抗TIM3单克隆抗体和嵌合抗原受体的制作方法

本发明的领域是靶特异性结合分子，特别是涉及对t细胞免疫球蛋白粘蛋白受体3(tim3)具有结合特异性的抗体和嵌合抗原受体及其衍生物。

背景技术：

1、背景描述包括可用于理解本发明的信息。并不承认本文提供的任何信息是现有技术或与当前要求保护的发明相关，也不承认具体地或隐含地引用的任何出版物是现有技术。

2、本文中的所有出版物和专利申请都通过引用并入，其程度如同每个单独的出版物或专利申请被具体地且单独地指明通过引用并入一样。在并入的参考文献中的术语的定义或用法与本文提供的该术语的定义不一致或相反时，适用本文提供的该术语的定义，而不适用该术语在该参考文献中的定义。

3、t细胞免疫球蛋白粘蛋白受体3(tim3)是参与调节先天和适应性免疫应答并且通常已知发挥抑制功能的细胞表面受体。然而，一些报道也提出了刺激功能，这些刺激功能可能受细胞环境和/或相应配体的影响。最典型地，tim3调控巨噬细胞激活、抑制t辅助1型淋巴细胞(th1)介导的自身免疫和同种免疫应答，并促进免疫耐受。tim3功能也受到其表达所处的细胞的类型的强烈影响。例如，在cd8+细胞中，tim3特别是通过阻断nf-κb和nfat启动子活性而减弱tcr诱导的信号传导，从而导致il-2分泌的损失。在treg细胞上表达的tim3可以抑制th17细胞应答。在树突细胞(dc)上表达的tim3正调控先天免疫应答，并且与toll样受体协同促进tnf-α的分泌。另一方面，在肿瘤浸润性dc中，tim3通过与hmgb1相互作用并干扰核酸感应(nucleic acid-sensing)和核酸向核内体的运输来抑制核酸介导的先天免疫应答。

4、对tim3作用的日益增加的认识导致了各种tim3靶向分子的开发。例如，wo 2019/140229和wo 2016/144803传授了特异性抗tim3抗体，并且wo 2019143607 a1中描述了使用抗tim3抗体的所选治疗方法。在其他实例中，如ep 3585403中所述，嵌合抗原受体(car)多肽在免疫效应细胞诸如t细胞或自然杀伤(nk)细胞中表达，并用于过继性细胞转移以靶向和杀伤表达tim3的癌症。进一步的研究报道了抗tim3抗体促进t细胞ifn-γ介导的抗肿瘤免疫并抑制已建立的肿瘤，如在cancer res.[癌症研究]2011年5月15日；71(10):3540-51；doi:10.1158/0008-5472中所讨论，并且在cancer res.[癌症研究]2011年11月1日；71(21):6567-71.doi:10.1158/0008-547中讨论了tim3靶向的抗肿瘤免疫疗法的前景。虽然此类组合物和方法有利地开启了至少一些tim3特异性治疗方法，但是tim3结合剂的数量和亲和力相对有限。

5、因此，即使本领域已知各种tim3靶向系统和方法，但所有或几乎所有的这些系统和方法都存在若干缺点。因此，仍然需要用于新的和改进的tim3特异性治疗和诊断分子的组合物和方法。

技术实现思路

1、本发明的主题涉及tim3特异性治疗和诊断分子的各种组合物和方法以及它们在个体的诊断和治疗中的用途。

2、在本发明主题的一个方面，本发明人考虑了分离的抗体或其片段，其中该抗体或其片段结合至t细胞免疫球蛋白粘蛋白受体3(tim3)并且包含可变重链(vh)结构域和可变轻链(vl)结构域，其中该vh结构域选自由seq id no:1、seq id no:3、seq id no:5、seq idno:7、seq id no:9和seq id no:11组成的组，并且其中该vl结构域选自由seq id no:2、seq id no:4、seq id no:6、seq id no:8、seq id no:10和seq id no:12组成的组。

3、在一个实施例中，该抗体或片段包含vh64-6(seq id no:1)和vl64-6(seq id no:2)，任选地通过接头偶联在一起以形成scfv。在另一个实施例中，该抗体或片段包含vh64-15(seq id no:3)和vl64-15(seq id no:4)，任选地通过接头偶联在一起形成scfv。在又一个实施例中，该抗体或片段包含vh64-31(seq id no:5)和vl64-31(seq id no:6)，任选地通过接头偶联在一起形成scfv。在再一个实施例中，该抗体或片段包含vh64-32(seq idno:7)和vl64-32(seq id no:8)，任选地通过接头偶联在一起形成scfv。在还一个实施例中，该抗体或片段包含vh64-39(seq id no:9)和vl64-39(seq id no:10)，任选地通过接头偶联在一起形成scfv。在又一个实施例中，该抗体或片段包含vh66-6(seq id no:11)和vl66-6(seq id no:12)，任选地通过接头偶联在一起以形成scfv。

4、最典型地，但不是必须地，抗体是igg1抗体或scfv，和/或可以进一步包含治疗剂(例如，化疗药物、放射性核素，或免疫刺激剂诸如细胞因子、细胞因子类似物、趋化因子或检查点抑制剂)。替代性地，或另外，该抗体或片段也可以包含可检测标记。

5、在其他实施例中，本发明人还考虑了包含本文提供的抗体或片段的嵌合蛋白。例如，该嵌合蛋白可以形成嵌合抗原受体(car)，其可以具有cd3zeta(cd3ζ)或fc受体ε(fcεriγ)信号传导结构域，或者可以具有cd28信号传导结构域、4-1bb信号传导结构域和cd3zeta(cd3ζ)信号传导结构域中的一种或多种。最典型地，该car可以具有cd8铰链结构域和cd28跨膜结构域。将容易理解的是，该car将是在nk细胞或细胞毒性t细胞的表面表达并在该表面上呈递的重组car。在其他实例中，该嵌合蛋白可以形成双特异性融合蛋白(例如，包含igg fc部分，并且任选地进一步包含il15α受体部分、il15部分和il15超激动剂部分中的至少一种)或可以形成双特异性杀伤细胞衔接子(bike)或三特异性杀伤细胞衔接子(trike)。

6、因此，本发明人还考虑了编码本文提供的分离的抗体或片段或嵌合蛋白的重组核酸。例如，该核酸可以是表达载体的一部分或重组病毒基因组的一部分或可以呈线性dna的形式。另一方面，该重组核酸也可以是rna。

7、从不同的角度看，本发明人还考虑了一种药物组合物，该药物组合物包含与如本文所提供的分离的抗体或片段或嵌合蛋白组合的药学上可接受的载剂。类似地，本发明人还考虑了一种药物组合物，该药物组合物包含与如本文所提供的重组核酸组合的药学上可接受的载剂。

8、在本发明主题的另一方面，本发明人还提供了一种治疗个体的方法，其中将本文提供的药物组合物施用给该个体，典型地由此降低该个体的免疫抑制。最典型地，用癌症疫苗和/或检查点抑制剂治疗该个体。因此，本发明人还考虑了如本文所提供的药物组合物在治疗个体癌症中的用途。

9、根据优选实施例的以下详细描述，本发明主题的各种目标、特征、方面和优点将变得更显而易见。