NT-proBNP抗体及其用途的制作方法

本发明属于抗体，具体地，本发明涉及一种nt-probnp抗体及其用途，更具体地，本发明涉及一种nt-probnp的抗体、核酸分子、载体、细胞或宿主、抗体的制备方法、偶联物、试剂或试剂盒及其用途、检测nt-probnp的方法、筛选nt-probnp抗体的方法和突变文库。

背景技术：

1、1988年日本学者sudoh首次从猪脑内分离得到一种具有强有力的利尿、扩血管和降压作用的多肽，将其命名为脑钠肽(brain natriuretic peptide，bnp)。bnp分布在心脏含量最高，但心肌细胞首先合成的是含有108个氨基酸的probnp(bnp前体)，当心肌细胞受到刺激后，probnp在内切酶的作用下裂解为含有76个氨基酸、无生物活性的n末端b型利钠肽原(nt-probnp)和含有32个氨基酸、具有活性的b型利钠肽(bnp)，两者来源相同并且等摩尔分泌释放进入血循环。

2、当心脏容量负荷增加或心脏功能受损时，n末端脑钠肽前体(nt-probnp)与bnp的指标浓度会异常升高，其中nt-probnp相对bnp生物稳定性较好，半衰期较长(120min)，浓度相对较稳定，有效检测时间长，血液中含量相对比bnp高约16～20倍，因此检测相对容易，并且血浆标本在体外的稳定性长(>48h)，是诊断心力衰竭和评价心脏功能的最佳心肌标志物。

3、正常的人血液中nt-probnp含量一般低于0.3ng/ml。当心脏功能受损，心肌扩张时，nt-probnp会快速合成并大量分泌释放进入到人体血液中。在发现一些相关早期病症的时候，准确、灵敏、高效稳定地测定血液中nt-probnp的量，能给早期心功能不全、心衰、呼吸困难的心源性及非心源性心衰治疗及预后监测、急性冠状动脉综合征的分级等方面提供快速、准确的早期诊断依据。

4、目前用于检nt-probnp含量的方法主要有金标定性试验、荧光免疫法、酶联免疫吸附试验(elisa)和磁微粒化学发光法(cmia)，但是这些测量方法都需要针对于nt-probnp的单克隆抗体。因此，本领域对于有效结合nt-probnp，并对其进行检测的抗体存在着强烈需求。

技术实现思路

1、本发明旨在提供了一种抗nt-probnp的抗体、检测nt-probnp的试剂或试剂盒。

2、在本发明的第一方面，本发明提出了一种抗nt-probnp抗体，包括：重链可变区和/或轻链可变区；所述重链可变区包括如seq id no:1或其变体所示的氨基酸序列，与seq idno:1所示的氨基酸序列相比，所述seq id no:1的变体包括如下位点的突变：第34位、第50位、第52位、第57位和第63位中的至少之一；所述轻链可变区包括如seq id no:2或其变体所示的氨基酸序列，与seq id no:2所示的氨基酸序列相比，所述seq id no:2的变体包括如下位点的突变：第97位和第100位中的至少之一。

3、在本发明的第二方面，本发明提出了一种抗nt-probnp抗体，包括hcdr1、hcdr2、hcdr3和lcdr1、lcdr2、lcdr3，所述hcdr1、hcdr2、hcdr3为与第一方面所述的抗体所限定的重链可变区的hcdr1、hcdr2、hcdr3一致的氨基酸序列；所述lcdr1、lcdr2、lcdr3为与第一方面所述的抗体所限定的轻链可变区的lcdr1、lcdr2、lcdr3一致的氨基酸序列。

4、在本发明的第三方面，本发明提出了一种核酸分子、载体、细胞或宿主或制备上述抗体的方法，所述核酸分子编码第一方面或第二方面所述的抗体；所述载体包括前述的核酸分子；所述细胞或宿主包括前述核酸分子或载体或者表达第一方面或第二方面所述的抗体；所述方法包括培养前述的细胞或宿主。

