一种利用冠突曲霉（MK346334,NCBI）液态发酵生产茶褐素的方法

利用冠突曲霉液态发酵生产茶褐素的方法，涉及微生物发酵领域和茶叶深加工领域。

背景技术：

1、夏秋茶是按季节划分的一大类茶，一般每年6-7月份采制的茶叶为夏茶，每年8-9月份采制的茶叶为秋茶。我国夏秋茶资源非常丰富，其生产量能占全年茶叶生产量的60％，但与春季茶相比，夏秋茶的儿茶素含量较高，氨基酸含量较低，导致夏秋茶更苦更涩，这限制了它们的市场，造成大量夏秋茶不能被有效利用。因此，以夏秋茶为原料，拓展夏秋茶深加工利用途径，对于茶产业的发展具有重要意义。冠突曲霉，俗称“金花”，无毒安全，是茯砖茶后发酵过程中的主要益生菌。冠突曲霉对茯砖茶中代谢物和风味化合物的形成或转化中起着至关重要的作用，并显示出许多对健康有益的作用(例如，抗肥胖、抗氧化、抗癌、调节肠道菌群等)。茶褐素是具有酚类性质的高聚物主要存在于渥堆黑茶和普洱茶等后发酵茶中，对茶叶的风味和品质起着重要作用。研究表明，茶褐素是最为稳定的一类茶色素，具有抗氧化、降血糖、降血脂、抗炎等生物活性，是普洱茶中主要的活性成分，对人体的综合代谢平衡具有调节作用。与固态发酵相比，液态纯发酵具有发酵时间短、微生物污染少、连续生产等优点。因此，将冠突曲霉应用于秋绿茶的液态纯发酵中，探究冠突曲霉液态纯发酵生产茶褐素的生产工艺具有重要意义。基于上述分析，一种能充分利用秋绿茶资源，以冠突曲霉为单一菌种采用液态发酵生产茶褐素的方法不仅可为茶褐素的批量制备具提供一种可行的方法，而且对秋绿茶深加工具有重要意义。因此，有必要提出一种利用冠突曲霉液态纯发酵生产茶褐素的方法。

技术实现思路

1、针对以上问题，本发明的目的是提供一种以秋绿茶为原料，以冠突曲霉(mk346334，ncbi)为单一菌种，液态发酵生产茶褐素的方法，生产工艺简单，发酵易控制，发酵时间短，生产成本低，且所得茶褐素含量较高，为生产制备茶褐素提供一种可行的方法。

2、一种利用冠突曲霉液态纯发酵生产茶褐素的工艺，包括以下步骤：

3、1)将秋绿茶沸水浸提45min，冷却后，离心得澄清茶汤；

4、2)将茶汤分装到1l锥形瓶，用立式蒸汽灭菌锅121℃灭菌15min，于超净台内冷却后得无菌茶汤；

5、3)向无菌茶汤中接种冠突曲霉(mk346334)孢子悬浮液；

6、4)进行液态发酵，得到发酵茶汤；

7、5)将发酵茶汤过滤后得到澄清茶汤，将茶汤真空浓缩，于80℃灭菌30min，将灭菌后的溶液用3500da的透析袋透析2d，将透析后的溶液旋蒸，取浓缩液按照1∶4体积加入无水乙醇，静置12h，9000r/min，离心10min，收集沉淀，将沉淀冻干，得茶褐素粗品，4℃保存，备用。所述的利用冠突曲霉液态纯发酵生产茶褐素的方法，其特征在于步骤1)中：茶水比为1∶30～1∶70(m∶v)。

8、所述的利用冠突曲霉液态纯发酵生产茶褐素的方法，其特征在于步骤2)中：装瓶量为120～440ml。

9、所述的利用冠突曲霉液态纯发酵生产茶褐素的方法，其特征在于步骤3)中：冠突曲霉孢子悬浮液的制备步骤：取4℃保藏的冠突曲霉斜面在马铃薯葡萄糖培养基(pda)上划线，于28℃恒温培养箱内培养10天，待平板上长满棕褐色孢子后，在超净工作台内刮取孢子转接到已灭菌的装有100ml纯水的锥形瓶中，充分震荡，利用血球板计数法，调整孢子浓度为104～105cfu/ml，接种量为6％～14％。

