一种丹霞小花苣苔组织培养的方法

本发明涉及组织培养，更具体地说，它涉及一种丹霞小花苣苔组织培养的方法。

背景技术：

1、丹霞小花苣苔为苦苣苔科，报春苣苔属多年生草本植物。其植株高2-10cm，根状茎较短5-15mm，花白色，花期5-6月，果实成熟期为6-7月。在广东韶关仁化丹霞山海拔100-250m的潮湿岩壁上发现4个居群，植株数量稀少，分布较分散，目前在丹霞山的分布点不到十处，是丹霞山国家级自然保护区重点保护的野生植物资源。丹霞小花苣苔作为丹霞地貌的代表植物，对研究丹霞地貌的演变及生物多样性具有重要的作用。

2、丹霞小花苣苔的花色艳丽，花朵精致，具有良好的观赏价值，可用于小盆栽培，园林盆景点缀及绿化地被植物，此外苦苣苔类植物通常还有一定的药用价值，有消炎止痛、散瘀消肿，解蛇毒等功效。鉴于丹霞小花苣苔的用途和种质资源的地位，开展丹霞小花苣苔人工繁殖的研究具有重要的现实意义。丹霞小花苣苔野外主要通过种子传播的方式繁殖，但其种子较小，难以收集，人工播种繁殖受到限制。苦苣苔植物扦插繁殖周期长，受种源材料和季节的限制，繁殖数量少。植物组织培养技术不受种源和季节的限制，可以利用少量组织通过再生获得较多的植株，目前在苦苣苔类植物上已经有相关的报道，通常以叶片为外植体建立再生体系。而丹霞小花苣苔的组培技术的研究目前未见相关报道。

技术实现思路

1、针对现有技术存在的不足，本发明的目的在于提供一种丹霞小花苣苔组织培养的方法，采用叶片作为外植体,提出了合适的表面消毒方式，以及提出了适用的诱导培养基、增殖培养基、生根培养基及培养基质，组培苗生长良好，成活率达到100％，为丹霞小花苣苔的繁殖和回归种植提供技术参考

2、本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：

3、一种丹霞小花苣苔组织培养的方法，步骤如下：

4、(1)表面消毒：将剪取的叶片进行表面消毒，然后切块待用；

5、(2)不定芽的诱导：以切块后的叶片作为外植体，将外植体接种到诱导培养基上进行培养，诱导出不定芽，其中，所述诱导培养基包括1/2ms培养基、6-ba和naa；

6、(3)不定芽的增殖：将诱导的不定芽接种到中增殖培养基上进行培养，使不定芽增殖，其中，所述增殖培养基包括1/2ms培养基、6-ba和naa；

7、(4)生根培养：将增殖后的不定芽切分成单芽，并接种到生根培养基中进行培养，获得生根的丛芽，其中，所述生根培养基包括1/2ms培养基和naa；

8、(5)炼苗移栽：将生根的组培苗经过炼苗后移栽到基质中，培养形成新植株。

9、在其中一个实施例中，在步骤(1)中，将剪取的叶片用洗衣粉浸泡清洗10min，然后用清水轻轻将叶片洗涤干净，再使用酒精、hgc l2进行表面消毒，将消毒后的叶片切块。

10、在其中一个实施例中，在步骤(1)中，使用酒精、hgc l2进行表面消毒的操作是：先用75％的酒精消毒30s，使用无菌水清洗三次，再用质量分数为0.1％的hgc l2溶液对叶片进行浸泡消毒6-10min，随后使用无菌水冲洗四次。

