一种丹七药物制剂的特征图谱的检测方法和质量检测方法与流程

本发明涉及中药检测，具体涉及一种丹七药物制剂的特征图谱的检测方法和质量检测方法。

背景技术：

1、丹参为唇形科植物丹参salvia miltiorrhiza bge.的干燥根和根茎，始载于《神农本草经》，被列为上品。丹参具有活血祛瘀，通经止痛，清心除烦，凉血消痈的功效，丹参早有“一味丹参散，功同四物汤”的美誉，充分说明了丹参在活血祛瘀、通经止痛方面的作用。三七为五加科植物三七panax notoginseng(burk.)f.h.chen的干燥根和根茎，始载于《本草纲目》。具有散瘀止血，消肿定痛。作为“伤科要药”三七可以用于咯血、吐血、衄血、外伤出血等出血症，及胸腹刺痛、跌扑肿痛等症。

2、现代化学研究表明，丹参中主要含有脂溶性的二萜醌类成分(如丹参酮、隐丹参酮等)和水溶性的酚酸类(丹酚酸、原儿茶醛、丹参素钠等)成分，具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤等多种药理作用。五加科来源的三七主要含有丰富的皂苷类成分(三七皂苷r1、人参皂苷rg1、人参皂苷rb1、人参皂苷rd等)，现代药理学研究表明三七具有抗血栓、抗炎、抗氧化、心血管保护等药理作用。

3、中药的质量直接影响了产品的疗效，中药的质量控制环节是保证药品安全有效的最后一道关卡。2020版《中国药典》中关于丹七片的鉴别项下分别检测了三七中的指标成分包括了人参皂苷rg1、人参皂苷rb1及三七皂苷r1和丹参中的指标性成分丹酚酸b。含量测定项目下对人参皂苷rg1、人参皂苷rb1及三七皂苷r1进行了含量测定，并没有对丹参中的主要成分进行含量测定。

4、中药指纹图谱的出现，为中药质量标准的指定提供了多水平、全方位的质量保证，符合中医“整体观念”研究中药质量评价的思路。作为中药质量评价的重要手段，中药指纹图谱可以全方位提供中药的化学(生物)信息，可以从整体水平对中药进行质量评价，弥补当下仅将一种或几种成分作为中药鉴别、含量测定指标的局限性。

5、丹七片是将三七粉碎成细粉，丹参经水煮、滤过、浓缩、加入三七细粉及淀粉、糊精，压片，包衣制得中药片剂。具有活血化瘀，通脉止痛的功效。用于瘀血闭阻所致的胸痹心痛，眩晕头痛，经期腹痛。方中以丹参微寒，具有活血养血，化瘀通脉之功效；三七性温，具有活血止血，祛瘀定痛。二药合用，共奏活血化瘀，养血生新之功。可促进血行、扩张冠脉、调节血压、是治疗心脉瘀阻、胸痹绞痛的良药。同时也可用于头痛眩晕及妇女经期腹痛。现有的丹七片质量控制方法是通过显微鉴别处方中的三七特征，以及采用薄层色谱鉴别丹参中的特征成分丹酚酸b及三七中的代表性成分人参皂苷rg1、人参皂苷rb1及三七皂苷r1，且含量测定仅检测了人参皂苷rg1、人参皂苷rb1及三七皂苷r1。因而，目前对丹七片检测或鉴别获得的信息少，鉴别出的成分少，不能从整体上检测和全面的控制其质量。

技术实现思路

1、因此，本发明要解决的技术问题在于克服现有技术中的丹七片检测或鉴别不能从整体上检测和全面控制其质量的缺陷，从而提供一种丹七药物制剂的特征图谱的检测方法和质量检测方法，可以保证丹七片的质量可靠且稳定，能从整体、全面有效地对丹七片进行质量控制。

