一种含有水飞蓟宾的组合物的制作方法

本发明涉及医药，具体涉及一种含有水飞蓟宾的组合物在治疗肝纤维化中的应用。

背景技术：

1、水飞蓟(silybum marianum(l.)gaertn.)，为菊科植物水飞蓟的干燥成熟果实，其味苦凉，有清热解毒，疏肝利胆之效，现代临床应用中对急慢性肝炎、肝硬化、脂肪肝等均具有良好的疗效，其活性成分水飞蓟宾(silybin，sb)是全球市场占有率最高的黄酮类提取物之一(bhattacharya，s.phytotherapeutic properties of milk thistl-e seeds：an overview.j.adv.pharm.educ.res.2011,1,69–79.)。

2、

3、水飞蓟宾可降低alt、ast等肝酶水平来阻止细胞逃逸以及肝细胞膜功能完整性的丧失；此外，水飞蓟宾也能通过降低ch、tg及ldl水平发挥保护肝细胞的作用。水飞蓟宾可触发多种抗氧化酶与刺激nrf2通路，减少氧化应激。水飞蓟宾从抑制细胞因子的释放角度证明其在nafld和nash中的抗炎作用，能够显著降低促炎水平细胞因子tnf-α、il-6、il-1β及il-12β水平。202111261969.0公开了一种高纯度水飞蓟宾葡甲胺药物新制剂及其制备方法和在防治急、危、重症肝衰竭的应用；202210427370.8公开了一种制水飞蓟宾衍生物的方法及水飞蓟宾衍生物对降低氧化损伤的作用。水飞蓟宾具有确切的肝保护作用，但水飞蓟宾对肝纤维化的保护作用较弱，由于水飞蓟宾水溶性差，目前研究多数为水飞蓟宾针剂给药进行肝纤维化的治疗，仅能够降低血清肝纤维化指标及α-sma蛋白、tgf-β1蛋白等。

4、肝纤维化是由多种慢性肝脏疾病引起的肝脏内弥漫性细胞外基质(尤其是胶原)过度沉积，主要表现为α-sma蛋白、i、iii型胶原蛋白和基质金属蛋白酶抑制剂等促纤维化分子的转录增加，生成大量纤维状和非纤维状基质蛋白。慢性肝病所致的持续或反复性肝实质细胞炎症坏死引起纤维结缔组织大量增生、降解活性相对或绝对不足，导致各种细胞外基质纤维合成与降解过程的动态失衡，因此大量细胞外基质沉积形成肝纤维化。肝纤维化是慢性肝病持续发展为肝硬化中的一个可逆过程，近年的基础和临床研究表明，给予有效的病因治疗，能够直接抑制细胞外基质合成与促进降解，从而恢复各种细胞外基质纤维合成与降解过程的“净效应”，达到动态平衡。肝星状细胞(hepatic stellate cells，hscs)活化是肝纤维化的中心环节，正常肝脏hscs主要存储维生素a，肝损伤后造成肝细胞凋亡，凋亡小体激活kuffer细胞与血小板分泌转化生长因子β(tgf-β)、血小板衍生生长因子(pdgf)等细胞因子、趋化因子，受损肝细胞与内皮细胞释放氧自由基与炎性因子，共同介导静息态hscs合成大量ecm转化为活化态肌纤维母细胞。针对于水飞蓟宾有确切的肝保护作用但抗肝纤维化作用微弱，将作用于hscs活化的不同靶点的化学药物与水飞蓟宾合理组合，将有可能在由肝损伤引起肝纤维化的逆转治疗上有所突破。

技术实现思路

1、本发明提供了一种含有水飞蓟宾的组合物，并提供了该组合物在治疗肝纤维化疾病中的用途。

2、本发明提供了如下技术方案：

3、一种含有水飞蓟宾的组合物，包含水飞蓟宾和卡维地洛作为有效成分。

4、一种含有水飞蓟宾的组合物，包含a)含有水飞蓟宾和卡维地洛作为活性剂；以及b)适合于制备固体口服剂量形式的药物上可接受的辅料；其中水飞蓟宾和卡维地洛质量比为0.1～200:1。

5、本发明所述含有水飞蓟宾的组合物，所述卡维地洛包含其与有机酸或无机酸形成的药学上可接受的盐。所述有机酸包括但不限于草酸，富马酸，苯甲酸和扁桃酸；无机酸包括但不限于磷酸。

