抗BTLA抗体及其在治疗癌症中的用途的制作方法

发明领域本发明涉及分离的抗b和t淋巴细胞衰减因子(btla)单克隆抗体或其抗原结合片段、编码所述抗体的核酸和表达载体、包含所述载体的重组细胞以及包含所述抗体的组合物。还提供了制备所述抗体的方法以及使用所述抗体治疗包括癌症和/或相关并发症的疾病的方法。对电子提交的序列表的引用本技术包含电子提交的序列表。电子序列表(065798.8wo2sequencelisting.xml；大小：148,818字节；且创建日期为2023年1月19日)的内容在此通过引用全文并入本文。

背景技术：

0、发明背景

1、b和t淋巴细胞衰减因子(btla)属于cd28免疫球蛋白超家族。其是一种共抑制免疫检查点分子，与pd-1和ctla-4具有结构和功能相似性。btla的表达仅限于免疫细胞(t细胞、b细胞、dc、nk细胞等)。当其配体hvem结合后，btla的胞内结构域通过两种磷酸酶shp1和shp2信号传导，以抑制t细胞和b细胞中的下游tcr和bcr信号传导。btla在t细胞分化过程中与其他抑制检查点相比具有不同的表达谱，这表明同时或顺序阻断多个抑制分子可改善基于t细胞的疗法。因此，btla是治疗和潜在治愈btla阳性癌症的癌症免疫疗法的理想靶点。

技术实现思路

1、在一个总体方面中，本发明涉及特异性结合b和t淋巴细胞衰减因子(btla)的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段。

2、提供了分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含具有以下多肽序列的重链互补决定区1(hcdr1)、hcdr2、hcdr3、轻链互补决定区1(lcdr1)、lcdr2和lcdr3：

3、(1)分别为seq id no:7、8、153、10、11和12；或

4、(2)分别为seq id no:1、2、3、4、5和6；

5、其中所述抗体或其抗原结合片段特异性结合b和t淋巴细胞衰减因子(btla)，优选人btla，任选地，所述单克隆抗体或其抗原结合片段不是天然存在的。seq id no:153由氨基酸序列caredgypyytldx1w表示，其中x1是选自c、a、s、t或v的氨基酸。

6、在某些实施方式中，所述分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有以下多肽序列的hcdr1、hcdr2、hcdr3、lcdr1、lcdr2和lcdr3：

7、(1)分别为seq id no:7、8、9、10、11和12；或

8、(2)分别为seq id no:1、2、3、4、5和6；

9、其中所述抗体或其抗原结合片段特异性结合b和t淋巴细胞衰减因子(btla)，优选人btla，任选地，所述单克隆抗体或其抗原结合片段不是天然存在的。

10、在某些实施方式中，所述分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有与seq idno:15或13至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的多肽序列的重链可变区，或具有与seq id no:16或14至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的多肽序列的轻链可变区。

11、在某些实施方式中，所述分离的抗btla单克隆抗体或其抗原结合片段包含：

12、(1)具有seq id no:15的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:16的多肽序列的轻链可变区；或

13、(2)具有seq id no:13的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:14的多肽序列的轻链可变区。

14、在某些实施方式中，所述分离的单克隆抗体或其抗原结合片段是嵌合的或者人的或人源化的。

15、在某些实施方式中，所述人源化单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有以下多肽序列的重链互补决定区1(hcdr1)、hcdr2、hcdr3、轻链互补决定区1(lcdr1)、lcdr2和lcdr3：

16、(1)分别为seq id no:7、8、150、10、11和12；

17、(2)分别为seq id no:1、2、3、4、5和6；

18、(3)分别为seq id no:7、8、9、10、11和12；

19、(4)分别为seq id no:7、8、149、10、11和12；

20、(5)分别为seq id no:7、8、151、10、11和12；或

21、(6)分别为seq id no:7、8、152、10、11和12。

22、在某些实施方式中，所述分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有与seq idno:141、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、143、145或147至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的多肽序列的重链可变区，或者具有与seq id no:142、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106,108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、144、146或148至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的多肽序列的轻链可变区。

23、在某些实施方式中，所述分离的人源化抗btla单克隆抗体或其抗原结合片段包含：

24、(1)具有seq id no:141的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:142的多肽序列的轻链可变区；

25、(2)具有seq id no:17的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:18的多肽序列的轻链可变区；

26、(3)具有seq id no:19的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:20的多肽序列的轻链可变区；

27、(4)具有seq id no:21的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:22的多肽序列的轻链可变区；

28、(5)具有seq id no:23的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:24的多肽序列的轻链可变区；

29、(6)具有seq id no:25的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:26的多肽序列的轻链可变区；

30、(7)具有seq id no:27的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:28的多肽序列的轻链可变区；

