪螺杆菌外膜组分的测定猪螺杆菌抗体的方法及试剂。

3、用于解决课题的手段

4、专利文献1公开了将猪螺杆菌的f2r2蛋白固定于板，测定血清中的抗体。并且，专利文献2公开了将被认为抗体效价高于f2r2蛋白质的hsva蛋白固定于板，测定血清中的抗体。

5、然而，期求较之现有方法而言灵敏度和特异性更高的方法。

6、本次，本技术发明人新发现了通过使用猪螺杆菌外膜组分或猪螺杆菌外膜组分中所含的蛋白质能够提高感染者体内的抗猪螺杆菌抗体的测定灵敏度和特异性，从而发现了新的测定法。

7、更具体而言，本发明涉及以下的发明：

8、[1]试剂，用于检测来源于受试体的检体的与猪螺杆菌外膜组分或猪螺杆菌外膜组分中所含的蛋白质进行结合的抗体，其特征在于，至少含有猪螺杆菌外膜组分或猪螺杆菌外膜组分中所含的蛋白质、及抗ig抗体。

9、[2][1]的试剂，其特征在于，受试体为哺乳动物。

10、[3][1]或[2]的试剂，其特征在于，检体来源于血液。

11、[4][1]～[3]中任一项的试剂，其特征在于，还含有幽门螺杆菌的菌体成分或针对幽门螺杆菌菌体成分的抗体，所述试剂还能够对来源于受试体的检体的与幽门螺杆菌进行结合的抗体或幽门螺杆菌菌体成分的抗原进行检测。

12、[5][1]～[4]中任一项的试剂，所述试剂为elisa或免疫层析用试剂。

13、[6]方法，用于检测来源于受试体的检体的与抗猪螺杆菌外膜组分或与猪螺杆菌外膜组分中所含的蛋白质进行结合的抗体，其特征在于，包括以下步骤：

14、(a)使来源于受试体的检体与猪螺杆菌外膜组分或猪螺杆菌外膜组分中所含的蛋白质接触的步骤；及

15、(b)检测已与猪螺杆菌外膜组分或猪螺杆菌外膜组分中所含的蛋白质结合的、所述检体中的抗体的步骤。

16、[7][6]的方法，其特征在于，受试体为哺乳动物。

17、[8][6]或[7]的方法，其特征在于，检体来源于血液。

18、[9][6]～[8]中任一项的方法，所述方法还能够检测来源于受试体的检体的与幽门螺杆菌进行结合的抗体，其特征在于，还包括以下步骤：

19、(a)使来源于受试体的检体与幽门螺杆菌菌体成分接触的步骤；及

20、(b)检测已与幽门螺杆菌菌体成分结合的、所述检体中的抗体的步骤。

21、[10][6]～[8]中任一项的方法，所述方法还能够检测来源于受试体的检体的幽门螺杆菌菌体成分的抗原，其特征在于，还包括以下步骤：

22、(a)使来源于受试体的检体与针对幽门螺杆菌菌体成分的抗体接触的步骤；及

23、(b)检测已与针对幽门螺杆菌菌体成分的抗体结合的、所述检体中的幽门螺杆菌菌体成分的抗原的步骤。

24、[11]猪螺杆菌感染的检测方法，其将通过使用[1]～[5]中任一项的试剂的测定及/或通过[6]～[10]中任一项的方法检测到抗体的受试体判定为感染了猪螺杆菌。

25、本说明书包括作为本技术的优先权基础的日本专利申请号2022-009302号的公开内容。

26、发明效果

27、通过使用猪螺杆菌外膜组分或猪螺杆菌外膜组分中所含的蛋白质，能够以高灵敏度测定感染者体内的抗猪螺杆菌抗体。猪螺杆菌外膜组分或猪螺杆菌外膜组分中所含的蛋白质可用于测定来源于猪螺杆菌感染诊断对象体的血液中抗猪螺杆菌抗体的有无或抗体效价。