腹腔灌洗液循环肿瘤细胞与循环肿瘤DNA在预测胃癌根治术后异时性腹膜转移中的应用

本发明涉及生物，具体地说，是基于腹腔灌洗液循环肿瘤细胞与循环肿瘤dna的检测以及在预测胃癌根治术后异时性腹膜转移风险中的应用。

背景技术：

1、腹膜转移（peritoneal metastasis，pm）是多种癌症末期常见的转移方式之一，不同类型的癌症其腹膜转移发生率会有所不同。无论起源于何种组织，腹膜内肿瘤理论上都可以发生腹膜转移。

2、根据“种子-土壤”假说，腹膜转移是一个多步骤的过程，包括癌细胞从原发肿瘤中分离、生存于腹腔微环境、黏附于腹膜间皮细胞并浸润生长等。而癌细胞原发灶穿透浆膜层进入腹腔形成腹腔游离癌细胞——“种子”是腹膜转移发生的病理学基础。因此，如何在癌症患者中识别出脱落、游离的腹腔癌细胞已经成为临床腹膜转移防治决策中的核心问题。

3、腹膜转移通常是癌症晚期的表现，早期检出率并不高。目前腹膜转移的筛查手段包括但不限于影像学检查（ct/mr/pet-ct/b型超声）、血液肿瘤标志物检测、腹水或腹腔灌洗液细胞学检查等。一旦通过影像学手段确诊腹膜转移，患者的预期生存期短、预后极差。因此预防腹膜转移的关键是早期发现和治疗原发性癌症，以及密切监测高风险患者。

4、胃癌（gastric caner，gc）发病率位居全球第五，死亡率排名全球第四。腹膜转移是胃癌患者死亡的重要原因之一。约10%-30%的胃癌患者在初始诊断时已发现存在腹膜转移，而超过一半的ii期-iii期胃癌患者会在根治性手术后的5年内发生腹膜转移。并且，随着腹膜转移病灶分布范围的扩大，患者生存率随之下降。一项针对胃癌腹膜转移患者预后的研究结果显示，腹膜散播病灶仅局限在横结肠上方以及在横结肠下方远端腹膜有数个结节的患者2年生存率分别为21%和8%，而在远端腹膜发现大量转移灶的患者2年生存率仅4%（参考文献：yonemura y, bandou e, kawamura t, et al. quantitative prognosticindicators of peritoneal dissemination of gastric cancer[j]. eur j surgoncol, 2006, 32(6):602-6.）。腹膜转移也是导致胃癌患者死亡的首要原因。因此，积极开展胃癌腹膜转移的预防与治疗，无疑有助于提高我国胃癌的整体治疗水平。腹膜转移是一个多步骤的过程，包括癌细胞从原发肿瘤中分离、生存于腹腔微环境、黏附于腹膜间皮细胞并浸润生长等（参见文献kanda m, kodera y. molecular mechanisms of peritonealdissemination in gastric cancer. world j gastroenterol. 2016 aug 14;22(30):6829-40. doi: 10.3748/wjg.v22.i30.6829. pmid: 27570420; pmcid: pmc4974582.）。因而，如何在进展期胃癌患者中识别腹腔内的微小转移，并延缓其发生发展成为目前胃外科领域亟待解决的问题。

5、目前腹膜转移的筛查手段包括但不限于影像学检查（ct/mr/pet-ct/b型超声）、血液肿瘤标志物检测、腹水或腹腔灌洗液细胞学检查等。一旦通过影像学手段确诊腹膜转移，患者的预期生存期短、预后极差。因此预防腹膜转移的关键是早期发现和治疗原发性癌症，以及密切监测高风险患者。腹腔灌洗液或腹水的细胞学检查作为诊断腹腔内游离肿瘤细胞的金标准，其阳性率与诸多因素有关，包括术中是否留取足够腹腔灌洗液量、样本送检是否及时、脱落细胞形态不典型等诸多因素的影响，最终导致检出阳性率较低。一项最终纳入19项研究的meta分析显示，胃癌患者腹腔灌洗液中检出游离癌细胞的频率为6.25-54.4%，且受到肿瘤浸润深度、分化程度和化疗的使用多方面的影响（参考文献：kołomańska mm, głuszek s. free cancer cells in gastric cancer - methods of detection, clinicaland prognostic importance (meta-analysis)[m]. contemp oncol (pozn), 2020, 24(1):67-74.）。在细胞学检查阳性率较低、隐匿型腹膜转移诊断困难的情况下，能够早期诊断腹膜转移新的分子标志物与检测技术亟待验证。

