一种细胞松弛素的制备方法及在制备降血脂药物中的应用

本发明属于微生物及其天然产物的应用，特别涉及一种细胞松弛素的制备方法及在制备降血脂药物中的应用。

背景技术：

1、血脂异常是脂质代谢性疾病，主要包括总胆固醇(tc)、甘油三酯(tg)和低密度脂蛋白胆固醇(ldl-c)升高，以及高密度脂蛋白胆固醇(hdl-c)降低等在内的各种情况。目前，我国成人血脂异常发病率高达40.40％，美国成人单项低密度脂蛋白胆固醇(ldl-c)异常者超1亿，发病率逐年上升且呈低龄化趋势。血脂异常与脂肪肝、动脉粥样硬化、高血压、冠心病、糖尿病和脑卒中等多种疾病密切相关，现已发展为全球性公共卫生问题，严重威胁人类生命健康。高脂血症是动脉粥样硬化性心血管疾病(atherosclerotic cardiovasculardisease,ascvd)重要的危险因素；降低ldl-c水平，可显著减少ascvd的发病及死亡危险。降低血脂的途径主要有以下几个方面：一是提高脂蛋白脂肪酶和卵磷脂胆固醇酰基转移酶的活性，增加hdl含量，从而促进脂质分解代谢，抑制脂质合成转运及在动脉壁上的沉积；二是抑制胆固醇的生物合成途径中一个或几个环节；三是与胆固醇或其转化物胆酸结合，从而抑制其在肠内的吸收，促进降解和排泄；四是通过抗氧化来降血脂。

2、微生物代谢产物具备化学结构多样、活性广泛等特点，在细胞内能与多种特异性靶点相互作用，是发现药物先导化合物的重要来源之一。通过挖掘天然产物中的有效成分，以寻找疗效更好、更适用的降血脂药物具有重大意义。

3、细胞松弛素是一类真菌氨基酸/聚酮杂合次级代谢产物，其经典结构特征为三环骨架系统，即一个大环骈合一个二环的异吲哚酮，大环含有奇数个碳原子，可以是碳环，内酯环或者碳酸酯环。根据骈和在聚酮骨架上氨基酸的类型不同，以及大环的类型、碳原子数、大环上取代基的不同，决定了细胞松弛素骨架种类的丰富和结构的多样。不同类别的细胞松弛素表现出了多样的生物活性，例如抗炎、细胞毒、抗真菌等作用。因此，细胞松弛素是潜在降血脂药物的重要来源。

技术实现思路

1、针对现有技术的上述缺陷，本发明提出一种细胞松弛素的制备方法及在制备降血脂药物中的应用，以解决上述背景技术提出的问题。

2、为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

3、本发明从毛壳菌chaetomium nigricolor中分离提取得到次级代谢产物-细胞松弛素chamiside f，其化学结构式如下：

4、

5、所述细胞松弛素的制备方法包括以下步骤：

6、(1)发酵培养：将毛壳菌chaetomium nigricolor接种到马铃薯葡萄糖培养基中，27～30℃下培养6～8d，得到一级低活性菌种；再将一级低活性菌种转接到新的马铃薯葡萄糖培养基中，27～30℃下培养6～8d，得到二级高活性菌种；将二级高活性菌种接种到大米培养基中，27～30℃下培养55～65d；

7、(2)细胞松弛素chamiside f的提取：待步骤(1)发酵完成后，向发酵培养基中加入乙酸乙酯，进行超声提取，过滤得到乙酸乙酯提取物相后蒸发浓缩，得到粗提物a；用石油醚萃取粗提物a，分液出石油醚相和水相，将水相旋转蒸发浓缩，得到粗提物b；用甲醇混悬粗提物b后过滤，得到甲醇相；

8、(3)分离：用硅胶对甲醇相进行拌样，然后加入到ods反相柱中，以甲醇和水作为洗脱剂进行梯度洗脱，定向收集洗脱下来的馏分；

9、(4)纯化：对步骤(3)所得馏分利用半制备高效液相色谱仪进行纯化，得到细胞松弛素chamiside f。

10、优选地，一种细胞松弛素的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：

11、(1)发酵培养：将毛壳菌chaetomium nigricolor接种到马铃薯葡萄糖培养基中，28℃下培养7d，得到一级低活性菌种；再将一级低活性菌种转接到新的马铃薯葡萄糖培养基中，28℃下培养7d，得到二级高活性菌种；将二级高活性菌种接种到大米培养基中，28℃下培养60d；

12、(2)细胞松弛素chamiside f的提取：待步骤(1)发酵完成后，向发酵培养基中加入等体积的乙酸乙酯，在超声频率30～40khz、超声功率300～450w条件下进行超声提取20～40min，过滤得到乙酸乙酯提取物相后在50℃、10hpa下减压浓缩20min，得到粗提物a；用等体积的石油醚萃取粗提物a，分液出石油醚相和水相，将水相在50℃、10hpa下减压浓缩20min，得到粗提物b；用甲醇混悬粗提物b后过滤，得到甲醇相；其中甲醇和粗提物b按体积比为5:1混悬；

13、(3)分离：用硅胶对甲醇相进行拌样，然后加入到ods反相柱中，以甲醇：水体积比分别为10:90、40:60、80:20、100:0进行梯度洗脱，定向收集甲醇：水体积比为80:20比例时洗脱下来的馏分；

14、(4)纯化：对步骤(3)所得馏分利用半制备高效液相色谱仪进行纯化，得到细胞松弛素chamiside f。

15、优选地，毛壳菌chaetomium nigricolor保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所；保藏日期：2024年01月23日，保藏编号：cgmcc no.41088。

16、优选地，马铃薯葡萄糖(pda)培养基含马铃薯200克、葡萄糖20克、琼脂15～20克、蒸馏水1000毫升、自然ph。

17、优选地，乙酸乙酯、石油醚购自天津市富宇精细化工有限公司；甲醇购自天津康科德科技有限公司。

18、优选地，步骤(1)中所述的大米培养基的制备：1l锥形瓶，取200g大米，250ml蒸馏水，在121℃高压灭菌20min。

19、优选地，步骤(2)中重复进行超声提取三次，合并三次的提取液，把提取液过滤旋转蒸发浓缩，得到粗提物a。

20、优选地，步骤(4)纯化方法为选用色谱柱为zorbax sb-c18，色谱柱规格为9.4mm×250mm，5μm；流动相为甲醇和水，甲醇与水体积比为80:20，流速为2ml/min，检测波长为190～400nm，保留时间为10min。

21、优选地，细胞松弛素的制备方法或细胞松弛素chamiside f在制备动物降血脂药物中的应用。

22、优选地，细胞松弛素的制备方法所制备出的细胞松弛素chamiside f在制备鱼类降血脂药物中的应用。

23、优选地，细胞松弛素chamiside f在制备斑马鱼降血脂药物中的应用。

24、与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明利用毛壳菌chaetomiumnigricolor为微生物资源进行细胞松弛素chamiside f的制备，所采用的方法具有选择性高、操作简便的优点，且得到的产物纯度高。经研究发现，细胞松弛素chamiside f可用于制备降血脂药物中，能够降低脂质、甘油三酯和丙二醛的含量，提高超氧化物歧化酶含量，具有良好的应用前景。