用抗TREM2抗体治疗纤维化的制作方法

背景技术：

1、据估计，美国有600,000人罹患肝硬化，且这些患者中有14,000名处于疾病晚期并等待肝移植。研究已表明高达40-60％的肝硬化患者伴随肌肉萎缩。由此导致的虚弱是终末期肝病(esld)患者功能下降、肝硬化相关并发症、住院和死亡的重要原因。肝移植是esld的确定性治疗，但与肝病严重程度无关的身体衰退却与从移植等待名单中除名的风险增加有关。据估计，40-50％的肝硬化患者展现肝硬化性少肌症。肝硬化性少肌症是肝硬化的常见并发症，对患者的存活率和生活质量造成不利影响。肝硬化性少肌症是由于肝硬化中的尿素循环功能失调导致的高氨血症引起的一种系统性疾病，其中肌肉解除氨毒，但以肌肉质量为代价。少肌症降低肝硬化患者的存活率，减少接受移植的机会，并增加肝硬化相关并发症的风险。肝硬化患者(例如esld或肝硬化性少肌症患者)的当前护理标准包括生活方式改变，例如增加锻炼和饮食干预。目前尚无获批的药物干预。

2、非酒精性脂肪性肝病(nafld)的全球发病率为25％且是肝硬化和肝细胞癌(hcc)的主要原因。nafld涵盖从有或无轻度炎症的脂肪变性(非酒精性脂肪肝)到以坏死性炎症和快速纤维化进展为特征的非酒精性脂肪性肝炎(nash)的疾病连续谱。nafld与代谢综合征的组分双向关联，而2型糖尿病增加肝硬化和相关并发症的风险。nash中的慢性肝损伤显著增加终末期肝病(例如肝硬化和肝癌)的风险。晚期肝纤维化是肝脏相关结果和总体死亡率的风险因素，且可用非侵入性检验的组合进行评价。nash患者罹患肝细胞癌(hcc)的风险增加。

3、生活方式改变和体重减轻是目前预防和治疗nafld的唯一选择。尚无获批的nafld药物疗法，但若干药物已处于开发晚期。因此，需要额外治疗剂来治疗肝纤维化和nafld。

4、在正常组织中，许多骨髓细胞(例如巨噬细胞)可用于适当地发挥先天性和适应性免疫功能，特别是用于创伤修复。最近鉴定了新的疤痕相关trem2+cd9+巨噬细胞亚群，已证明所述亚群在肝纤维化中扩增，从循环单核细胞分化并且是促纤维化的。ramachandran等人，nature.2019年11月；575(7783):512-518。

5、相关专利和专利申请包括：2015年9月28日提交的pct/us2015/052682；2016年9月28日提交的pct/us2016/054104；和uspn 10,836,828，各专利出于所有目的以引用的方式整体并入本文。

6、本文所引用的所有专利、专利申请、出版物、文献和论文均以引用的方式整体并入本文。

技术实现思路

1、本文描述治疗受试者的纤维化疾病的方法，所述方法包括向受试者施用结合到人trem2(seq id no:15)并任选地与37017抗体(seq id no:31和32)竞争结合到小鼠trem2(seq id no:17)的经分离抗体。

2、在一些实施方案中，抗体包含含有seq id no:9所示的序列的cdr-h1，含有seq idno:10所示的序列的cdr-h2，含有seq id no:11所示的序列的cdr-h3，含有seq id no:12所示的序列的cdr-l1，含有seq id no:13所示的序列的cdr-l2，以及含有seq id no:14所示的序列的cdr-l3。

3、在一些实施方案中，抗体是无岩藻糖基化的且包含seq id no:1所示的vh序列；seq id no:2所示的vl序列；以及活性人igg1 fc区。

4、在一些实施方案中，抗体包含seq id no:1所示的vh序列；seq id no:2所示的vl序列；以及任选地具有igg1或igg4同型且任选地包含n297q突变的人fc沉默区。