6、循环肿瘤dna（circulating tumor dna，ctdna）是指肿瘤细胞在生长和分裂过程中释放到血液循环中的dna片段。这些dna片段携带有肿瘤细胞的遗传信息，包括基因突变、拷贝数变异、基因融合等。相较于正常细胞释放的dna，在肿瘤细胞释放的ctdna中可能含有肿瘤相关的特定变异。

7、通过分析ctdna中的基因突变、拷贝数变异、基因融合等信息，可以了解肿瘤的遗传变异情况、肿瘤进展情况、耐药性情况等，为肿瘤诊断、监测治疗效果和预后评估提供重要依据。在肿瘤早期筛查、个体化治疗、监测疗效、预测复发等方面具有广泛的应用前景。

8、ctdna在细胞外环境中的水平通常较低，特别是在病灶限制在局部的患者中，并且在血浆中37℃条件下蛋白结合dna与裸dna的半衰期为26.8-161.2min，这种短半衰期的特征使其可以实时动态监测患者的肿瘤负荷，但也要求ctdna的检出需要高度复杂的检测和定量技术。

9、在血液中对ctdna进行检测的研究已经十分广泛，包括在筛查癌症早期、检测微小残留病灶（mininal residual disease，mrd）以及在晚期疾病治疗指导和检测中的应用。然而，ctdna也可以从非血液来源获得，包括胸水、腹水、尿液以及脑脊液等。在血液中大量来自于白细胞的长度约140-170bp的无细胞dna（cell-free dna，cfdna）会成为检测ctdna时的背景噪声，而非血液样本中克隆造血的相对缺乏使得ctdna有相对更高的浓度和变异等位基因频率，因而可以成为血液ctdna检测结果的补充条件。wo 2023/130670 al公开了一种血清中提取游离dna（cell-free dna，cfdna）并测序建库，进行癌种的分类预测方法。

10、腹腔灌洗液中的生物标志物与腹膜转移的关系可能较血液来说更为密切。van'terve i等在2021年使用ddpcr评估了20例结直肠癌伴腹膜转移患者血浆以及腹腔灌洗液中的肿瘤ctdna，结果显示腹腔灌洗液中的ctdna水平高于血浆（p＜0.0001），因而血浆ctdna可能并不是检测结直肠癌伴腹膜转移的敏感标志物。从腹膜转移的发生机制上看，其特点是通过原发肿瘤直接向腹膜方向进行渗透或是手术造成的医源性散播，另一方面，腹膜-血浆屏障可能会限制cfdna从腹膜释放到体循环中，这可能可以解释腹腔灌洗液中的更高水平ctdna（参见文献van't erve i, rovers kp, constantinides a, et al. detectionof tumor-derived cell-free dna from colorectal cancer peritoneal metastasesin plasma and peritoneal fluid[j]. j pathol clin res, 2021, 7(3):203-208.hasovits c, clarke s. pharmacokinetics and pharmacodynamics ofintraperitoneal cancer chemotherapeutics[j]. clin pharmacokinet, 2012, 51(4):203-24.）。

11、下一代测序（next generation sequencing，ngs）是一种快速、准确、并且高效的dna或rna测序技术，也称为深度测序或高通量测序（high-throughput sequencing）。它通过平行测序数百万到数十亿个dna或rna片段，可以在较短的时间内获取大量的基因组或转录组信息。高通量测序的优势包括高通量性，能够同时测序大量样本或片段，提高测序效率，大大缩短测序周期；高准确性，相较于传统测序技术，高通量测序具有更高的准确性和分辨率；多样性，可用于测序不同长度的dna或rna片段，适用于各种研究领域。

12、通过高通量测序技术快速获取大量基因组信息，揭示基因组结构、功能和调控机制，促进疾病诊断和治疗研究的进展。

13、基于ngs的组织先验（tumor-informed）ctdna检测是一种液体活检方法，利用肿瘤组织样本ngs测序分子特征作为先验信息，精准匹配腹腔灌洗液或腹水中样本中的ctdna数据，从而提高循环腹腔灌洗液或腹水ctdna检测的准确性和临床应用的可靠性。组织先验的ctdna检测的主要特点包括：利用肿瘤组织信息，通过对肿瘤组织样本进行基因组学、转录组学等分子分析，获取肿瘤的遗传特征、突变信息等，建立肿瘤的分子特征图谱。根据该分子特征图谱，与腹腔灌洗液或腹水中的ctdna数据结合分析，可以更准确地识别和解读ctdna中的肿瘤相关变异。

