一种基于串联体异源表达制备XO抑制肽的方法

本发明涉及一种基于串联体异源表达制备xo抑制肽的方法，属于多肽的异源表达。

背景技术：

1、黄嘌呤氧化酶（xanthine oxidase，xo）被认为是降尿酸的重要靶点，因此，高效地制备一些天然的xo抑制肽逐渐成为降尿酸领域的研究热点。目前关于xo抑制肽定向制备的技术比较少，所以开发一种能定向且高效制备xo抑制肽的新技术仍是当务之急。近年来，大肠杆菌（e.coli）因其遗传背景清晰、表达水平高、稳定性好、适用性广，成为大规模生产蛋白质或多肽的理想宿主。然而，xo抑制肽作为小分子活性肽在微生物表达中易被降解或难表达，所以通过串联短肽构建小分子活性肽表达载体是解决该问题的有效途径。

技术实现思路

1、针对上述现有技术，本发明提供了一种基于串联体异源表达制备xo抑制肽的方法。

2、本发明是通过以下技术方案实现的：

3、一种基于串联体异源表达制备xo抑制肽的方法，包括以下步骤：

4、（1）重组表达载体的构建：将xo抑制肽的编码基因串联形成n倍串联体，得目的基因片段；然后将目的基因片段通过肠激酶位点与pet-30a（+）载体连接，得重组表达载体；

5、（2）重组菌株的构建：将上述构建的重组表达载体导入大肠杆菌，得表达目的基因的重组大肠杆菌；

6、（3）目的基因的表达：培养重组大肠杆菌并诱导表达目的基因，得发酵液；

7、（4）xo抑制肽的提取纯化：发酵液离心得菌体沉淀，菌体沉淀重悬后超声破碎，离心得粗蛋白液；粗蛋白液经镍柱亲和层析纯化，得重组蛋白；对重组蛋白进行肠激酶酶切和胰蛋白酶酶切，即得xo抑制肽。

8、进一步地，所述xo抑制肽为aeaqmwr或aeawmwr，其中，aeaqmwr记载在中国发明专利cn 115385986 a中；aeawmwr是对aeaqmwr进行优化而得到的，其xo抑制活性已得到实验验证。aeaqmwr的氨基酸序列如seq id no.1所示，aeawmwr的氨基酸序列如seq id no.2所示。

9、进一步地，所述n为2～15的整数，优选10。

10、本发明的基于串联体异源表达制备xo抑制肽的方法，首先串联xo抑制肽aeaqmwr或aeawmwr的编码基因作为目的基因，构建重组表达载体，然后在大肠杆菌中进行异源表达；最后对重组蛋白进行纯化和酶切，得到单体肽aeaqmwr或aeawmwr，单体肽aeaqmwr或aeawmwr具有预防高尿酸血症的潜在价值。本发明首次成功构建并表达了含有串联体xo抑制肽的表达载体，从而实现了xo抑制肽的定向制备，提高了xo抑制肽的制备效率，为定向获得新型生物活性肽提供了新的技术。

11、本发明使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义。

技术特征：

1.一种基于串联体异源表达制备xo抑制肽的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的基于串联体异源表达制备xo抑制肽的方法，其特征在于：所述xo抑制肽为aeaqmwr。

3.根据权利要求1所述的基于串联体异源表达制备xo抑制肽的方法，其特征在于：所述xo抑制肽为aeawmwr。

4.根据权利要求1所述的基于串联体异源表达制备xo抑制肽的方法，其特征在于：所述n为2～15的整数。

5.根据权利要求4所述的基于串联体异源表达制备xo抑制肽的方法，其特征在于：所述n为10。

技术总结本发明公开了一种基于串联体异源表达制备XO抑制肽的方法，包括以下步骤：（1）将XO抑制肽的编码基因串联形成n倍串联体，通过肠激酶位点与PET‑30a（+）载体连接，得重组表达载体；所述XO抑制肽为AEAQMWR或AEAWMWR；（2）将重组表达载体导入大肠杆菌，得重组大肠杆菌；（3）培养重组大肠杆菌并诱导表达目的基因，得发酵液；（4）发酵液离心得菌体沉淀，菌体沉淀重悬后超声破碎，离心得粗蛋白液；粗蛋白液经镍柱亲和层析纯化，得重组蛋白；对重组蛋白进行肠激酶酶切和胰蛋白酶酶切，即得XO抑制肽。本发明实现了XO抑制肽的定向制备，提高了XO抑制肽的制备效率。技术研发人员：姜宏,毛相朝,毛振杰,王永臻受保护的技术使用者：中国海洋大学技术研发日：技术公布日：2024/10/10