5、在一些实施方案中，抗体包含seq id no:7所示的序列的所有3个重链cdr和seqid no:8所示的序列的所有3个轻链cdr。

6、在一些实施方案中，抗体包含seq id no:7所示序列第97位的a到t取代和seq idno:7所示序列第98位的k到r取代。

7、在一些实施方案中，抗体包含seq id no:1、3或5所示的vh序列。

8、在一些实施方案中，抗体包含seq id no:1、3或5所示的vh序列和seq id no:2、4或6所示的vl序列。

9、在一些实施方案中，抗体包含seq id no:1所示的vh序列。

10、在一些实施方案中，抗体包含seq id no:1所示的vh序列和seq id no:2所示的vl序列。

11、在一些实施方案中，抗体是37012抗体。

12、在一些实施方案中，抗体包含seq id no:25所示的重链序列和seq id no:26所示的轻链序列。

13、在另一方面中，本文描述结合到人trem2(seq id no:15)的经分离抗体，其中所述抗体与37017抗体(seq id no:31和32)竞争结合到小鼠trem2(seq id no:17)；且包含活性人fc区。

14、在一些实施方案中，抗体是人、人源化或嵌合的。

15、在一些实施方案中，抗体是人源化的。

16、在一些实施方案中，抗体结合到人trem2，kd小于或等于约1×10-9、2×10-9、3×10-9、4×10-9或5×10-9，如通过表面等离子体共振(spr)测定所测量。

17、在一些实施方案中，抗体能够特异性杀死、耗尽或失能trem2+骨髓细胞；任选地非刺激性骨髓细胞。

18、在一些实施方案中，抗体具有抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(adcc)活性。在一些实施方案中，抗体具有抗体介导的细胞吞噬作用(adcp)活性。在一些实施方案中，抗体具有补体依赖性细胞毒性(cdc)活性。

19、在一些实施方案中，抗体通过抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(adcc)、抗体介导的细胞吞噬作用(adcp)活性或补体依赖性细胞毒性(cdc)杀死、失能或耗尽骨髓细胞。

20、在一些实施方案中，抗体是以下中的至少一种：单克隆抗体、中性抗体、拮抗性抗体、激动性抗体、多克隆抗体、igg1抗体、igg3抗体、无岩藻糖基化抗体、双特异性抗体、人抗体、人源化抗体、嵌合抗体、全长抗体和其抗原结合片段。

21、在一些实施方案中，抗体是单克隆抗体。

22、在一些实施方案中，抗体是多特异性的。

23、在一些实施方案中，抗体是无岩藻糖基化的。

24、在一些实施方案中，抗体是其抗原结合片段、fab、fab’、f(ab’)2、fv、scfv、(scfv)2、单链抗体分子、双可变结构域抗体、单可变结构域抗体、线性抗体或v结构域抗体。

25、在一些实施方案中，抗体包含支架，任选地其中所述支架是fc，任选地是人fc。

26、在一些实施方案中，抗体包含选自igg、iga、igd、ige和igm的类别的重链恒定区。

27、在一些实施方案中，抗体包含类别igg和选自igg1、igg2、igg3和igg4的子类的重链恒定区。

28、在一些实施方案中，抗体包含igg1的重链恒定区。

29、在一些实施方案中，fc包含一个或多个修饰，其中与不含一个或多个修饰的fc相比，所述一个或多个修饰导致半衰期增加、adcc活性增加、adcp活性增加或cdc活性增加。

30、在一些实施方案中，fc结合选自由以下组成的组的fcγ受体：fcγri、fcγriia、fcγriib、fcγriic、fcγriiia和fcγriiib。

31、在另一方面中，本文描述用于治疗纤维化疾病的经分离抗体。

32、在另一方面中，本文描述与本文所描述的抗体竞争结合到人trem2的经分离抗体。

33、在另一方面中，本文描述结合本文所描述的抗体所结合的人trem2表位的经分离抗体。

34、在另一方面中，本文描述一种经分离多核苷酸或一组多核苷酸，所述多核苷酸编码本文所描述的抗体、其vh、其vl、其轻链、其重链或其抗原结合部分；任选地是cdna。