14、通过组织先验的ctdna检测，可以连续监测腹腔灌洗液或腹水中ctdna中的变异情况，实时了解腹腔内肿瘤的发展状态、治疗效果和复发风险，指导个体化治疗策略，选择更有效的靶向治疗药物，提高治疗效果和生存率。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种腹腔灌洗液循环肿瘤细胞与腹腔灌洗液循环肿瘤dna的联合检测以及在预测胃癌根治术后异时性腹膜转移风险中的应用。

2、本发明将目前常用于血浆的基于ngs的ctdna检测技术进行改进后用于腹腔灌洗液或腹水中，以期在细胞学检查阳性率较低、隐匿型腹膜转移诊断困难的情况下，实现恶性实体肿瘤中隐匿性腹膜转移的早期筛查。进而，本发明将腹腔灌洗液循环肿瘤dna的检测组合上腹腔灌洗液循环肿瘤细胞（ctc）检测，使胃癌根治术后异时性腹膜转移风险预测更加精准。

3、本发明的第一方面，提供检测腹腔灌洗液循环肿瘤细胞的试剂和检测腹腔灌洗液循环肿瘤dna含量的试剂组合在制备预测胃癌根治术后异时性腹膜转移风险的试剂盒中的应用。

4、所述的胃癌根治术后异时性腹膜转移，指腹膜转移灶在初次诊断胃癌后/原发灶治疗后出现，而不是同时或在原发灶诊断时发现。

5、所述的试剂包括：基于细胞学检测对腹腔灌洗液循环肿瘤细胞进行检测的试剂，和基于肿瘤组织二代测序方法对腹腔灌洗液中循环肿瘤dna含量进行检测的试剂。

6、所述的基于细胞学检测对腹腔灌洗液循环肿瘤细胞进行检测的方法，为本领域常用方法；所述的基于肿瘤组织二代测序方法对腹腔灌洗液循环肿瘤dna含量进行检测的方法，包括以下步骤：

7、a）腹腔灌洗液离心，分离上清；

8、b）腹腔灌洗液中循环肿瘤dna提取：在上清中加入20mg/ml的蛋白酶k、20%sds，混匀，50-70℃孵育10-30min；加入dna结合液和磁珠，使循环肿瘤dna与磁珠充分结合；离心、静置、去除上清液；加入dna洗涤液，混匀、离心、静置、去除上清液；将磁珠用70-90%乙醇漂洗；加入dna洗脱液，使游离dna完全释放；离心、静置、收集上清液，-20℃±5℃保存；

9、c）建库、捕获和测序

10、对腹腔灌洗液ctdna样本进行文库构建，目标区域的捕获，杂交，洗脱，捕获完成进行测序；

11、d）ctdna检测：

12、使用软件进行变异识别，肿瘤组织中筛选基因突变，采用了组织先验的mrd检测方法腹腔灌洗液筛选基因突变，在定义样本mrd状态时，通过多变异联合置信概率的方法对样本水平的差异显著性进行矫正。

13、上述步骤a）和步骤b）为 对腹腔灌洗液循环肿瘤dna进行预处理的步骤：腹腔灌洗液离心，分离上清；在上清中加入20mg/ml的蛋白酶k、20%sds，混匀，50-70℃孵育10-30min；加入dna结合液和磁珠，使循环肿瘤dna与磁珠充分结合；离心、静置、去除上清液；加入dna洗涤液，混匀、离心、静置、去除上清液；将磁珠用70-90%乙醇漂洗；加入dna洗脱液，使游离dna完全释放；离心、静置、收集上清液，-20℃±5℃保存；

14、进一步地，所述的检测腹腔灌洗液ctdna含量的试剂通过对腹腔灌洗液ctdna的定量检测结果进行对照、分析，预测胃癌根治术后异时性腹膜转移风险。根据腹腔灌洗液中ctdna达到一定阈值水平判断患者是否出现胃癌根治术后异时性腹膜转移。

