一种从脱壳亚麻籽中提取活性蛋白的方法与流程

本发明属于植物活性蛋白提取领域，具体公开了一种从脱壳亚麻籽中提取活性蛋白的方法。

背景技术：

1、亚麻籽活性蛋白具有多种用途，这些用途主要基于其丰富的营养成分和独特的生物活性。1.优质蛋白质来源：亚麻籽活性蛋白是一种优质的植物性蛋白质来源，含有人体所需的全部必需氨基酸，且氨基酸结构优于大豆蛋白。这使得它成为素食者、运动员及需要高蛋白饮食人群的理想选择。2.提高免疫力：摄入优质的蛋白质能够显著提高人体免疫力，增强身体抵抗力，预防疾病的发生。3.抗氧化作用：亚麻籽中的木酚素等活性成分具有很强的抗氧化能力，可以清除体内自由基，延缓衰老过程，保护细胞免受氧化损伤。4.心血管健康：亚麻籽活性蛋白及其所含的木酚素等成分有助于降低胆固醇水平，抑制动脉粥样硬化，从而维护心血管系统的健康。5.脑功能提升：亚麻籽油中富含的α-亚麻酸是构成大脑细胞膜的重要成分之一，对婴幼儿的智力发育、青少年提高记忆力以及中老年健脑具有重要作用。6.抗癌作用：研究表明，亚麻籽中的某些成分如木酚素具有抗肿瘤活性，尤其对抗前列腺癌、乳腺癌和结肠癌等有显著效果。7.调节雌激素水平：木酚素作为一种植物雌激素，可以帮助女性调节体内雌激素的平衡，缓解因激素水平变化引起的不适症状。布地奈德是一种具有抗炎和抗过敏作用的吸入性糖皮质激素类药物，能够治疗过敏性鼻炎，但是使用布地奈德后可能会出现轻度喉部刺激、咳嗽、声音嘶哑等症状。长期使用还可能导致口咽部念珠菌感染，如何降低布地奈德的使用剂量，降低布地奈德的副作用，也是目前的热门研究项目，目前尚无将亚麻籽活性蛋白和布地奈德合用的报道。

技术实现思路

1、为了解决上述问题，本发明公开了一种从脱壳亚麻籽中提取活性蛋白的方法，使用独特的工艺提取脱壳亚麻籽蛋白中50-70kd的活性蛋白，上述的活性蛋白具有提高低浓度布地奈德的抗过敏效果，作为一种活性添加剂，可以提高布地奈德的治疗效果，降低布的奈德含量，降低摄入量，降低布地奈德的副作用。

2、本发明的技术方案如下：

3、一种从脱壳亚麻籽中提取活性蛋白的方法，包括以下步骤：

4、1)原料选择：选用新鲜、无霉变的带壳亚麻籽；

5、2)粒径筛分：根据粒径大小对带壳亚麻籽进行分级筛选预处理，以便后续脱壳步骤更均匀和高效；

6、3)清洗去杂：对筛选后的某一分级的带壳亚麻籽进行清洗；

7、4)微波烘干；使用分段微波烘干，使得带壳亚麻籽处于适合脱壳状态；

8、5)脱壳处理：使用脱壳机进行撞击脱壳；

9、6)分离脱壳亚麻籽：依据脱壳亚麻籽的粒径和亚麻籽壳的粒径的差别，调节筛网筛孔大小，尽量分离得到较纯的脱壳亚麻籽；

10、7)色选：使用色选机，将脱壳亚麻籽中的杂质和不良品筛除，得到亚麻籽原料；

11、8)预处理：将亚麻籽原料进行清洗，并干燥；

12、9)冷榨除油：将预处理之后的亚麻籽原料进行冷榨，分离亚麻籽油和亚麻籽饼；

13、10)超临界萃取除油：对亚麻籽饼进行干燥，并进一步粉碎，过100-200目筛，得到亚麻籽粉，将亚麻籽粉加入超临界萃取装置中使用超临界流体进行萃取其中的油脂成分，得到除油后的亚麻籽粉；