35、在另一方面中，本文描述一种载体或一组载体，所述载体包含如本文所描述的一种多核苷酸或一组多核苷酸。

36、在另一方面中，本文描述宿主细胞，所述宿主细胞包含如本文所描述的一种多核苷酸或一组多核苷酸或者本文所描述的一种载体或一组载体。

37、在另一方面中，本文描述产生抗体的方法，所述方法包括用本文所描述的宿主细胞表达抗体和分离所表达的抗体。

38、在另一方面中，本文描述药物组合物，所述药物组合物包含本文所描述的抗体和药学上可接受的赋形剂。

39、在另一方面中，本文描述治疗或预防有需要的受试者的纤维化疾病或疾患的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的例如如本文所描述的结合trem2的抗体或药物组合物。

40、在一些实施方案中，疾病或疾患是肝病。在一些实施方案中，杀死、失能或耗尽非刺激性骨髓细胞治疗肝病。在一些实施方案中，肝病是纤维化、非酒精性脂肪性肝病(nafld)或非酒精性脂肪性肝炎(nash)。在一些实施方案中，疾病不是癌症。

41、在一些实施方案中，抗体通过抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(adcc)、抗体介导的细胞吞噬作用(adcp)活性或补体依赖性细胞毒性(cdc)杀死、失能或耗尽骨髓细胞。在一些实施方案中，抗体具有受体-配体阻断、激动或拮抗活性。

42、在一些实施方案中，受试者是人。

43、在一些实施方案中，接触增强受试者的免疫反应。在一些实施方案中，增强的免疫反应是适应性免疫反应。在一些实施方案中，增强的免疫反应是先天性免疫反应。

44、在一些实施方案中，抗体通过adcc、cdc和adcp中的至少一种杀死骨髓细胞。在一些实施方案中，抗体通过adcc、cdc和adcp中的至少一种失能骨髓细胞。在一些实施方案中，抗体通过adcc、cdc和adcp中的至少一种耗尽骨髓细胞。在一些实施方案中，抗体具有抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(adcc)活性。在一些实施方案中，抗体具有补体依赖性细胞毒性(cdc)活性。在一些实施方案中，抗体具有抗体介导的吞噬作用(adcp)活性。在一些实施方案中，抗体具有受体-配体阻断、激动或拮抗活性。

45、在一些实施方案中，骨髓细胞是刺激性骨髓细胞。在一些实施方案中，骨髓细胞是非刺激性骨髓细胞。在一些实施方案中，骨髓细胞包括树突状细胞、肿瘤相关巨噬细胞(tam)、嗜中性粒细胞或单核细胞中的至少一种。在一些实施方案中，骨髓细胞是嗜中性粒细胞。在一些实施方案中，骨髓细胞是肿瘤相关巨噬细胞。在一些实施方案中，骨髓细胞处于包含刺激性骨髓细胞和非刺激性骨髓细胞的免疫细胞群体中。在一些方面中，骨髓细胞是trem2+骨髓细胞。在一些方面中，trem2+骨髓细胞包括trem2+巨噬细胞、trem2+cd9+巨噬细胞、巨噬细胞、疤痕相关巨噬细胞(sam)、树突状细胞、肿瘤相关巨噬细胞(tam)、嗜中性粒细胞或单核细胞中的至少一种。

46、在一些实施方案中，接触增强受试者的免疫反应。在一些实施方案中，增强的免疫反应是适应性免疫反应。在一些实施方案中，增强的免疫反应是先天性免疫反应。

47、在一些实施方案中，受试者先前已接受、正同时接受或随后将接受免疫疗法。

48、在另一方面中，本文描述杀死、失能或耗尽患有纤维化疾病的受试者的trem2+骨髓细胞的方法，所述方法包括使骨髓细胞与例如如本文所描述的抗trem2抗体或本文所描述的药物组合物接触。

49、在一些实施方案中，杀死、失能或耗尽非刺激性骨髓细胞通过增强对纤维化疾病的免疫反应来治疗纤维化。

50、在另一方面中，本文描述检测患有或疑似患有疾病或疾患的受试者中的trem2的方法，所述方法包括：(a)接收来自受试者的样品；和(b)通过使样品与本文所描述的抗体接触来检测样品中trem2的存在或水平。

51、在一些实施方案中，疾病或疾患是肝病。

52、在另一方面中，本文描述试剂盒，所述试剂盒包含本文所公开的抗体或药物组合物和使用说明书。