6、在进一步的实施例中，本发明还公开了以下包含水飞蓟宾的组合物，具体的组合物如下所示。

7、一种含有水飞蓟宾的组合物，包含(a)水飞蓟宾，和(b)一种非甾体抗炎药为有效成分；所述非甾体抗炎药选自醋氯芬酸、丙酸氯倍他素。

8、一种含有水飞蓟宾的组合物，包含(a)水飞蓟宾，和(b)一种血管紧张素抑制剂为有效成分，其中血管紧张素抑制剂是缬沙坦。

9、一种含有水飞蓟宾的组合物，包含(a)水飞蓟宾，和(b)一种钙拮抗剂为有效成分，其中钙拮抗剂选自尼卡地平、马尼地平、氨氯地平、西尼地平。

10、一种含有水飞蓟宾的组合物，包含(a)水飞蓟宾，和(b)一种利尿剂为有效成分；所述利尿剂选自坦洛新、d-甘露醇。

11、一种含有水飞蓟宾的组合物，包含(a)水飞蓟宾，和(b)一种糖皮质激素类药物为有效成分；所述糖皮质激素类药物选自地奈德。

12、另外，当与水飞蓟宾构成本发明所述组合物的上述化合物，包括卡维地洛，非甾体抗炎药，血管紧张素抑制剂，钙拮抗剂，利尿剂和糖皮质激素类药物，具有不对称碳原子时，也包括其旋光异构体及其异构体的混合物。特别的，本发明的组合物还包含水飞蓟宾与上述化合物中的一种或几种，包括卡维地洛，非甾体抗炎药，血管紧张素抑制剂，钙拮抗剂，利尿剂和糖皮质激素类药物形成的前药。

13、在一些实施例中，本发明公开了含有水飞蓟宾的组合物，包括水飞蓟宾和卡维地洛的组合物，以及水飞蓟宾和非甾体抗炎药，血管紧张素抑制剂，钙拮抗剂，利尿剂和糖皮质激素类药物形成的组合物在治疗肝纤维化中的用途，和在治疗慢性肝病中的用途。

14、进一步的，所述用途为在治疗慢性肝病及其引起的肝纤维化中的用途。

15、进一步的，所述用途为在治疗化学性肝损伤、胆汁淤积型肝病和非酒精性脂肪性肝炎(nash)等慢性肝病及其引起的肝纤维化中的用途。

16、根据本发明，水飞蓟宾和卡维地洛组合使用比各单剂显示出更优良的效果，因此，可以将水飞蓟宾和卡维地洛以混合剂的形式给药。本发明中公开的水飞蓟宾和卡维地洛组合物的给药途径一般是经口给予，因此，可以将两类药剂配制成各自单独的不同单位给药形式，或者配制成混合后的物理性的一个单位给药形式。所述单位给药形式有例如散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂等，可以将其原料药与赋形剂、稀释剂等混合，如下所述，通过通常的制剂技术进行配制。本发明的固体口服剂量形式包括所述剂量形式中常用的添加剂，包括可应用常用于片剂或胶囊制剂中的药用辅料。这些物质包括但不限于崩解剂、结合剂、润滑剂、助流剂、稳定剂、赋形剂或稀释剂、增溶剂等。所述含有水飞蓟宾的组合物，所述组合物的制剂形式是片剂或者胶囊。

17、上述制剂可用赋形剂(例如乳糖、白糖、葡萄糖、甘露糖醇、山梨糖醇等糖衍生物；玉米淀粉、马铃薯淀粉、α淀粉、糊精等淀粉衍生物；微晶纤维素等纤维素衍生物；阿拉伯树胶；葡聚糖；普鲁兰等有机赋形剂；以及轻质硅酸肝、合成硅酸铝、硅酸钙、硅铝酸候等硅酸盐衍生物；磷酸氢钙等磷酸盐；碳酸钙等碳酸盐；硫酸钙等硫酸盐之类的无机类赋形剂。)、润滑剂(例如硬脂酸、硬脂酸钙、硬脂酸镁等硬脂酸金属盐；滑石粉；蜂蜡、鲸蜡等蜡类；硼酸，己二酸，硫酸纳等硫酸盐；乙二醇，富马酸，苯甲酸纳，dl白氨酸；月桂基硫酸钠、月桂基硫酸锐等月桂基硫酸盐；硅酸酐、硅酸水合物等硅酸类；以及上述淀粉衍生物。)、粘合剂(例如羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇以及与上述赋形剂同样的化合物。)、崩解剂(例如低取代羟丙基纤维素、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钙、内部交联的羧甲基纤维素纳等纤维素衍生物；羧甲基淀粉、羧甲基淀粉纳、交联聚乙烯吡咯烷酮等化学改性的淀粉纤维素类；上述淀粉衍生物。)、乳化剂(例如膨润土、v字胶等胶粘土；氢氧化镁、氢氧化铝等金属氢氧化物；月桂基硫酸纳、硬脂酸钙等阴离子表面活性剂；苯扎氯铵等阳离子表面活性剂；以及聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯、蔗糖脂肪酸酯等非离子表面活性剂，以及磷酯类，例如大豆磷脂。)、稳定剂(例如对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯等对羟基苯甲酸酯类；氯丁醇、平醇、苯乙醇等醇类；苯扎氯铵；苯酚、甲酚等酚类；脱氢乙酸；以及山梨酸。)、矫味矫臭剂(例如通常所用的甜味料、酸味料、香料等。)、稀释剂等添加剂通过普遍已知的方法进行制造。