14、11)酶解去杂：将亚麻籽粉溶于水中，加入纤维素酶、果胶酶和淀粉酶进行酶解，超声酶解，得到酶解液；

15、12)离心：15000-30000g离心，取得沉淀；

16、13)重溶：将沉淀干燥后，再次溶解在去离子水中，使用ph调节剂调节ph4.2-5.5之间，20000-30000g离心收集沉淀；

17、14)纯化：将沉淀重溶，使用分子筛，截取其中分子量50-70kd分子量的蛋白溶液；

18、15)冻干：将步骤14)得到的特定分子量范围的蛋白溶液浓缩后冻干，得到活性蛋白。

19、进一步的，上述一种从脱壳亚麻籽中提取活性蛋白的方法，所述步骤4)微波烘干，包括以下步骤：

20、第一阶段：控制微波功率，使得温度45-55℃，保持5-10min；

21、第二阶段：控制微波功率，使得温度55-65℃，保持3-6min；

22、第三阶段：控制微波功率，使得温度80-90℃，保持2-5min；

23、第四阶段：循环第一到第三阶段2到3次，完成烘干步骤。

24、进一步的，上述一种从脱壳亚麻籽中提取活性蛋白的方法，所述步骤8)预处理中，干燥使得亚麻籽原料的含水率在10-18％之间。

25、进一步的，上述一种从脱壳亚麻籽中提取活性蛋白的方法，所述步骤10)超临界萃取除油中，所述干燥使得亚麻籽饼含水率在6-9％之间。

26、进一步的，上述一种从脱壳亚麻籽中提取活性蛋白的方法，所述步骤10)超临界萃取除油中，使用超声波萃取装置sft-110xw，使用二氧化碳为超临界流体，设定萃取温度32-36℃、萃取压力30-40mpa；完成萃取后，逐渐降低系统内的压力，得到除油后的亚麻籽粉。

27、进一步的，上述一种从脱壳亚麻籽中提取活性蛋白的方法，所述11)酶解去杂中，按1g亚麻籽粉溶于10-20ml水中的比例投料，并使得纤维素酶的浓度为100-200u/ml、果胶酶150-250u/ml和淀粉酶200-400u/ml,酶解温度为38-42℃，酶解时同步进行超声，超声功率100w/l，超声频率25-40khz。

28、进一步的，上述一种从脱壳亚麻籽中提取活性蛋白的方法，所述步骤14)纯化中，所述的分子筛的型号为sephadex g-75，上样的粗蛋白浓度为0.1-0.2g/ml，流动相为pbs缓冲液。

29、进一步的，上述一种从脱壳亚麻籽中提取活性蛋白的方法，所述步骤15)冻干中，冻干程序如下：

30、a预冻：物料摊铺开进行预冻，摊铺厚度在2-4cm，在常压下进行快速预冻，预冻时间60-80min，预冻温度-35～-55℃；

31、b冷冻干燥：冻干程序如下：

32、a：-55～-65℃，压强550-750pa，冻干45-75min；

33、b：-65～-75℃，压强120-220pa,冻干100-140min；

34、c：-75～-85℃，压强70-120pa,冻干10-20min；

35、d：恢复到常温常压，干燥至含水量低于5％，得到活性蛋白。

36、本发明还公开了一种活性蛋白，由上述的方法制备得到。

37、本发明还公开了活性蛋白在制备抗过敏喷雾中的用途，所述抗过敏喷雾中含有布地奈德和活性蛋白，所述布地奈德浓度为0.32mg/ml，所述活性蛋白浓度为0.1-0.4mg/ml。

38、相比现有技术，本发明具有如下有益效果：

39、1.原料选择与预处理优化：通过选用新鲜、无霉变的带壳亚麻籽，并进行粒径筛分和清洗去杂，确保了原料的优质性和后续处理的均匀性。

40、2.微波烘干技术：采用分段微波烘干方法，有效控制了温度和时间，使得带壳亚麻籽达到适合脱壳的状态，提高了脱壳效率和成品质量。

41、3.高效脱壳与分离：使用脱壳机进行撞击脱壳，并通过调节筛网筛孔大小实现较纯的脱壳亚麻籽分离，减少了杂质对最终产品的影响。

42、4.色选与深度清洁：利用色选机进一步去除杂质和不良品，再通过预处理中的清洗和干燥步骤，确保亚麻籽原料的洁净度和适宜的含水率，为后续提取过程打下良好基础。

43、5.综合除油技术：结合冷榨和超临界萃取两种方法，有效去除了亚麻籽中的油脂成分，特别是超临界萃取技术的应用，能够在较低温度下高效提取油脂，保护了活性蛋白的生物活性和稳定性。

44、6.酶解去杂与纯化：通过多酶协同作用进行酶解处理，有效去除了亚麻籽粉中的纤维素、果胶和淀粉等杂质，再通过分子筛纯化得到特定分子量范围的活性蛋白溶液，提高了产品的纯度。

45、7.冻干工艺优化：采用优化的冻干程序，确保了活性蛋白在低温低压下快速干燥至含水量低于5％，既保留了蛋白的生物活性又延长了其保质期。

46、8.高价值应用潜力：制备得到的活性蛋白具有多种潜在应用价值，特别是在抗过敏喷雾中的应用，通过与布地奈德等药物的联合使用，能够发挥更好的治疗效果，为相关药物的开发提供了新的思路和方法。