一种检测支气管败血性波氏杆菌的LAMP引物探针组及应用的制作方法

本发明涉及一种检测支气管败血性波氏杆菌的lamp引物探针组及应用，属于微生物检测。

背景技术：

1、支气管败血性波氏杆菌(bordetella bronchiseptica，b.b)是家猫的主要病原体之一，在高养殖密度条件下，如救援收容所和多猫家庭，发病率更高。也有过偶发的人畜共患病例。波氏杆菌是一种革兰氏阴性菌，定植于哺乳动物的呼吸道，可在受感染猫的口腔和鼻腔分泌物中传播并在宿主呼吸道的纤毛上皮上定植，可能导致慢性感染。患有呼吸道疾病的狗对猫来说也是一种感染风险。b.b从感染的猫的口腔和鼻腔分泌物中脱落，故直接或间接接触可能导致其传播。与猫杯状病毒(fcv)和猫疱疹病毒(fhv)一样，过度拥挤和管理不善容易导致感染和患病。在一项研究中，对多猫(＞5只猫)家庭与呼吸道疾病相关的病原体进行了流行性病学调查，pcr检测结果表明有症状的猫中b.b有5％阳性率，而无症状的猫中有1.3％阳性率。一般认为，养殖群体越大，阳性率有可能越高。另外，某些救援避难所的卫生条件较差，也可能导致较高的血清阳性率。

2、b.b引起的临床症状包括发烧、咳嗽、打喷嚏、眼部分泌物和淋巴结病，轻症一般在10天后消失。从上述轻度感染到伴有呼吸困难、发绀和死亡的严重肺炎。肺炎通常见于10周以下的小猫，但年长的猫也会受到影响。咳嗽猫(急性和慢性)应考虑支气管败血性波氏杆菌感染。针对b.b感染，即使只有轻微的症状，也有必要进行抗菌治疗。因为其可能发展到下呼吸道定植。而严重感染的猫则需要支持性治疗，以解决脱水和电解质、酸碱紊乱，病症最为严重的猫还可能需要重症护理。支气管败血性波氏杆菌的防控措施主要是减少和病猫的接触，尽可能减少饲养密度，并对环境进行清洁和消毒，以尽量减少传播的风险。对常见其他猫呼吸道病原体，如fcv和fhv，的防控也有助于控制感染。

3、目前，针对支气管败血性波氏杆菌的检测方法主要有病毒分离培养、血清学诊断方法，分子生物学检测方法等。其中，由于鼻腔中还存在其他的常见菌，可能会干扰b.b的分离，导致检出概率大大降低。另外，病毒分离培养和血清学诊断的方法在临床上适用性不高，是更适用于实验室检验的两种方法。免疫层析法可快速检测b.b，但由于其灵敏度不够，该法只能用于猫发病后机体排毒期间。

4、分子生物学诊断方法中最常见的是是聚合酶链式反应技术(pcr)，pcr是目前大多数病原体检测的金标准，但是其扩增必须的pcr仪较昂贵，反应时间较长，一般需要1-2个小时或更长，故pcr技术在兽医基层实验室推广应用较难。而对于企业来说，仪器维护及回收成本偏高。因此，根据兽医基层检验室的需求，急需开发了一种灵敏度特异性好，操作方便且能够迅速获取检测结果的支气管败血性波氏杆菌检测方法。

技术实现思路

1、本发明提供了一种检测支气管败血性波氏杆菌的lamp引物探针组及应用，可以有效解决上述问题。

2、本发明是这样实现的：

3、一种检测支气管败血性波氏杆菌的lamp引物探针组，包括引物组f3-1、b3-1、fip-1、bip-1、lf-1、lb-1及探针p-1，所述引物组f3-1、b3-1、fip-1、bip-1、lf-1、lb-1的碱基序列分别如seq id no:2-7所示，所述探针p-1的碱基序列分别如seq id no:8所示。

4、在一些实施例中，所述f3-1、b3-1、fip-1、bip-1、lf-1、lb-1及p-1的摩尔比为1：1：8：8：4：4：1。

5、在一些实施例中，所述lamp引物探针组检测的靶基因为flaa基因的1140-1465bp段，其碱基序列分别如seq id no:1所示。

6、一种上述的检测支气管败血性波氏杆菌的lamp引物探针组在制备检测支气管败血性波氏杆菌的lamp试剂中的应用。

7、一种上述的检测支气管败血性波氏杆菌的lamp引物探针组在制备检测支气管败血性波氏杆菌的lamp试剂盒中的应用。

8、本发明的有益效果是：

9、本发明的检测支气管败血性波氏杆菌的lamp引物探针组，可以用于检测支气管败血性波氏杆菌，检测灵敏度高，特异性强。

10、本发明lamp引物探针组应用lamp探针法，相较于传统的lamp染料法和比色法具有以下优势：更有效的减少了非特异性扩增的干扰；可以通过对不同病原体的特异探针标记不同的荧光基团，实现单管多重的检测。

11、本发明lamp引物探针组相较于普通探针序列更短，荧光基团淬灭更加完全，从而降低荧光背景，提高信噪比，同时，探针序列短也使得pcr过程中更容易被完全水解，pcr效率高，荧光信号释放充分。

技术特征：

1.一种检测支气管败血性波氏杆菌的lamp引物探针组，其特征在于，包括引物组f3-1、b3-1、fip-1、bip-1、lf-1、lb-1及探针p-1，所述引物组f3-1、b3-1、fip-1、bip-1、lf-1、lb-1的碱基序列分别如seq id no:2-7所示，所述探针p-1的碱基序列分别如seq id no:8所示。

2.根据权利要求1所述的检测支气管败血性波氏杆菌的lamp引物探针组，其特征在于，所述f3-1、b3-1、fip-1、bip-1、lf-1、lb-1及p-1的摩尔比为1：1：8：8：4：4：1。

3.根据权利要求1所述的检测支气管败血性波氏杆菌的lamp引物探针组，其特征在于，所述lamp引物探针组检测的靶基因为flaa基因的1140-1465bp段，其碱基序列如seq idno:1所示。

4.一种权利要求1至3任一项所述的检测支气管败血性波氏杆菌的lamp引物探针组在制备检测支气管败血性波氏杆菌的lamp试剂中的应用。

5.一种权利要求1至3任一项所述的检测支气管败血性波氏杆菌的lamp引物探针组在制备检测支气管败血性波氏杆菌的lamp试剂盒中的应用。

技术总结本发明提供一种检测支气管败血性波氏杆菌的LAMP引物探针组，包括引物组F3‑1、B3‑1、FIP‑1、BIP‑1、LF‑1、LB‑1及探针P‑1，所述引物组F3‑1、B3‑1、FIP‑1、BIP‑1、LF‑1、LB‑1的碱基序列分别如SEQ ID NO:2‑7所示，所述探针P‑1的碱基序列分别如SEQ ID NO:8所示。LAMP引物探针组可用于检测支气管败血性波氏杆菌，检测灵敏度高，特异性强。技术研发人员：王露,段雪昆受保护的技术使用者：厦门宝太生物科技股份有限公司技术研发日：技术公布日：2024/10/10