31、(8)具有seq id no:29的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:30的多肽序列的轻链可变区；

32、(9)具有seq id no:31的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:32的多肽序列的轻链可变区；

33、(10)具有seq id no:33的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:34的多肽序列的轻链可变区；

34、(11)具有seq id no:35的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:36的多肽序列的轻链可变区；

35、(12)具有seq id no:37的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:38的多肽序列的轻链可变区；

36、(13)具有seq id no:39的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:40的多肽序列的轻链可变区；

37、(14)具有seq id no:41的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:42的多肽序列的轻链可变区；

38、(15)具有seq id no:43的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:44的多肽序列的轻链可变区；

39、(16)具有seq id no:45的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:46的多肽序列的轻链可变区；

40、(17)具有seq id no:47的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:48的多肽序列的轻链可变区；

41、(18)具有seq id no:49的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:50的多肽序列的轻链可变区；

42、(19)具有seq id no:51的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:52的多肽序列的轻链可变区；

43、(20)具有seq id no:53的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:54的多肽序列的轻链可变区；

44、(21)具有seq id no:55的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:56的多肽序列的轻链可变区；

45、(22)具有seq id no:57的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:58的多肽序列的轻链可变区；

46、(23)具有seq id no:59的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:60的多肽序列的轻链可变区；

47、(24)具有seq id no:61的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:62的多肽序列的轻链可变区；

48、(25)具有seq id no:63的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:64的多肽序列的轻链可变区；

49、(26)具有seq id no:65的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:66的多肽序列的轻链可变区；

50、(27)具有seq id no:67的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:68的多肽序列的轻链可变区；

51、(28)具有seq id no:69的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:70的多肽序列的轻链可变区；

52、(29)具有seq id no:71的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:72的多肽序列的轻链可变区；

53、(30)具有seq id no:73的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:74的多肽序列的轻链可变区；

54、(31)具有seq id no:75的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:76的多肽序列的轻链可变区；

55、(32)具有seq id no:77的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:78的多肽序列的轻链可变区；

56、(33)具有seq id no:79的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:80的多肽序列的轻链可变区；

57、(34)具有seq id no:81的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:82的多肽序列的轻链可变区；

58、(35)具有seq id no:83的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:84的多肽序列的轻链可变区；

59、(36)具有seq id no:85的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:86的多肽序列的轻链可变区；

60、(37)具有seq id no:87的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:88的多肽序列的轻链可变区；

61、(38)具有seq id no:89的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:90的多肽序列的轻链可变区；

62、(39)具有seq id no:91的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:92的多肽序列的轻链可变区；

63、(40)具有seq id no:93的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:94的多肽序列的轻链可变区；

64、(41)具有seq id no:95的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:96的多肽序列的轻链可变区；

65、(42)具有seq id no:97的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:98的多肽序列的轻链可变区；

66、(43)具有seq id no:99的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:100的多肽序列的轻链可变区；

67、(44)具有seq id no:101的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:102的多肽序列的轻链可变区；

68、(45)具有seq id no:103的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:104的多肽序列的轻链可变区；

69、(46)具有seq id no:105的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:106的多肽序列的轻链可变区；

70、(47)具有seq id no:107的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:108的多肽序列的轻链可变区；

71、(48)具有seq id no:109的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:110的多肽序列的轻链可变区；

72、(49)具有seq id no:111的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:112的多肽序列的轻链可变区；

73、(50)具有seq id no:113的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:114的多肽序列的轻链可变区；

74、(51)具有seq id no:115的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:116的多肽序列的轻链可变区；

75、(52)具有seq id no:117的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:118的多肽序列的轻链可变区；

76、(53)具有seq id no:119的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:120的多肽序列的轻链可变区；

77、(54)具有seq id no:121的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:122的多肽序列的轻链可变区；

78、(55)具有seq id no:123的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:124的多肽序列的轻链可变区；

79、(56)具有seq id no:125的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:126的多肽序列的轻链可变区；

80、(57)具有seq id no:127的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:128的多肽序列的轻链可变区；

81、(58)具有seq id no:129的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:130的多肽序列的轻链可变区；

82、(59)具有seq id no:131的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:132的多肽序列的轻链可变区；

83、(60)具有seq id no:133的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:134的多肽序列的轻链可变区；

84、(61)具有seq id no:135的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:136的多肽序列的轻链可变区；

85、(62)具有seq id no:137的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:138的多肽序列的轻链可变区；

86、(63)具有seq id no:139的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:140的多肽序列的轻链可变区；

87、(64)具有seq id no:143的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:144的多肽序列的轻链可变区；

88、(65)具有seq id no:145的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:146的多肽序列的轻链可变区；或

