GSDMD在胸痛相关疾病诊断及疗效评估上的用途的制作方法

本技术涉及gsdmd在胸痛相关疾病诊断及疗效评估上的用途，属于分子生物学。

背景技术：

1、在胸痛相关疾病中，急性心肌梗死(ami)是最严重的心血管疾病，死亡率高，需要及时救治。目前主要依靠“症状+心电图+高敏肌钙蛋白(hs-ctn)”来综合诊断。然而，通常ami发病后12-18小时后，ctni浓度才能达到最高，并且将持续5-10日维持较高的浓度。因此，依赖高敏肌钙蛋白水平的诊断存在延迟，如果病人再次发生心梗时，高敏肌钙蛋白水平因持续5-10日维持较高的浓度而变化不明显，因而不能很好地诊断再发心梗。

2、除心脏及心血管疾病外的众多胸痛相关疾病中，肺动脉栓塞(pulmonaryembolism,pe)作为仅次于恶性肿瘤及心肌梗死的人类第三大死亡原因，其相关报道日益增加。然而，肺动脉栓塞的临床表现缺乏特异性，其漏诊率及误诊率较高。另外，肺癌的发病率和死亡率居高不下，尤其是在中老年人群中更为普遍。如能及早发现肺癌，则能大幅提高治愈率。

3、基于以上情况，临床上迫切需要一种疾病早期即可迅速反应、半衰期短、特异性及灵敏度更高、以及更具成本效益的生物标志物，以作为胸痛相关疾病的早期鉴别诊断及疗效评估工具。

技术实现思路

1、鉴于上述技术问题，本技术提供一种杂交瘤细胞株，保藏编号为cgmcc no.45331。

2、本技术还提供一种特异性结合gsdmd-ct的单克隆抗体或其抗原结合片段，其含有重链可变区的抗原互补决定区cdr1、cdr2和cdr3，以及轻链可变区的抗原互补决定区cdr1、cdr2和cdr3；其中，重链可变区的抗原互补决定区cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列分别为seq id no.1:gytftdyn、seq id no.2:vrpyngra、seq id no.3:arfyrfdgwcfdv；轻链可变区的抗原互补决定区cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列分别为seq id no.4:qditnf、hts、seqid no.5:qqynnlplt；或者其中，所述重链可变区的序列为seq id no.11，所述轻链可变区的序列为seq id no.12。

3、本技术还提供一种杂交瘤细胞株，保藏编号为cgmcc no.45332。

4、本技术还提供一种特异性结合gsdmd-ct的单克隆抗体或其抗原结合片段，其含有重链可变区的抗原互补决定区cdr1、cdr2和cdr3，以及轻链可变区的抗原互补决定区cdr1、cdr2和cdr3；其中，重链可变区的抗原互补决定区cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列分别为seq id no.6:gfslstsgm、seq id no.7:iywdddk、seq id no.8:artystiitdy；轻链可变区的抗原互补决定区cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列分别为seq id no.9:qnvghf、las、seqid no.10:qqysrspyt；或者其中，所述重链可变区的序列为seq id no.13，所述轻链可变区的序列为seq id no.14。

5、在一些实施方式中，抗原结合片段包括fab片段、fab’、f(ab’)2片段；fv片段、单链scfv、单链scfv fc片段或单链抗体scab。

6、本技术还提供一种产生前述的单克隆抗体或其抗原结合片段的细胞系。本技术还提供一种核酸分子，其编码前述的单克隆抗体或其抗原结合片段。本技术还提供一种表达盒、重组载体、或重组微生物，其包含前述的核酸分子。

7、本技术还提供一种试剂盒，或一种组合物，或一种系统，或一种装置，包含前述的细胞株、或前述的单克隆抗体或其抗原结合片段、或前述的细胞系、或前述的核酸分子、或前述的表达盒、重组载体、或重组微生物。