2、为此，本发明提供了如下的技术方案：

3、一种丹七药物制剂的特征图谱的检测方法，包括采用高效液相色谱法检测，色谱条件为：

4、以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相a，以0.05-0.2％(v/v)磷酸水溶液为流动相b，按照如下梯度洗脱的程序为：

5、0～10min，流动相a和流动相b的体积比为7％：93％→18％：82％；

6、10～50min，流动相a和流动相b的体积比为18％：82％→22％：78％；

7、50～60min，流动相a和流动相b的体积比为22％：78％→30％：70％；

8、60～75min，流动相a和流动相b的体积比为30％：70％→45％：55％；

9、75～80min，流动相a和流动相b的体积比为45％：55％→70％：30％；

10、80～85min，流动相a和流动相b的体积比为70％：30％→7％：93％。

11、可选的，所述色谱条件包括如下条件中的至少一项：

12、(1)、流动相b中磷酸浓度为0.1％；

13、(2)、流动相流速为0.8-1.2ml/min，优选地，流动相流速为1ml/min；

14、(3)、柱温箱温度为30-40℃，优选地，柱温箱温度为35℃；

15、(4)、进样体积为5-20μl，优选地，进样体积为10μl；

16、(5)、检测波长为190-220nm，优选地，检测波长为200nm；

17、(6)、色谱柱的柱长为100～300mm，内径为2.1～5.0mm，粒径为1.8～10μm，优选地，色谱柱的柱长为250mm，内径为4.6mm，粒径为5μm。

18、可选的，还包括供试品溶液的制备方法，包括：

19、向供试品中加入提取溶剂进行提取，滤过，取续滤液，得到供试品溶液。

20、可选的，所述提取溶剂为水、甲醇和乙醇中的至少一种；

21、优选地，所述提取溶剂为30-70％(v/v)甲醇水溶液和/或30-70％(v/v)乙醇水溶液；

22、优选地，所述供试品的质量与所用提取溶剂体积的料液比为(1-4)：(25-100)，所述料液比的单位为g/ml；

23、优选地，所述提取步骤采用超声提取，超声功率为300-600w，频率为20-60khz，提取时间为10-60min。

24、可选的，还包括参照物溶液，所述参照物溶液包括对照品溶液和对照药材溶液；

25、优选地，对照品溶液的制备方法，对照品包括三七皂苷r1、人参皂苷rg1、人参皂苷rb1、人参皂苷rd、人参皂苷re、迷迭香酸、紫草酸、丹参素钠、丹酚酸e、丹酚酸b、原儿茶醛中的至少一种；