89、(66)具有seq id no:147的多肽序列的重链可变区，和具有seq id no:148的多肽序列的轻链可变区。

90、在某些实施方式中，所述分离的单克隆抗体或其抗原结合片段特异性结合食蟹猕猴btla。

91、在某些实施方式中，所述分离的单克隆抗体或其抗原结合片段以小于约25nm、20nm、15nm、5nm、2nm、1nm或0.5nm的kd与人btla结合。

92、在某些实施方式中，所述分离的单克隆抗体或其抗原结合片段是人btla的激动剂并且在与btla结合后激活来自btla的下游信号传导。

93、在某些实施方式中，所述单克隆抗体或其抗原结合片段能够抑制b细胞增殖和/或t细胞和/或浆细胞激活。t细胞可以例如选自cd4 t细胞、cd8 t细胞、th1 t细胞、tfh t细胞、αβt细胞和γδt细胞。

94、在某些实施方式中，所述单克隆抗体或其抗原结合片段能够阻断或消除btla与疱疹病毒进入介质(hvem)的结合。

95、在某些实施方式中，所述分离的单克隆抗体或其抗原结合片段与btla结合并且能够增加促炎细胞因子例如干扰素γ(ifnγ)、白细胞介素-2(il-2)、c-x-c基序趋化因子配体9(cxcl9)、c-x-c基序趋化因子配体10(cxcl10)、白细胞介素1β(il1β)和肿瘤坏死因子α(tnfα)产生；介导偶联药物的活性；和/或与具有杀癌作用的另一单克隆抗体或其抗原结合片段形成双特异性抗体。

96、还提供了包含根据本发明所述的单克隆抗体或其抗原结合片段的分离的双特异性抗体或其抗原结合片段。

97、还提供了编码根据本发明所述的单克隆抗体或其抗原结合片段或者双特异性抗体或其抗原结合片段的分离的核酸。

98、还提供了载体，其包含编码根据本发明所述的单克隆抗体或其抗原结合片段或者双特异性抗体或其抗原结合片段的分离的核酸。

99、还提供了包含载体的宿主细胞，所述载体包含编码根据本发明所述的单克隆抗体或其抗原结合片段或者双特异性抗体或其抗原结合片段的分离的核酸。

100、在某些实施方式中，提供了一种药物组合物，其包含根据本发明所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段或者分离的双特异性抗体或其抗原结合片段以及药学上可接受的载体。

101、还提供了特异性靶向有此需要的受试者中的癌细胞表面上的b和t淋巴细胞衰减因子(btla)的方法，其包括向所述受试者施用根据本发明所述的药物组合物。

102、还提供了在有此需要的受试者中治疗癌症的方法，其包括向所述受试者施用根据本发明所述的药物组合物。在某些实施方式中，所述癌症是实体瘤，优选具有浸润性t细胞的实体瘤，更优选具有浸润性t效应细胞的实体瘤，更优选具有表达btla的t效应细胞的实体瘤，最优选具有表达在肿瘤微环境中高度表达的btla和btla配体hvem的浸润性t效应细胞的实体瘤。所述癌症可以例如是btla阳性癌症。所述癌症的实例可以例如选自但不限于黑色素瘤、肺癌、肾细胞癌和肝癌。

103、在某些实施方式中，所述药物组合物还包含第二治疗性抗癌剂。所述第二治疗性抗癌剂可以例如是抗pd1抗体或其抗原结合片段。

104、还提供了产生根据本发明所述的单克隆抗体或其抗原结合片段或者双特异性抗体或其抗原结合片段的方法。所述方法包括在产生所述单克隆抗体或其抗原结合片段或者双特异性抗体或其抗原结合片段的条件下培养包含编码所述单克隆抗体或其抗原结合片段或者双特异性抗体或其抗原结合片段的核酸的细胞，并从所述细胞或培养物中回收所述单克隆抗体或其抗原结合片段或者双特异性抗体或其抗原结合片段。

105、还提供了产生包含根据本发明所述的单克隆抗体或其抗原结合片段或者双特异性抗体或其抗原结合片段的药物组合物的方法。所述方法包括将所述单克隆抗体或其抗原结合片段或者双特异性抗体或其抗原结合片段与药学上可接受的载体组合以获得所述药物组合物。

106、还提供了确定受试者中btla水平的方法。所述方法包括(a)从所述受试者获取样品；(b)将所述样品与根据本发明所述的抗btla单克隆抗体或其抗原结合片段接触；和(c)确定所述受试者中btla水平。在某些实施方式中，所述样品是组织样品。所述组织样品可以例如是癌症组织样品。在某些实施方式中，所述样品是血液样品。在某些实施方式中，所述样品包含t细胞(例如cd4、cd8、th1、tfh、αβ、γδ)、b细胞、树突状细胞(dc)和自然杀伤(nk)细胞。