一种高含量莱鲍迪苷O、莱鲍迪苷N的分离纯化方法与流程

本发明涉及糖苷类产品，尤其涉及一种高含量莱鲍迪苷o、莱鲍迪苷n的分离纯化方法。

背景技术：

1、甜菊糖苷是从多年生灌木甜叶菊(stevia rebaudiana)中分离和提取的天然甜味剂，已有研究表明甜菊糖苷类物质有莱鲍迪苷a(rebaudios ide a，ra)、rb、rc、rd、rm、re、ro、rn等多种化合物。其中甜菊苷(st)和莱鲍迪苷a(ra)所占比例最大(一般在90％以上)，莱鲍迪苷c(rc)、杜尔克苷a(da)、甜菊双糖苷、re、rn、ro的含量较少。

2、目前大多数企业主要以甜叶菊为原料，经过提取、分离、结晶操作得到高含量的莱鲍迪苷d、莱鲍迪苷a、莱鲍迪苷c产品和甜菊苷(st)，但是上述糖苷生产中会产生大量的结晶母液，这些母液中含有莱鲍迪苷o、n等成分，如果将结晶母液直接丢弃，势必造成原料浪费。因此针对上述技术问题，有必要开发一种高含量莱鲍迪苷o、莱鲍迪苷n的分离纯化方法。

技术实现思路

1、本发明所要解决的技术问题是：针对现有技术的不足，提供一种高含量莱鲍迪苷o、莱鲍迪苷n的分离纯化方法，利用该分离纯化方法得到高产量、高纯度以及高收率的莱鲍迪苷o和莱鲍迪苷n，避免了资源浪费。

2、为解决上述技术问题，本发明的技术方案是：

3、一种高含量莱鲍迪苷o、莱鲍迪苷n的分离纯化方法，所述分离纯化方法包括以下步骤：

4、(1)将收集的结晶母液稀释后过树脂柱，待进样结束后先采用纯化水解析树脂柱，收集第一解析液；然后再采用有机溶剂解析树脂柱，收集第二解析液；

5、(2)取步骤(1)中的第一解析液，经过浓缩、干燥得到的固体物料中加入有机溶剂溶解、过滤，收集的滤液进入色谱柱中，待进样结束后先采用第一洗脱剂洗脱色谱柱，收集的第一洗脱液备用；再用第二洗脱剂洗脱色谱柱，收集的第二洗脱液备用；然后用第三洗脱剂洗脱色谱柱，收集的第三洗脱液备用；最后用第四洗脱剂洗脱色谱柱，收集的第四洗脱液备用；

6、(3)取步骤(2)中第三洗脱液，浓缩、干燥得到的干燥物中加入有机溶剂，加热溶解、降温结晶、抽滤，分别收集滤液和滤饼，其中所述滤饼经过干燥，即为莱鲍迪苷n；

7、(4)取步骤(3)中所述滤液，经过浓缩、干燥得到的干燥物中加入有机溶剂，加热溶解、降温结晶、抽滤，分别收集滤液和滤饼；

8、(5)取步骤(4)中滤饼，先加入第一有机溶剂，加热搅拌溶解，再滴加第二有机溶剂，保温结晶、抽滤，分别收集滤液和滤饼；其中所述滤饼经过干燥，即为莱鲍迪苷o。

9、作为一种改进的技术方案，步骤(1)中结晶母液干燥后的粉末加入纯化水溶解得到固含量为5％-15％；稀释后的结晶母液按照0.5-1bv/h的流速进入所述树脂柱中；所述树脂柱中的填料为大孔吸附树脂，所述大孔吸附树脂的型号为lk-1300ss。

10、作为一种改进的技术方案，步骤(1)中所述纯化水按照1-2bv/h的流速洗脱所述树脂柱；所述有机溶剂为60-70％v/v的乙醇，且所述乙醇按照1-2bv/h的流速洗脱所述树脂柱。

11、作为一种改进的技术方案，步骤(2)中所述色谱柱内的填料为硅胶键合氰基，所述填料的型号为unisi l-cn。

12、作为一种改进的技术方案，步骤(2)中固体物料加入的有机溶剂为88-93％v/v的乙醇，所述滤液按照0.25-1bv/h的流速进入所述树脂柱中。

13、作为一种改进的技术方案，步骤(2)中所述第一洗脱剂为90％-98％v/v的乙醇，且所述第一洗脱剂的流速为0.5-1bv/h；所述第二洗脱剂为85％-88％v/v的乙醇，且所述第二洗脱剂的流速为1-2bv/h；所述第三洗脱剂为75％-83％v/v的乙醇，且所述第三洗脱剂的流速为1-2bv/h；所述第四洗脱剂为50％-70％v/v的乙醇，且所述第四洗脱剂的流速为1-2bv/h。

14、作为一种改进的技术方案，步骤(3)中加入的有机溶剂为40％-70％v/v的丙酮，加热溶解的温度为60-80℃，按照5-10℃/h的速度降温至20-25℃。

15、作为一种改进的技术方案，步骤(4)中固体物料中加入的有机溶剂由甲醇和乙醇混合而成，其中每100ml有机溶剂中含有40-70ml的甲醇；加热溶解的温度为40-80℃，降温至20-40℃保温结晶。

16、作为一种改进的技术方案，步骤(5)中加入的第一有机溶剂为甲醇，加热至40-80℃搅拌溶解；加入的第二有机溶剂为乙醇，保温结晶；其中甲醇和乙醇的总加入量为滤饼重量的5-8倍。