8、本技术还提供一种物质或系统的用途，所述物质或系统包括：前述的细胞株、或前述的单克隆抗体或其抗原结合片段、或前述的细胞系、或前述的核酸分子、或前述的表达盒、重组载体、或重组微生物和/或前述的试剂盒、组合物、系统、或装置；所述用途为如下之一：(a)用于制备测定细胞焦亡程度的制剂中的用途；(b)用于制备诊断患者炎症的制剂中的用途；(c)用于制备评估患者炎症性疾病的炎症程度或炎症性疾病的预后状况制剂中的用途；(d)用于制备监测患者炎症性疾病的进展的制剂中的用途；(e)用于制备诊断患者胸痛疾病或监测患者胸痛疾病的进展的制剂中的用途；(f)用于制备判断患者胸痛疾病的严重程度(如心梗面积、损伤大小等)的制剂中的用途；(g)用于制备预判患者胸痛疾病的预后情况的制剂中的用途；(h)用于筛选药物的用途，所述药物用于治疗胸痛相关疾病。

9、在一些实施方式中，制剂的使用方法包括如下步骤：(i)检测患者样品中的一种或多种蛋白或核酸，并对其水平进行定量，(ii)将定量的水平与正常阈值或对照群体中相应蛋白或核酸的水平进行比较；所述蛋白包括gsdmd的标志物或所述核酸包括编码gsdmd的核酸。，可选的，进一步包括(iii)判断患者患有胸痛相关疾病的风险或程度。

10、在一些实施方式中，制剂的使用方法包括从患者样品中测定gsdmd或其片段的水平；以及通过所述gsdmd或其片段的水平对胸痛疾病进行早期诊断、严重程度评估、复发诊断、疗效监测、以及预后评估。

11、在一些实施方式中，制剂的使用方法进一步包括联合其他诊断或评估手段，例如一种或多种其他标志物的水平或一种或多种其他诊疗结果。在一些实施方式中，一种或多种其他标志物包括d-二聚体、crp、pct、saa、il-6、pro-grp、cea、scc、nse、cyfra21-1、肌钙蛋白、高敏肌钙蛋白、nt pro-bnp或bnp、髓过氧化物酶、新蝶呤、gdf-15、st2、ck-mb、肌红蛋白、乳酸脱氢酶、半胱氨酸蛋白酶抑制剂c，c反应蛋白、以及肽的各种成熟肽、前体和激素原形式，所述肽为尿钠肽、肾上腺髓质素、内皮素或血管加压素。在一些实施方式中，一种或多种其他诊疗结果包括心电图、胸部ct、或造影。

12、在一些实施方式中，“比较”包括将所述gsdmd或其片段的水平与阈值水平进行比较、将gsdmd或其片段的水平与心肌缺血再灌注前后值进行比较、将gsdmd或其片段的水平与用药或者手术治疗前后值进行比较、将gsdmd或其片段的水平与患者影像学的血管狭窄或者堵塞面积(心脏受损面积)的比较、或者将gsdmd或其片段的水平与患者的临床情况相比较。在一些实施方式中，阈值指99％正常人百分数，例如为15-20ng/l。

13、在一些实施方式中，炎症性疾病包括由细胞焦亡引起的、或与细胞焦亡相关的细胞炎症坏死的病症；或者所述的炎症性疾病包括感染引起的炎性疾病；优选的，所述感染引起的炎性疾病包括细菌感染引起的炎症或病毒感染引起的炎症或者所述感染引起的炎性疾病包括肺炎、腹膜炎、胆管炎、泌尿系统感染、蜂窝织炎、脑膜炎、脓肿、创伤、多发伤、灼伤、败血症、脓毒血症和脓毒性休克。

14、在一些实施方式中，胸痛疾病为心脏疾病或肺部疾病；优选的，所述心脏疾病为心衰或心梗(如急性冠脉综合征)；或者所述肺部疾病为肺部感染、肺栓塞、肺部结节或肺部肿瘤。