15、所述的ctdna定量检测方法可参考现有技术中血浆或其他体液样本中cfdna的定量检测方法，以获得ctdna定量检测结果即可。

16、进一步地，所述的腹腔灌洗液为术中或非手术期间使用0.9%生理盐水250ml对腹腔进行灌洗后获得的腹腔灌洗液。

17、所述采集腹腔灌洗的方法：术中使用0.9%生理盐水250ml对腹腔进行灌洗后吸出；在非手术期间在超声/ct等影像学技术引导下对患者腹腔进行穿刺，灌注 0.9%生理盐水250ml留置适当时间后引流获得。

18、进一步地，所述的非手术期间是指：围手术期、全身治疗周期以及生命存活期。

19、本发明的第二方面，提供一种腹腔灌洗液ctdna含量的检测方法，包括对腹腔灌洗液循环肿瘤dna进行预处理的步骤：

20、对腹腔灌洗液循环肿瘤dna进行预处理：腹腔灌洗液离心，分离上清；在上清中加入20mg/ml的蛋白酶k、20%sds，混匀，50-70℃孵育10-30min；加入dna结合液和磁珠，使循环肿瘤dna与磁珠充分结合；离心、静置、去除上清液；加入dna洗涤液，混匀、离心、静置、去除上清液；将磁珠用70-90%乙醇漂洗；加入dna洗脱液，使游离dna完全释放；离心、静置、收集上清液，-20℃±5℃保存；

21、对腹腔灌洗液循环肿瘤dna进行定量检测。

22、对腹腔灌洗液循环肿瘤dna进行预处理的步骤具体如下：

23、a）将腹腔灌洗液置于离心管，2000-4000rpm（优选3000 rpm）离心10-40 min（优选30 min），分离上清；

24、b）腹腔灌洗液中循环肿瘤dna提取：

25、步骤a）获得的上清中加入20mg/ml的蛋白酶k、20%sds ；

26、颠倒混匀，50-70℃（优选60℃）孵育10-30 min（优选20min）；

27、加入dna结合液和磁珠；震荡，使循环肿瘤dna与磁珠充分结合；离心、静置、去除上清液；

28、加入dna洗涤液，震荡混匀；离心、静置、去除上清液；

29、将磁珠用70-90%（优选80%）乙醇漂洗（一次或一次以上）；将样本从磁力架上取下，加入dna洗脱液，震荡使游离dna完全释放；离心、静置、吸取上清至新的容器中，-20℃±5℃保存。

30、本发明的腹腔灌洗液ctdna含量的检测方法，后续的步骤ctdna定量检测步骤可参考现有技术中血浆或其他体液样本中cfdna的检测方法，以获得ctdna检测结果即可。

31、获得ctdna检测结果进行对照、分析（可如本发明提供的实施例方法建库，也可直接使用商业公司已有的血浆或其他体液样本中胃癌cfdna的样本库），根据腹腔灌洗液中ctdna有或无或达到一定阈值水平（确定ctdna阳性或阴性）判断患者是否出现胃癌根治术后异时性腹膜转移。