17、作为一种改进的技术方案，步骤(1)中的第二解析液、步骤(2)中第一洗脱液、第二洗脱液和第四洗脱液合并，经过蒸馏收集的乙醇回收利用，收集的固相为糖苷混合物。

18、采用了上述技术方案后，本发明的有益效果是：

19、本发明将甜菊糖苷分离纯化后的结晶母液为原料，经过稀释后过树脂柱，采用纯化水和有机溶剂分别洗脱，收集的第一解析液经过浓缩、干燥、稀释后过色谱柱，依次采用第一洗脱剂、第二洗脱剂、第三洗脱剂、第四洗脱剂进行洗脱，收集的第三洗脱液经过浓缩、干燥，加入有机溶剂加热溶解、降温结晶，抽滤得到的滤饼经过干燥即为莱鲍迪苷n，抽滤得到的滤液经过浓缩、干燥，加入有机溶解加热溶解、降温结晶，抽滤得到的滤饼再加入第一有机溶剂，加热搅拌溶解，再加入第二有机溶剂，保温结晶、抽滤，得到的滤饼经过干燥，即为莱鲍迪苷o。上述工艺方法，可以得到高纯度、高收率和高产量的莱鲍迪苷o和莱鲍迪苷n，避免了资源浪费。

技术特征：

1.一种高含量莱鲍迪苷o、莱鲍迪苷n的分离纯化方法，其特征在于，所述分离纯化方法包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种高含量莱鲍迪苷o、莱鲍迪苷n的分离纯化方法，其特征在于，步骤(1)中结晶母液干燥后的粉末加入纯化水稀释至固含量为5％-15％；稀释后的结晶母液按照0.5-1bv/h的流速进入所述树脂柱中；所述树脂柱中的填料为大孔吸附树脂，所述大孔吸附树脂的型号为lk-1300ss。

3.根据权利要求1所述的一种高含量莱鲍迪苷o、莱鲍迪苷n的分离纯化方法，其特征在于，步骤(1)中所述纯化水按照1-2bv/h的流速洗脱所述树脂柱；所述有机溶剂为60-70％v/v的乙醇，且所述乙醇按照1-2bv/h的流速洗脱所述树脂柱。

4.根据权利要求1所述的一种高含量莱鲍迪苷o、莱鲍迪苷n的分离纯化方法，其特征在于，步骤(2)中所述色谱柱内的填料为硅胶键合氰基，所述填料的型号为unisil-cn。

5.根据权利要求1所述的一种高含量莱鲍迪苷o、莱鲍迪苷n的分离纯化方法，其特征在于，步骤(2)中固体物料加入的有机溶剂为88-93％v/v的乙醇，所述滤液按照0.25-1bv/h的流速进入所述树脂柱中。

6.根据权利要求1所述的一种高含量莱鲍迪苷o、莱鲍迪苷n的分离纯化方法，其特征在于，步骤(2)中所述第一洗脱剂为90％-98％v/v的乙醇，且所述第一洗脱剂的流速为0.5-1bv/h；所述第二洗脱剂为85％-88％v/v的乙醇，且所述第二洗脱剂的流速为1-2bv/h；所述第三洗脱剂为75％-83％v/v的乙醇，且所述第三洗脱剂的流速为1-2bv/h；所述第四洗脱剂为50％-70％v/v的乙醇，且所述第四洗脱剂的流速为1-2bv/h。

7.根据权利要求1所述的一种高含量莱鲍迪苷o、莱鲍迪苷n的分离纯化方法，其特征在于，步骤(3)中加入的有机溶剂为40％-70％v/v的丙酮，加热溶解的温度为60-80℃，按照5-10℃/h的速度降温至20-25℃。

8.根据权利要求1所述的一种高含量莱鲍迪苷o、莱鲍迪苷n的分离纯化方法，其特征在于，步骤(4)中固体物料中加入的有机溶剂由甲醇和乙醇混合而成，其中每100ml有机溶剂中含有40-70ml的甲醇；加热溶解的温度为40-80℃，降温至20-40℃保温结晶。

9.根据权利要求1所述的一种高含量莱鲍迪苷o、莱鲍迪苷n的分离纯化方法，其特征在于，步骤(5)中加入的第一有机溶剂为甲醇，加热至40-80℃搅拌溶解；加入的第二有机溶剂为乙醇，保温结晶；其中甲醇和乙醇的总加入量为滤饼重量的5-8倍。

10.根据权利要求1所述的一种高含量莱鲍迪苷o、莱鲍迪苷n的分离纯化方法，其特征在于，步骤(1)中的第二解析液、步骤(2)中第一洗脱液、第二洗脱液和第四洗脱液合并，经过蒸馏收集的乙醇回收利用，收集的固相为糖苷混合物。

技术总结本发明涉及糖苷类产品技术领域，尤其涉及一种高含量莱鲍迪苷O、莱鲍迪苷N的分离纯化方法，包括以下内容：将甜菊糖苷分离纯化后的结晶母液为原料，经稀释后过树脂柱，采用纯化水和有机溶剂分别解析，收集的第一解析液经过浓缩、干燥、稀释后过色谱柱，依次采用第一、第二、第三、第四洗脱剂进行洗脱，收集的第三洗脱液经过浓缩、干燥，加入有机溶剂加热溶解、降温结晶，滤饼经干燥即为莱鲍迪苷N，抽滤得到的滤液经过浓缩、干燥，加入有机溶解加热溶解、降温结晶，滤饼再加入第一、第二有机溶剂，保温结晶、抽滤，得到的滤饼经过干燥，即为莱鲍迪苷O。上述工艺方法，可以得到高纯度、高收率和高产量的莱鲍迪苷O和莱鲍迪苷N产品。技术研发人员：朱理平,郭晓杰,何冬生,曹欣欣,刘浩,鞠敏,臧鹏飞受保护的技术使用者：诸城市浩天生物科技有限公司技术研发日：技术公布日：2024/6/18