15、在一些实施方式中，患者为人或者动物；或者所述样品为血清、血浆、尿液、血液、脑脊液，细胞培养液、或细胞裂解液。

16、本技术提供了可特异性识别标志物——gsdmd全蛋白或其片段的配偶体。在一种实施方式中，配偶体包括核酸适配体(aptamer)、肽适配体、肽体(peptibody)、拟似物(mimetic)、噬菌体、抑制剂、化合物、和/或抗体。在一种实施方式中，抗体为包括纳米抗体、单一特异性抗体、和/或多克隆抗体。在一种实施方式中，配偶体带有能被识别的标记；优选的，所述标记可以是染料、表位标签、荧光部分、发光部分、化学发光部分、酶标记、磁标记、顺磁标记、对比剂、纳米颗粒、放射性同位素、生物素、链霉亲和素和猝灭剂。

17、本技术还提供了一种试剂盒或组合物，其包含前述的标志物、前述生物材料、和/或前述的配偶体。在一种实施方式中，试剂盒或组合物还包括与其他标志物结合的配偶体、和/或用于定性或定量检测分析的试剂。在一种实施方式中，定性或定量免疫检测、化学检测、和/或计数检测中的一种或多种。在一种实施方式中，试剂盒或组合物进一步包含用作标准和用于校准的制剂或药物。在一种实施方式中，用作标准和用于校准的制剂或药物包括gsdmd-cn、gsdmd-nt、gsdmd-ct。本技术还提供了前述的标志物、前述生物材料、前述的配偶体、前述的试剂盒或组合物、前述的系统或装置在鉴别诊断和疗效评估胸痛相关疾病中的用途。一些方式中，胸痛相关疾病为心脏部位及心血管部位的感染、病变及梗塞坏死等疾病，尤其是急性冠脉综合征、肺部感染、肺栓塞或肺癌。

18、本技术提供一种方法，其特征在于，包括利用本技术的细胞株、或本技术的单克隆抗体或其抗原结合片段、或本技术的细胞系、或本技术的核酸分子、或本技术的表达盒、重组载体、或重组微生物、和/或本技术的试剂盒、组合物、系统、或装置；所述方法为如下之一：(a)制备测定细胞焦亡程度的制剂的方法；(b)制备诊断炎症的制剂的方法；(c)制备评估炎症性疾病的炎症程度或炎症性疾病的患者预后状况的制剂的方法；(d)制备监测炎症性疾病的进展的制剂的方法；(e)制备诊断胸痛疾病或监测胸痛疾病的进展的制剂的方法；(f)制备判断胸痛疾病的严重程度(如心梗面积、损伤大小等)的制剂的方法；(g)制备预判胸痛疾病的预后情况的制剂的方法；(h)筛选药物的方法，所述药物用于治疗胸痛相关疾病。具体而言，该方法包括定性或定量检测样品中的标志物，所述标志物为gsdmd或其片段、和/或gsdmd或其片段的修饰变体，和/或gsdmd或其片段的衍生物。在一种实施方式中，检测时采用前述配偶体和/或前述的试剂盒。

19、本技术还提供一种gsdmd的配偶体的用途或含有所述配偶体的试剂盒的用途，所述用途为如下之一：(a)制备测定细胞焦亡程度的制剂；(b)制备诊断炎症的制剂；(c)制备评估炎症性疾病的炎症程度或炎症性疾病的患者预后状况的制剂；(d)制备监测炎症性疾病的进展的制剂；(e)用于制备诊断胸痛疾病或监测胸痛疾病的进展的制剂中的用途；(f)用于制备判断胸痛疾病的严重程度(如心梗面积、损伤大小等)的制剂中的用途；(g)用于制备预判胸痛疾病的预后情况的制剂中的用途；(h)用于筛选药物的用途，所述药物用于治疗胸痛相关疾病。在一些实施方式中，该方法包括采用的试剂盒测定临床样本，以监测治疗过程，判断疗效等。

20、在一些实施方式中，gsdmd包括gsdmd全长蛋白(gsdmd-cn)，也包含gsdmd部分蛋白片段(如c端片段gsdmd-ct或n端片段gsdmd-nt)，以及gsdmd全长和蛋白片段的修饰变体和/或衍生物。