32、上述检测方法中，使用的蛋白酶k、sds、dna结合液、磁珠、dna洗涤液、dna洗脱液，均为市售产品。

33、本发明的腹腔灌洗液ctdna含量的检测方法，具体包括以下步骤：

34、a）将腹腔灌洗液置于离心管（优选50ml--100ml离心管），3000rpm离心30min，分离上清；

35、b）腹腔灌洗液中游离肿瘤dna提取：

36、（b1）每个患者的腹腔灌洗液分3管进行提取，每管4ml，标记样本号；

37、（b2）每个离心管中依次加入腹腔灌洗液4ml、蛋白酶k（20mg/ml）60μl、20%sds 200μl；

38、（b3）颠倒混匀，60℃孵育20min；

39、（b4）加入游离dna结合液5ml和震荡混匀的磁珠60μl；

40、（b5）涡旋震荡10秒钟，充分混匀。震荡5-10分钟，使游离dna与磁珠充分结合；

41、（b6）短暂离心收集管盖及管壁上的液体，将离心管置于磁力架上直至液体澄清（3-5分钟）；

42、（b7）去除上清液；

43、（b8）加入500μl游离dna洗涤液，震荡混匀；

44、（b9）短暂离心收集管盖及管壁上的液体，将离心管置于磁力架上直至液体澄清（1-2分钟）；

45、（b10）去除上清液；

46、（b11）加入500μl 80%乙醇，震荡混匀；

47、（b12）短暂离心收集管盖及管壁上的液体，将离心管置于磁力架上直至液体澄清（1-2分钟）；

48、（b13）去除上清液；

49、（b14）重复步骤（b11）-（b13）将磁珠用80%乙醇再漂洗一次；

50、（b15）用10μl移液器吸尽离心管底部残留的液体，室温干燥3-5min；注意：磁珠不可过分干燥；

51、（b16）将样本从磁力架上取下，加入30-50μl游离dna洗脱液，震荡3-5分钟使游离dna完全释放；

52、（b17）短暂离心收集管盖上的液体，将离心管放置在磁力架上直至液体澄清。小心吸取上清至新的离心管中，-20℃±5℃保存。

53、c）建库、捕获和测序

54、（c1）文库构建

55、腹腔灌洗液ctdna样本使用kapa hyper preparation kit（kapa biosystems,usa）进行文库构建。构建好的文库使用qubit dsdna hs（high sensitivity）assay kit（themo fisher, usa）进行浓度测定，并用agilent bioanalyzer 2100 （agilent, usa）进行文库片段大小评估。

56、腹腔灌洗液ctdna投入量为200ng，为参考晚期组织的投入量。

57、按血浆的60ng投入量进行建库处理，无法通过质控。进一步检测核酸2100去质控片段，发现腹腔灌洗液cfdna占比很少，大部分是gdna，按照60ng 投入量去实验，实际上cfdna 的投入量应该不到10ng。因此本发明参照晚期组织的建库核酸投入量进行建库。

58、（c2）目标区域捕获和测序

59、使用xgen hybridization and wash kit（idt, usa）进行目标区域的捕获。 捕获使用的panel 覆盖了人类基因组约2.2mb的区域，包括769个基因。杂交，洗脱，捕获完成使用dnbseq-t7进行测序。

60、d）ctdna检测：

61、（d1）变异识别

62、首先使用trimmomatic (v0.36)软件去除接头和低质量的测序产物（reads）。使用bwa aligner (v0.7.17)软件将干净的reads比对到人hg19参考基因组。接下来使用picard(v2.23.0)软件对duplications进行分类和去重。snv和indel使用vardict (v1.5.1)软件进行识别检测，复杂突变用的是freebayes (v1.2.0)。突变质量以及链的偏好性等qc数据的过滤情况都会列在原始突变列表中。此外，匹配到encod中定义的低映射区域的低复杂重复和片段重复区域中的突变，以及内部开发和验证的测序特异性错误（sses）列表中的突变均被去除。

63、（d2）肿瘤组织中筛选基因突变

64、首先过滤来自胚系或造血来源的突变，突变符合以下任何一个标准将被过滤掉：（1）突变来自外周血的变异频率(vaf)不低于5%，或者（2）突变来自外周血vaf值低于5%，但是该vaf值与与之匹配的组织样本中该点的vaf值未超过5倍的关系，或者（3）突变在公开的gnomad人群数据库中可以找到，其具有较小的等位基因频率（maf）且不小于2％。剩下的基因突变将进行进一步的质量条件过滤。在筛选肿瘤组织突变的时候，每个突变至少有5条reads支持，snv的检出限为4%，indel的检出限为5%，这些分别作为筛选肿瘤组织突变的条件。

