一种甾体类化合物在制备α-葡萄糖苷酶活性抑制剂中的应用的制作方法

本发明属于生物医药，特别涉及一种甾体类化合物及在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂中的应用。

背景技术：

1、糖尿病是一种以慢性高血糖为特征的代谢性疾病，其中，ii型糖尿病占糖尿病患者的90％以上，常伴有动脉粥样硬化、糖尿病足、糖尿病眼病、高渗综合征等并发症，严重威胁人类健康。α-葡萄糖苷酶(α-glucosidase,ags)抑制剂是二十世纪七十年代研发的新型口服降血糖药物，是治疗ii型糖尿病的代表性药物之一，其可竞争性抑制小肠上皮刷状缘的ags活性，通过延缓人体对葡萄糖的吸收以及抑制寡糖分解为单糖来有效的降低餐后血糖水平。目前临床应用的ags抑制剂主要有阿卡波糖、米格列醇和伏格列波糖三种，长期服用会引起腹痛、腹泻、肠胀气、胃痉挛、皮肤瘙痒等不良反应。因此，寻找和发现安全、有效的新型ags抑制剂，可以为开发机体友好的糖尿病治疗药物提供先导结构。

2、桑黄为担子菌门(basidiomycota)蘑菇纲(araricomycetes)锈革菌目(hymenochaetales)锈革菌科(hymenochaetaceae)纤孔菌属(lnonotus)粗毛纤孔菌(inonotus hispidus(bull.)p.karst)的干燥子实体，是一种珍贵的药用大型多孔菌。

3、化合物stigmast-4,6,8(14),22-tetraen-3-one(麦角甾-4,6,8(14),22-四烯-3-酮)为甾体类化合物，黄色油状物，易溶于氯仿、甲醇，分子式为c29h42o，结构式如1所示：

4、

5、目前，尚未有文献报道从桑黄中提取式1化合物的方法，也未有相关文献报道式1化合物是否具有ags抑制活性。能否从桑黄中提取式1化合物，并将其开发成ags抑制剂，在本领域中仍有待研究。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供式1所示化合物在制备ags抑制剂中的用途。

2、本发明一方面提供式1所示化合物在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂中的用途。

3、

4、本发明另一方面提供式1所示化合物在制备用于治疗或改善糖尿病的药物中的用途。

5、在本发明的一些实施方案中，所述糖尿病是i型糖尿病、ii型糖尿病、高血糖症或糖尿病性并发症。

6、本发明另一方面提供一种药物组合物，其中，所述药物组合物从暴马丁香桑黄中提取。

7、在本发明的一些实施方案中，所述从暴马丁香桑黄中提取的方法包括以下步骤：将暴马丁香桑黄粉末的萃取物浸膏进行多次柱层析，梯度洗脱后以石油醚/乙酸乙酯体积比为5:1的混合溶液为展开剂进行薄层层析，收集浓缩rf值为0.3-0.5的洗脱部位。

8、在本发明的一些实施方案中，所述萃取物浸膏由以下步骤制备：

9、(1)用溶剂浸提暴马丁香桑黄粉末，浓缩提取液，得到粗提物浸膏；

10、(2)将步骤(1)得到的粗提物浸膏用乙酸乙酯溶解后，用水进行反向萃取，收集有机相，浓缩后得到萃取物浸膏。

11、在本发明的一些实施方案中，所述多次柱层析包括以下步骤的一步或多步：

12、a.将萃取物浸膏进行硅胶柱层析，以石油醚/乙酸乙酯混合溶剂为洗脱剂进行梯度洗脱，收集rf值为0.3-0.5的洗脱部位，合并浓缩后，得到浓缩物a；

13、b.将浓缩物b进行ods c-18柱层析，以甲醇/水混合溶剂为洗脱剂为进行梯度洗脱，收集rf值为0.3-0.5的洗脱部位，合并浓缩后，得到浓缩物b；

14、在一些实施方案中，步骤(1)中，所述溶剂为乙醇、丙醇、异丙醇、正丙醇、异丁醇、正丁醇，叔丁醇、乙二醇、乙醚、氯仿、丙酮、石油醚、水中的一种或多种.

15、在一些实施方案中，所述溶剂为异丙醇。当使用异丙醇为浸提溶剂时，得到的提取液中，目标化合物的含量较高。

16、在一些实施方案中，所述溶剂的单次用量和暴马丁香桑黄粉末的重量比为4～6ml/g，优选为5ml/g；所述浸提至少进行3次，每次提取时间为5～7天，优选为7天。

17、在一些实施方案中，步骤(2)中所述乙酸乙酯与步骤(1)得到的粗提物浸膏的体积/重量比为2-5ml/g，优选5ml/g；所述乙酸乙酯与单次萃取用水的体积比为1:1～1:3；所述萃取次数为3～5次。

18、在一些实施方案中，步骤a中所述梯度洗脱的方法为：依次以体积比为20:1、15:1、10:1、8:1、6:1、4:1、3:1、1:1的石油醚/乙酸乙酯混合溶剂为洗脱剂进行梯度洗脱，每一梯度洗脱2-5个柱体积，流速10-20ml/min；收集体积比10:1的石油醚/乙酸乙酯混合溶剂洗脱部位。