11、在其中一个实施例中，在步骤(2)中，所述诱导培养基包括1/2ms培养基、1～2mg·l-1的6-ba和0.1～0.5mg·l-1的naa。

12、在其中一个实施例中，在步骤(2)中，先暗处培养10d后再移入光照培养，直至诱导出不定芽。

13、在其中一个实施例中，在步骤(3)中，所述增殖培养基包括1/2ms培养基、2～3mg·l-1的6-ba和0.05～0.2mg·l-1的naa。

14、在其中一个实施例中，在步骤(4)中，所述增殖培养基包括1/2ms培养基和0.1～0.5mg·l-1的naa。

15、在其中一个实施例中，在步骤(5)中，所述基质是碦斯特腐叶土、珍珠岩和蛭石形成的混合，其中，碦斯特腐叶土、珍珠岩和蛭石的体积比是1:1:1。

16、在其中一个实施例中，在步骤(5)中，所述基质是泥炭土、珍珠岩和蛭石形成的混合，其中，泥炭土、珍珠岩和蛭石的体积比是1:1:1。

17、在其中一个实施例中，在步骤(5)中，所述基质是珍珠岩和蛭石形成的混合，其中，珍珠岩和蛭石的体积比是1:1。

18、综上所述，本发明具有以下有益效果：

19、本发明采用丹霞小花苣苔的叶片作为外植体,通过叶片诱导不定芽和芽增殖，可大量繁殖丹霞小花苣苔，本发明提出了合适的表面消毒方式，以及提出了适用的诱导培养基、增殖培养基、生根培养基及培养基质，组培苗生长良好，成活率达到100％，为丹霞小花苣苔的繁殖和回归种植提供技术参考。

技术特征：

1.一种丹霞小花苣苔组织培养的方法，其特征在于，步骤如下：

2.如权利要求1所述的丹霞小花苣苔组织培养的方法，其特征在于，在步骤(1)中，将剪取的叶片用洗衣粉浸泡清洗10min，然后用清水轻轻将叶片洗涤干净，再使用酒精、hgcl2进行表面消毒，将消毒后的叶片切块。

3.如权利要求2所述的丹霞小花苣苔组织培养的方法，其特征在于，在步骤(1)中，使用酒精、hgcl2进行表面消毒的操作是：先用75％的酒精消毒30s，使用无菌水清洗三次，再用质量分数为0.1％的hgcl2溶液对叶片进行浸泡消毒6-10min，随后使用无菌水冲洗四次。

4.如权利要求1所述的丹霞小花苣苔组织培养的方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述诱导培养基包括1/2ms培养基、1～2mg·l-1的6-ba和0.1～0.5mg·l-1的naa。

5.如权利要求1所述的丹霞小花苣苔组织培养的方法，其特征在于，在步骤(2)中，先暗处培养10d后再移入光照培养，直至诱导出不定芽。

6.如权利要求1所述的丹霞小花苣苔组织培养的方法，其特征在于，在步骤(3)中，所述增殖培养基包括1/2ms培养基、2～3mg·l-1的6-ba和0.05～0.2mg·l-1的naa。

7.如权利要求1所述的丹霞小花苣苔组织培养的方法，其特征在于，在步骤(4)中，所述增殖培养基包括1/2ms培养基和0.1～0.5mg·l-1的naa。

8.如权利要求1所述的丹霞小花苣苔组织培养的方法，其特征在于，在步骤(5)中，所述基质是碦斯特腐叶土、珍珠岩和蛭石形成的混合，其中，碦斯特腐叶土、珍珠岩和蛭石的体积比是1:1:1。

9.如权利要求1所述的丹霞小花苣苔组织培养的方法，其特征在于，在步骤(5)中，所述基质是泥炭土、珍珠岩和蛭石形成的混合，其中，泥炭土、珍珠岩和蛭石的体积比是1:1:1。

10.如权利要求1所述的丹霞小花苣苔组织培养的方法，其特征在于，在步骤(5)中，所述基质是珍珠岩和蛭石形成的混合，其中，珍珠岩和蛭石的体积比是1:1。

技术总结本发明涉及一种丹霞小花苣苔组织培养的方法，步骤如下：(1)表面消毒；(2)不定芽的诱导；(3)不定芽的增殖；(4)生根培养；(5)炼苗移栽。本发明采用丹霞小花苣苔的叶片作为外植体,提出了合适的表面消毒方式，以及提出了适用的诱导培养基、增殖培养基、生根培养基及培养基质，组培苗生长良好，成活率达到100％，为丹霞小花苣苔的繁殖和回归种植提供技术参考。技术研发人员：韩伟,于白音,常圣鑫,麦广威,张金樾受保护的技术使用者：韶关学院技术研发日：技术公布日：2024/9/29