65、这些阈值标准在该ngs panel性能分析验证时就已经确定，从灵敏性，特异性，重复性以及再现性方面进行了测定。

66、（d3）腹腔灌洗液筛选基因突变

67、采用了组织先验的mrd检测方法，首先排除了初始组织测序中未检测到的ctdna突变，只在血浆中监测肿瘤组织检出的体细胞变异。使用背景噪音基线模型对每个监测的ctdna突变进行了统计学检验，以消除技术噪声的影响。通过对配对的组织和pbl测序去除真实的肿瘤源性体细胞变异和克隆性造血（ch）突变，剩余的变异信号则代表了每个染色体坐标（coordinate）的每种变异方向（subtype）的噪音信号，并进行韦布尔分布或逆gamma分布拟合，形成了单碱基分辨率的噪音模型。而噪音基线模型中的零膨胀效应，则通过montecarlo抽样模拟近似得出给定变体的零百分比加权概率。具体而言，从建模的分布中随机进行10000次采样，包括n_nonzero个非零vaf，以及n_zero个零vaf，其中n_nonzero和n_zero的计算方式为非零和零百分比的乘积分别以预定的总数1,0000计。该列表中的每个vaf作为噪音概率进一步馈入二项式检验，该二项式检验由观察到的alt等位基因支持读数和总支持读数参数化。期望值是所有p值的平均值，设置阈值（0.05），在定义样本mrd状态时，为了避免多重比较引起的特异性的损失，我们通过多变异联合置信概率的方法对样本水平的差异显著性进行了矫正，应用公式：

68、

69、n为追踪变异数量，k为p<=0.05 的变异数量，c代表组合数，为阳性位点的p_value；

70、最终获取样本与噪音基线相比较的显著性水平，在本次研究中设定样本水平的显著性阈值p为0.01，当腹腔灌洗液检测的p值低于阈值时，则判定该腹腔灌洗液样本为mrd阳性。

71、本发明的第三方面，提供一种预测胃癌根治术后异时性腹膜转移风险的检测系统，所述的检测系统执行如上所述的检测腹腔灌洗液循环肿瘤细胞的试剂和检测腹腔灌洗液循环肿瘤dna含量的试剂组合在制备预测胃癌根治术后异时性腹膜转移风险的试剂盒中的应用。

72、本发明优点在于：

73、本发明提供一种对患者从确诊胃癌开始，通过对腹腔灌洗液进行细胞学定性检查及基于肿瘤组织二代测序（ngs）的循环肿瘤dna（ctdna）量化检测，对ctdna量化检测水平进行监测，进而在预测胃癌根治术后异时性腹膜转移风险中的应用。

74、胃癌确诊后的全程管理中细胞学定性检查及ctdna量化检测，提升了预测胃癌根治术后异时性腹膜转移风险的精准性，便于针对患者围手术期、全身治疗周期以及生命存活期内发生隐匿性腹膜肿瘤转移的预判和甄别，从而及时制定有效的治疗方案，为最大可能性地延长患者的生命周期提供了快速、准确、高效的科学依据，具有极高的临床应用价值。

75、在患者腹腔灌洗液中使用基于ngs方法进行ctdna检测，可以在多个阶段对隐匿性腹膜转移进行筛查、判断和随访，提供更全面、灵敏的信息，有助于指导临床决策和治疗方案的制定。以下是在不同阶段使用ctdna检测的作用：

76、（1）入院筛查隐匿性腹膜转移：在具有腹膜转移高危因素（影像提示腹膜转移可能/影像提示肿瘤分期较晚/存在腹水）的肿瘤患者入院时，通过超声/ct引导下腹腔穿刺，直接引出或注入生理盐水后留置一定时间引出，获得腹水/腹腔灌洗液。在腹腔灌洗液/腹水标本中进行基于ngs的ctdna检测，进行腹膜转移筛查。ngs测序的肿瘤样本可以来源于患者活检标本。

77、（2）术中腹水/腹腔灌洗液判断是否存在隐匿性腹膜转移：在手术开始进腹时及手术结束关腹前，通过抽吸已有腹水或腹腔灌洗方法获得腹腔灌洗液。通过腹腔灌洗液中的ctdna检测，即使在肉眼难以察觉的情况下也能判断隐匿性腹膜转移，从而指导制定个体化的治疗策略，包括化疗、靶向治疗等干预措施，为患者的综合治疗效果和生存质量带来显著改善。

78、（3）术后随访过程中判断是否存在腹膜转移：在术后随访过程中，定期通过腹腔灌洗液中的ctdna检测，可以监测腹膜转移的情况。基于手术标本/活检标本ngs的ctdna检测方法的高灵敏度和特异性可以及时发现隐匿性腹膜转移的发生或进展，以便及时干预或调整治疗方案。

79、通过在患者腹腔灌洗液中使用基于ngs方法进行ctdna检测，可以实现对腹膜转移的动态监测和精准诊断，再组合上腹腔灌洗液循环肿瘤细胞（ctc）检测，使胃癌根治术后异时性腹膜转移风险预测更加精准。为临床医生提供重要的辅助信息，指导个体化治疗方案的制定，改善患者的预后和生存率。