21、在一些实施方式中，本技术还提供用于测试多个或单个小体积临床样品或其等分试样中多种标志物中的一种或多种的存在的系统、方法和装置。在实施方式中，所述系统、方法或装置是服务点(pos)系统、方法或装置。

22、在一些实施方式中，本技术的方法或用途可用于急性冠脉综合征患者的早期诊断、心肌缺血再灌注损伤、疗效监测、心脏受损面积和预后。一些实施方式中，包括如下步骤：在从所述患者获得的样品中测定gsdmd或其片段的水平；以及将所述gsdmd或其片段的水平与所述急性冠脉综合征早期诊断、心肌缺血再灌注损伤、疗效监测、心脏受损面积和预后性相关联，其中所述关联包括将所述gsdmd或其片段的水平与阈值水平进行比较、gsdmd片段的水平与心肌缺血再灌注前后进行比较、gsdmd或其片段的水平与用药或者手术治疗前后进行比较、gsdmd或其片段的水平与患者影像学的血管狭窄或者堵塞面积、也即心脏受损面积的比较、gsdmd或其片段的水平与患者的临床情况相比较或者其他标志物联合评估患者预后。或者由此，当gsdmd或其片段的水平超过所述阈值水平时，所述患者倾向早期诊断、心肌缺血再灌注损伤、疗效监测、心脏受损面积和预后的判断，其中所述阈值水平是15-20ng/l，也可指99％正常人百分数。所述分析方法包含了针对gsdmd或其片段的不同部分的抗体夹心分析法。急性主动脉夹层、急性肺栓塞也是类似的诊断方法。

23、在另一些实施方式中，肺部位疾病的用途还包括将所述gsdmd或其片段的水平与一种或多种附加标志物的水平相关联，由此所述gsdmd或其片段的水平与所述标志物的水平的组合，增加了所述gsdmd或其片段的水平或所述相关标志物的水平对所述肺部感染、肺栓塞、肺癌的早起发现、疗效评估和预后的测值，其中所述附加标志物选自d-二聚体、crp、pct、saa、il-6、pro-grp、cea、scc、nse、cyfra21-1等。

24、在一些实施方式中，本技术的用途在心脏部位疾病的用途还包括将所述gsdmd或其片段的水平与一种或多种附加标志物的水平相关联，由此所述gsdmd或其片段的水平与所述标志物的水平的组合，增加了所述gsdmd或其片段的水平或所述相关标志物的水平对所述早期诊断、心肌缺血再灌注损伤、疗效监测、心脏受损面积和预后性的测值，其中所述附加标志物选自肌钙蛋白、高敏肌钙蛋白、nt pro-bnp或bnp、髓过氧化物酶、新蝶呤、gdf-15、st2、ck-mb、肌红蛋白、乳酸脱氢酶、半胱氨酸蛋白酶抑制剂c，c反应蛋白以及下列肽的成熟肽、前体和激素原形式：尿钠肽、肾上腺髓质素、内皮素、血管加压素。进一步的，本技术的方法或用途还包含从所述患者测定的心电图、胸部ct、造影分析数据。

25、一些实施方式中，本技术的方法或用途包含在从所述患者获得的样品中测定一种或多种附加标志物的水平，并将所述gsdmd或其片段的水平和所述一种或多种附加标志物的水平，二者与所述早期诊断、心肌缺血再灌注损伤、疗效监测、心脏受损面积和预后性相关联，由此所述gsdmd或其片段的水平与所述一种或多种附加标志物的水平的组合，增加了所述总gsdmd或其片段对心脏部位疾病所述早期诊断、心肌缺血再灌注损伤、疗效监测、心脏受损面积和预后性的预测值，以及对肺部疾病所述疾病早期诊断、疗效监测、预后性的预测。在一些实施方式中，将gsdmd或其片段的水平与所述一种或多种附加标志物水平之间以及心电图，和或的胸部ct，和或造影关联，使用数学算法进行。本技术的方法或用途还包括药物治疗的伴随诊断用途。