26、优选地，每1ml对照品溶液中含三七皂苷r1 150～250μg；和/或，

27、每1ml对照品溶液中含人参皂苷rg1 100～200μg；和/或，

28、每1ml对照品溶液中含人参皂苷rb 500～1500μg；和/或，

29、每1ml对照品溶液中含人参皂苷rd 50～150μg；和/或，

30、每1ml对照品溶液中含人参皂苷re 50～150μg；和/或，

31、每1ml对照品溶液中含迷迭香酸2～20μg；和/或，

32、每1ml对照品溶液中含紫草酸2～20μg；和/或，

33、每1ml对照品溶液中含丹参素钠10～50μg；和/或，

34、每1ml对照品溶液中含丹酚酸e10～50μg；和/或，

35、每1ml对照品溶液中含丹酚酸b 50～200μg；和/或，

36、每1ml对照品溶液中含原儿茶醛2～20μg；

37、优选地，还包括对照药材溶液的制备方法，向对照药材中加入提取溶剂进行提取，滤过，取续滤液，得到供试品溶液；

38、优选地，所述对照药材溶液的制备方法中，所述提取溶剂为水、甲醇和乙醇中的至少一种；

39、优选地，所述对照药材溶液的制备方法中，所述供试品的质量与所用提取溶剂体积的料液比为(1-4)：(25-100)，所述料液比的单位为g/ml；

40、优选地，所述对照药材溶液的制备方法中，所述提取步骤采用超声提取，超声功率为300-600w，频率为20-60khz，提取时间为10-60min

41、优选地，所述对照药材为丹参饮片和/或三七粉。

42、一种丹七药物制剂的含量测定方法，包括：

43、取供试品溶液和参照物溶液，分别采用权利要求1-5任一项所述的丹七药物制剂的特征图谱的检测方法中的高效液相色谱法进行检测。

44、一种丹七药物制剂的质量检测方法，包括：

45、按照所述的丹七药物制剂的特征图谱的检测方法获得供试品的特征图谱，并采用该特征图谱与对照指纹图谱进行比对的步骤；

46、所述对照指纹图谱为使用至少一批丹七药物制剂按照所述的丹七药物制剂的特征图谱的检测方法获得的特征图谱拟合得到。

47、可选的，所述对照指纹图谱包括19个特征峰：1号峰，2号峰，3号峰，4号峰，5号峰，6号峰，7号峰，8号峰，9号峰，10号峰，11号峰，12号峰，13号峰，14号峰，15号峰，16号峰，17号峰，18号峰和19号峰；

48、以12号峰为参照物峰(s)，1号峰，2号峰，3号峰，4号峰，5号峰，6号峰，7号峰，8号峰，9号峰，10号峰，11号峰，13号峰，14号峰，15号峰，16号峰，17号峰，18号峰，19号峰的相对保留时间的规定值分别为0.155、0.170、0.225、0.254、0.345、0.557、0.571、0.692、0.735、0.804、0.906、1.039、1.088、1.114、1.233、1.640、1.741、1.779；

49、峰1～11、峰13～19与峰s的相对保留时间在规定值±10％范围之内。

50、可选的，所述1号峰为丹参素钠，4号峰为原儿茶醛，9号峰为迷迭香酸，10号峰为紫草酸，11号峰为三七皂苷r1，12号峰为丹酚酸b，14号峰为人参皂苷rg1，15号峰为人参皂苷re，16号峰为丹酚酸e，17号峰为人参皂苷rb1，18号峰为人参皂苷rd。

51、所述的丹七药物制剂的特征图谱的检测方法、所述的丹七药物制剂的含量测定方法、所述的丹七药物制剂的质量检测方法，其特征在于，所述丹七药物制剂包括丹七片、丹七胶囊或丹七软胶囊。

52、本发明技术方案，具有如下优点：

53、1.本发明提供的一种丹七药物制剂的特征图谱的检测方法，包括采用高效液相色谱法检测，色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相a，以0.05-0.2％(v/v)磷酸水溶液为流动相b，按照如下梯度洗脱的程序为：0～10min，流动相a和流动相b的体积比为7％：93％→18％：82％；10～50min，流动相a和流动相b的体积比为18％：82％→22％：78％；50～60min，流动相a和流动相b的体积比为22％：78％→30％：70％；60～75min，流动相a和流动相b的体积比为30％：70％→45％：55％；75～80min，流动相a和流动相b的体积比为45％：55％→70％：30％；80～85min，流动相a和流动相b的体积比为70％：30％→7％：93％；采用上述的色谱条件对制备的待测样品进行特征图谱采集、相似度评价以及特征峰指认以完成丹七片的质量控制。该方法具有方法简便、稳定性和重复性好、精密度高等优点，可以完善处方中含有丹参、三七的复方制剂丹七片质量控制方法，可同时测定丹参素钠、原儿茶醛、迷迭香酸、紫草酸、三七皂苷r1、丹酚酸b、人参皂苷rg1、人参皂苷re、丹酚酸e、人参皂苷rb1、人参皂苷rd的含量，保证丹七片的质量可靠且稳定，能从整体、全面有效地对丹七片进行质量控制，从而保证丹七片的安全、有效、质量可控。

54、进一步的，采用上述方法检测丹七片的特征图谱，色谱条件稳定，色谱图基线平稳，共有色谱峰分布均衡，峰型好，峰分离度佳。