18、在剂量范围约为0.2～8000mg的水飞蓟宾与剂量范围约为2～40mg的卡维地洛结合后，适于更有效地治疗肝纤维化。特别合适的剂量范围是约1.5～3000mg水飞蓟宾以及约3～20mg卡维地洛。更优选的单位剂量是约3～1000mg水飞蓟宾以及约3～10mg卡维地洛。更优选的单位剂量是约15～500mg水飞蓟宾以及约3～10mg卡维地洛。更优选的单位剂量是约30～500mg水飞蓟宾以及约3～10mg卡维地洛。更优选的单位剂量是约90～500mg水飞蓟宾以及约3～10mg卡维地洛。更优选的单位剂量是约120～500mg水飞蓟宾以及约3～10mg卡维地洛。最优选的单位剂量是约150～500mg水飞蓟宾以及约3～10mg卡维地洛。

19、本发明公开的水飞蓟宾与卡维地洛联用能显著下调col1a1，col1a2(col3a1)mrna的表达水平，能有效改善多种肝纤维化模型中肝脏纤维化病变程度。上述药物优选用于温血动物，更优选用于人。

20、说明书附图

21、图1基于col1a1-luci-reporter荧光素酶的hscs活化模型的建立和验证；与空载体组比较，***p<0.001；与控制组比较，ns>0.05，###p<0.001；

22、图2水飞蓟宾对hscs活化作用的考察；与空载体组比较，***p<0.001；与控制组比较，ns>0.05；

23、图3抑制hscs活化的水飞蓟宾组合物筛选，其中：

24、图3-1一类属于降压药的化合物(以卡维地洛为代表)与水飞蓟宾联用对活化态hscs细胞col1a1-luci-reporter荧光素酶表达水平分析；

25、图3-2其他类化合物与水飞蓟宾联用对活化态hscs细胞col1a1-luci-reporte r荧光素酶表达水平分析；与空载体组比较，***p<0.001；与控制组比较，ns>0.05，#p<0.05，##p<0.01，###p<0.001；

26、图4水飞蓟宾与卡维地洛联用对原代肝星状细胞(primary hepatic stellatecells，phscs)活化的抑制作用验证。分离提取小鼠phscs，分别单独给予卡维地洛、水飞蓟宾或同时给予二者，考察col1a1，col1a2的mrna水平分析，ns>0.05，**p<0.01，***p<0.001；

27、图5水飞蓟宾与卡维地洛对hsc活化抑制作用的给药配比分析，其中：

28、图5-1固定卡维地洛给药浓度为10μm，二者按6：1；4：1；2：1；1：1；1：2；1：4；1：6；1：8的浓度配比进行组合后对hscs活化的抑制作用；

29、图5-2固定水飞蓟宾给药浓度为10μm，二者按6：1；4：1；2：1；1：2；1：4；1：6；1：8的浓度配比进行组合后对hscs活化作用，与空载体组比较，***p<0.001；与控制组比较，ns>0.05，##p<0.01，###p<0.001；

30、图6水飞蓟宾(100mg/kg)与卡维地洛(2mg/kg)联用对ccl4诱导的肝纤维化的作用，其中：

31、图6-1肝脏col1a1，col1a2 mrna表达水平分析；

32、图6-2肝脏he，sirius red，masson染色分析；

33、图6-3各组小鼠肝脏胶原容积分数(cvf)比较，ns>0.05，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001；

34、图7水飞蓟宾(100mg/kg)与卡维地洛(2mg/kg)联用对bdl诱导的肝纤维化的作用，其中：

35、图7-1肝脏col1a1，col1a2 mrna表达水平分析；

36、图7-2肝脏he，sirius red，masson染色分析；

37、图7-3各组小鼠肝脏胶原容积分数(cvf)比较，ns>0.05，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001。

38、图8水飞蓟宾(75、100mg/kg)与卡维地洛(2mg/kg)联用对mcd饮食诱导的nash及肝纤维化的作用，其中：

39、图8-1肝脏col1a1，col1a2，col3a1 mrna，mmp2表达水平分析；

40、图8-2肝脏he，sirius red，masson染色分析；

41、图8-3各组小鼠肝脏胶原容积分数(cvf)及脂质空泡面积比较，与控制组(mcs)比较，ns>0.05，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，与mcd组比较，ns>0.05，#p<0.05，##p<0.01，###p<0.001

42、图9固定配比的水飞蓟宾与卡维地洛组合物对ccl4诱导的肝纤维化的剂量依赖性作用，其中：

43、图9-1肝脏col1a1，col1a2 mrna表达水平分析

44、图9-2肝脏he，sirius red，masson染色分析；

45、图9-3各组小鼠肝脏胶原容积分数(cvf)比较，与控制组比较，ns>0.05，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，与模型组比较，ns>0.05，#p<0.05，##p<0.01，###p<0.001

46、图10固定配比的水飞蓟宾与卡维地洛组合物对bdl诱导的肝纤维化的剂量依赖性作用，其中：

47、图10-1肝脏col1a1，col1a2 mrna表达水平分析；

48、图10-2肝脏he，sirius red，masson染色分析；

49、图10-3各组小鼠肝脏胶原容积分数(cvf)比较，与控制组比较，ns>0.05，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，与模型组比较，ns>0.05，#p<0.05，##p<0.01，###p<0.001