5、在本发明的第四方面，本发明提出了一种偶联物，所述偶联物包括：第一方面或第二方面所述的抗体以及与其偶联的偶联部分。

6、在本发明的第五方面，本发明提出了一种试剂或试剂盒，所述试剂或试剂盒包括：第一方面或第二方面所述的抗体或第四方面所述的偶联物。

7、在本发明的第六方面，本发明提出了一种第一方面或第二方面所述的抗体、第四方面所述的偶联物或第五方面所述的试剂或试剂盒在检测nt-probnp、制备用于检测nt-probnp产品中的用途。

8、在本发明的第七方面，本发明提出了一种筛选nt-probnp抗体的方法，所述方法包括：a)设计引物，用于对第一方面所述的抗体中所限定的突变位点或第二方面所述的抗体中所限定的x1、x2、x3、x4、x5、x6、x7中的1、2、3、4、5、6或7个位点进行氨基酸替换；b)以第三方面所述的核酸分子、载体或细胞为模板，用a)所述引物构建的突变文库；c)从所述突变文库中筛选nt-probnp抗体。

9、在本发明的第八方面，本发明提出了一种突变文库，所述突变文库包括第一方面或第二方面所述的抗体。

10、本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。

技术特征：

1.一种抗nt-probnp抗体，其特征在于，包括：

2.根据权利要求1所述的抗体，其特征在于，与seq id no:1所示的氨基酸序列相比，所述seq id no:1的变体包括如下位点的突变：v34g/s、q50y/l/w/f、t52i、a57l和l63a/k中的至少之一；

3.一种抗nt-probnp抗体，包括hcdr1、hcdr2、hcdr3和lcdr1、lcdr2、lcdr3，其特征在于，所述hcdr1、hcdr2、hcdr3为与权利要求1～2任一项所述的抗体所限定的重链可变区的hcdr1、hcdr2、hcdr3一致的氨基酸序列；所述lcdr1、lcdr2、lcdr3为与权利要求1～2任一项所述的抗体所限定的轻链可变区的lcdr1、lcdr2、lcdr3一致的氨基酸序列；

4.根据权利要求1～3任一项所述的抗体，其特征在于，所述抗体进一步包括恒定区；

5.一种核酸分子、载体、细胞或宿主或制备权利要求1～4任一项所述抗体的方法，其特征在于，所述核酸分子编码权利要求1～4任一项所述的抗体；所述载体所述的核酸分子；所述细胞或宿主包括所述的核酸分子或载体或表达权利要求1～4任一项所述的抗体；所述方法包括培养所述细胞或宿主。

6.一种偶联物，其特征在于，包括：权利要求1～4任一项所述的抗体以及与其偶联的偶联部分；

7.一种试剂或试剂盒，其特征在于，包括：

8.权利要求1～4任一项所述的抗体、权利要求6所述的偶联物或权利要求7所述的试剂或试剂盒在检测nt-probnp或制备用于检测nt-probnp产品中的用途。

9.一种筛选nt-probnp抗体的方法，其特征在于，包括：

10.一种突变文库，其特征在于，所述突变文库包括权利要求1～4任一项所述的抗体；

技术总结本发明提出了一种抗NT‑proBNP抗体，所述抗体包括：重链可变区和/或轻链可变区；其中，所述重链可变区包括如SEQ ID NO:1或其变体所示的氨基酸序列；所述轻链可变区包括如SEQ ID NO:2或其变体所示的氨基酸序列；与SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列相比，所述SEQ ID NO:1的变体包括如下位点的突变：第34位、第50位、第52位、第57位和第63位中的至少之一；与SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列相比，所述SEQ ID NO:2的变体包括如下位点的突变：第97位和第100位中至少之一。本发明的抗体可有效结合NT‑proBNP，可用于NT‑proBNP的定性或定量检测。技术研发人员：王磊,张翼,许海燕,钟冬梅,孟媛受保护的技术使用者：菲鹏生物股份有限公司技术研发日：技术公布日：2024/10/10