一种同时检测戊巴比妥钠溶液制剂中戊巴比妥钠和醇类抑菌剂含量的方法与流程

本发明属于质量检测，具体涉及一种同时检测戊巴比妥钠溶液制剂中戊巴比妥钠和醇类抑菌剂含量的方法。

背景技术：

1、巴比妥类物质对中枢神经系统有普遍性抑制作用，其中，戊巴比妥钠属于中效巴比妥类中枢镇静药物。戊巴比妥钠的有效成分是戊巴比妥。戊巴比妥钠随着剂量的增加，中枢抑制作用由弱变强，相应表现为镇静、催眠、抗惊厥及抗癫痛、麻醉等作用，大剂量还对心血管系统有抑制作用，10倍麻醉剂量可引起呼吸中枢麻痹而致死。因其有极好的抑制动物中枢神经而使其失去知觉、解除疼痛感的作用，戊巴比妥钠被广泛作为动物，尤其是实验动物安乐死的首选药物，如，在中国国家推荐标准《gb/t 39760-2021实验动物安乐死指南》、《美国兽医协会动物安乐死指南(2020年版)》等均将注射戊巴比妥钠作为实验动物安乐死的首选方法。

2、考虑动物用药品通常采用多剂量包装(多剂量包装药品是指最小销售单元内含有多次给药剂量的药品)，开启使用一段时间后仍会有剩余。为了防止在首次开启包装之后一段时间内出现药品微生物污染，保证药品质量，需要加入抑菌剂，例如醇类抑菌剂——苯甲醇。目前已经有含苯甲醇的市售戊巴比妥钠溶液制剂。但是，苯甲醇具有一定毒性，含量不能超标。因此，有必要严格控制和检测动物用药品中抑菌剂的含量。

3、目前已经有一些资料报道了检测戊巴比妥(钠)含量的方法，例如英国药典2023年版记载了利用高效液相色谱法检测戊巴比妥(钠)含量的方法，该方法的色谱条件如下：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以1.36g/l磷酸二氢钾(用磷酸调节ph值至3.5)和乙腈(65:35)为流动相；检测波长为214nm。但是，该方法不适合用于同时检测戊巴比妥钠溶液制剂中戊巴比妥钠和苯甲醇的含量，利用该方法同时检测戊巴比妥钠溶液制剂中戊巴比妥钠和苯甲醇的含量时，不符合中国药典2020年版第四部专论0512高效液相色谱法(63页)对拖尾因子和重复性的要求：1、以峰高作定量参数时，除另有规定外，拖尾因子应在0.95-1.05之间；2、连续进样5次，峰面积测量值的相对标准偏差应不大于2.0％。目前也未见其它能够同时检测戊巴比妥钠溶液制剂中戊巴比妥钠和醇类抑菌剂含量的方法被报道。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种同时检测戊巴比妥钠溶液制剂中戊巴比妥钠和醇类抑菌剂含量的方法。

2、本发明提供了一种同时检测戊巴比妥钠溶液制剂中戊巴比妥钠和醇类抑菌剂含量的方法，所述方法包括以下步骤：

3、(1)制备对照品溶液：取戊巴比妥和醇类抑菌剂，加稀释剂稀释，即得；

4、(2)制备供试品溶液：取戊巴比妥钠溶液制剂，加稀释剂稀释，即得；所述戊巴比妥钠溶液制剂中含醇类抑菌剂；

5、(3)分别吸取供试品溶液和对照品溶液，注入液相色谱仪中进行检测，得到色谱图，然后计算得到戊巴比妥钠溶液制剂中戊巴比妥钠和醇类抑菌剂的含量；检测的色谱条件如下：

6、色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；

7、流动相：由a相b相组成，其中，a相为含磷酸二氢钾和四丁基硫酸氢铵的水溶液，a相的ph值为2.8-3.2；b相为乙腈；a相和b相的体积比为(65-75)：(35-25)。

8、进一步地，所述计算的方法为外标法。

9、进一步地，所述醇类抑菌剂为苯甲醇。

10、进一步地，所述稀释剂为流动相。

11、进一步地，所述色谱柱为gemini c18色谱柱。

12、进一步地，所述a相中，磷酸二氢钾的浓度为0.005-0.02m，四丁基硫酸氢铵的浓度为0.001-0.01m。

13、进一步地，所述a相中，磷酸二氢钾的浓度为0.01m，四丁基硫酸氢铵的浓度为0.005m。

14、进一步地，所述a相的ph值为3.0，a相和b相的体积比为70：30。

15、进一步地，所述色谱条件中，进样量为5-20μl，流速为0.9-1.1ml/min。

16、进一步地，所述色谱条件中，进样量为10μl，流速为1.0ml/min。

17、进一步地，所述色谱条件中，柱温为35-45℃。

18、进一步地，所述色谱条件中，柱温为40℃。

19、本发明通过高效液相色谱外标法，能够在同一色谱条件下，使用一次检测，同时完成戊巴比妥含量和苯甲醇含量的检测，达到质量控制的目的。本发明检测方法中，戊巴比妥钠出峰时间约11.1分钟，苯甲醇出峰时间约5.6分钟，分离度高达22.114；戊巴比妥主峰理论塔板数18568，拖尾因子0.95，苯甲醇主峰理论塔板数15929，拖尾因子1.0。相比多次检测方能获得两者含量，本发明检测方法能够减少运行时间、提高检测效率、节省资源运行。本发明检测方法经过系统的检验方法学验证，确认方法科学、合理，具有快速、简便、灵敏度高、专属性强等优点，应用前景广阔。

20、显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

21、以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

技术特征：

1.一种同时检测戊巴比妥钠溶液制剂中戊巴比妥钠和醇类抑菌剂含量的方法，所述方法包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述醇类抑菌剂为苯甲醇。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述稀释剂为流动相，和/或，所述色谱柱为gemini c18色谱柱。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述a相中，磷酸二氢钾的浓度为0.005-0.02m，四丁基硫酸氢铵的浓度为0.001-0.01m。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述a相中，磷酸二氢钾的浓度为0.01m，四丁基硫酸氢铵的浓度为0.005m。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述a相的ph值为3.0，a相和b相的体积比为70：30。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述色谱条件中，进样量为5-20μl，流速为0.9-1.1ml/min。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述色谱条件中，进样量为10μl，流速为1.0ml/min。

9.根据权利要求1-8任一项所述的方法，其特征在于，所述色谱条件中，柱温为35-45℃。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述色谱条件中，柱温为40℃。

技术总结本发明提供了一种同时检测戊巴比妥钠溶液制剂中戊巴比妥钠和醇类抑菌剂含量的方法，属于质量检测技术领域。该方法检测的色谱条件如下：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；流动相：由A相B相组成，其中，A相为含磷酸二氢钾和四丁基硫酸氢铵的水溶液，A相的pH值为2.8‑3.2；B相为乙腈；A相和B相的体积比为(65‑75)：(35‑25)。利用本发明的方法能够在同一色谱条件下同时完成戊巴比妥钠含量和苯甲醇含量的检测，达到质量控制的目的。本发明检测方法能够减少运行时间、提高检测效率、节省资源运行。本发明检测方法经过系统的检验方法学验证，确认方法科学、合理，具有快速、简便、灵敏度高、专属性强等优点，应用前景广阔。技术研发人员：马保臣,杨炯,杨青春,赵凤龙,杨梿,尼健君,胡楠,张成,张劲松,黄学林,吴秋萍,乔秋萍受保护的技术使用者：中国牧工商集团有限公司技术研发日：技术公布日：2024/9/17