19、在一些实施方案中，步骤b中所述梯度洗脱的方法为：依次以体积比为80:20、85:15、90:10、95:5、100:0的甲醇/水混合溶剂以及90:10、80:20的甲醇/丙酮混合溶剂为洗脱剂进行梯度洗脱为洗脱剂进行梯度洗脱，每一梯度洗脱2～4个柱体积，流速10～20ml/min；收集体积比80:20的甲醇/丙酮混合洗脱剂对应的洗脱部位。

20、本发明另一方面提供含有治疗有效量的式1所示的化合物或其药学上可接受载体的药物组合物在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂中或用于治疗或改善糖尿病的药物中的用途，优选地，所述糖尿病是i型糖尿病、ii型糖尿病、高血糖症或糖尿病性并发症。

21、本发明所述甾体类化合物对ags具有强抑制活性，可用于治疗糖尿病、高血糖症和高胰岛素血症等。葡萄糖耐量缺损、2型糖尿病早期的餐后高血糖毒性作用，极易诱发血管、周围神经等多组织病变，引起各种并发症，增加糖尿病的总死亡率，本发明所述甾体类化合物可以有效防止糖毒作用。另外，该化合物还可用于与高血糖症相关的罕见先天性代谢糖原贮积病。除了降糖相关作用，本发明所述甾体类化合物还具有降低胆固醇、抗氧化、增强免疫机能、抗癌等功效。

技术特征：

1.式1所示化合物在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂中的用途。

2.式1所示化合物在制备用于治疗或改善糖尿病的药物中的用途。

3.根据权利要求2所述的用途，其中，所述糖尿病是i型糖尿病、ii型糖尿病、高血糖症或糖尿病性并发症。

4.一种药物组合物，其中，含有式1所示化合物，从暴马丁香桑黄中提取得到。

5.根据权利要求4所述的药物组合物，其中，所述从暴马丁香桑黄中提取的方法包含以下步骤：将暴马丁香桑黄粉末的萃取物浸膏进行多次柱层析，梯度洗脱后以石油醚/乙酸乙酯体积比为5:1的混合溶液为展开剂进行薄层层析，收集并浓缩rf值为0.3-0.5的洗脱部位。

6.根据权利要求5所述的药物组合物，其中，所述萃取物浸膏由以下步骤制备：

7.根据权利要求6所述的药物组合物，其中，所述溶剂为为乙醇、丙醇、异丙醇、正丙醇、异丁醇、正丁醇，叔丁醇、乙二醇、乙醚、氯仿、丙酮、石油醚、水中的一种或多种，优选为异丙醇。

8.根据权利要求5所述的药物组合物，其中，所述多次柱层析包含以下步骤中的一步或多步：

9.根据权利要求8所述的药物组合物，其中，步骤(1)中，所述异丙醇浸提的温度为室温，所述异丙醇的单次用量和暴马丁香桑黄粉末的重量比为4～6ml/g，优选为5ml/g；所述浸提至少进行3次，每次提取时间为5～7天，优选为7天。

10.根据权利要求6所述的药物组合物，其中，步骤(2)中，所述乙酸乙酯与步骤(1)得到的粗提物浸膏的体积/重量比为2～5ml/g，优选为5ml/g；所述乙酸乙酯与单次萃取用水的体积比为1:1～1:3；所述萃取的次数为3～5次。

11.根据权利要求8所述的药物组合物，其中，步骤a中，所述梯度洗脱的方法为：依次以体积比为20:1、15:1、10:1、8:1、6:1、4:1、3:1、1:1的石油醚/乙酸乙酯混合溶剂为洗脱剂进行梯度洗脱，每一梯度洗脱2-5个柱体积，流速10-20ml/min；收集体积比10:1的石油醚/乙酸乙酯混合溶剂洗脱部位。

12.根据权利要求8所述的药物组合物，其中，步骤b中，所述梯度洗脱的方法为：依次以体积比为80:20、85:15、90:10、95:5、100:0的甲醇/水混合溶剂以及90:10、80:20的甲醇/丙酮混合溶剂为洗脱剂进行梯度洗脱为洗脱剂进行梯度洗脱，每一梯度洗脱2～4个柱体积，流速10～20ml/min；收集体积比80:20的甲醇/丙酮混合洗脱剂对应的洗脱部位。

13.含有治疗有效量的式1所示化合物或其药学上可接受载体的药物组合物或权利要求4～12任一项所述的药物组合物在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂中的用途。

14.含有治疗有效量的式1所示化合物或其药学上可接受载体的药物组合物或权利要求4～12任一项所述的药物组合物在制备用于治疗或改善糖尿病的药物中的用途，优选地，所述糖尿病是i型糖尿病、ii型糖尿病、高血糖症或糖尿病性并发症。

技术总结本发明涉及一种甾体类化合物及在制备α‑葡萄糖苷酶抑制剂中的应用。本发明所述的甾体类化合物为Stigmast‑4,6,8(14),22‑tetraen‑3‑one(麦角甾‑4,6,8(14),22‑四烯‑3‑酮)，提取自暴马丁香桑黄，对α‑葡萄糖苷酶活性具有明显的抑制作用，IC50值为34.37±2.43μM，在α‑葡萄糖苷酶抑制剂类糖尿病治疗药物研发方面具有广阔的应用前景。技术研发人员：单伟光,应优敏,姚君毅受保护的技术使用者：浙江华海药业股份有限公司技术研发日：技术公布日：2024/6/13