10、所述的利用冠突曲霉液态纯发酵生产茶褐素的方法，其特征在于步骤4)中：液态发酵的条件为：发酵温度为28℃，摇床转速为120rpm，发酵时间为5～9天。

11、所述的利用冠突曲霉液态纯发酵生产茶褐素的方法，其特征在于步骤5)中：所述过滤为利用定性滤纸过滤除去菌丝体得到澄清茶汤；真空浓缩的温度为50～65℃，压力为0.05～0.1mpa；先用3500da的透析袋将茶汤透析2d，将透析后的溶液旋蒸，取浓缩液按照1∶4体积加入无水乙醇，静置12h；真空冷冻干燥的温度为-80℃，真空度为10pa。

12、本发明的有益效果是：

13、1.发酵前对秋绿茶茶汤进行灭菌处理，保证冠突曲霉单菌种发酵，有利于提高发酵效率，有利于控制发酵条件。

14、2.发酵菌种冠突曲霉(mk346334，ncbi)是本实验室从渥堆茯砖茶中分离纯化获得，具有无毒安全、分泌多种胞外酶(多酚氧化酶、单宁酶、漆酶等)的特性，能充分利用茶叶中的物质进行新陈代谢，促进茶叶内含物质转化。

15、3.本发明中秋绿茶原料来源广泛、价格低廉。以秋绿茶为原料，接种冠突曲霉进行液态纯发酵，有利于缩短发酵时间，有利于促进秋绿茶中儿茶素向茶褐素转化，提高茶褐素含量，进而提高夏秋茶资源利用率。

技术特征：

1.一种利用冠突曲霉液态发酵生产茶褐素的工艺，包括：

2.如权利要求1所述的利用冠突曲霉液态发酵生产茶褐素的方法，其特征在于步骤1)中：茶水比为1∶30～1∶70(m∶v)。

3.如权利要求1所述的利用冠突曲霉液态发酵生产茶褐素的方法，其特征在于步骤2)中：装瓶量为120～440ml。

4.如权利要求1所述的利用冠突曲霉液态发酵生产茶褐素的方法，其特征在于步骤3)中：冠突曲霉孢子悬浮液的制备步骤：取4℃保藏的冠突曲霉斜面在马铃薯葡萄糖培养基(pda)上划线，于28℃恒温培养箱内培养10天，待平板上长满棕褐色孢子后，在超净工作台内刮取孢子转接到已灭菌的装有100ml纯水的锥形瓶中，充分震荡，利用血球板计数法，调整孢子浓度为104～105cfu/ml，接种量为6％～14％。

5.如权利要求1所述的利用冠突曲霉液态发酵生产茶褐素的方法，其特征在于步骤4)中：液态发酵的条件为：发酵温度为28℃，摇床转速为120rpm，发酵时间为5～9天。

6.如权利要求1所述的利用冠突曲霉液态发酵生产茶褐素的方法，其特征在于步骤5)中：所述过滤为利用定性滤纸过滤除去菌丝体得到澄清茶汤；真空浓缩的温度为50～65℃，压力为0.05～0.1mpa；先用3500da的透析袋将茶汤透析2d，将透析后的溶液旋蒸，取浓缩液按照1∶4体积加入无水乙醇，静置12h；真空冷冻干燥的温度为-80℃，真空度为10pa。

技术总结一种利用冠突曲霉(MK346334，NCBI)液态发酵生产茶褐素的方法属于茶叶深加工领域。包括以下步骤：1)将秋绿茶沸水浸提45min，冷却后，离心得澄清茶汤；2)将茶汤分装到1L锥形瓶，用立式蒸汽灭菌锅121℃灭菌15min，于超净台内冷却后得无菌茶汤；3)向无菌茶汤中接种冠突曲霉孢子悬浮液；4)进行液态发酵，得到发酵茶汤；5)将发酵茶汤过滤后得到澄清茶汤，将茶汤真空浓缩，于80℃灭菌30min，将灭菌后的溶液用3500Da的透析袋透析2d，将透析后的溶液旋蒸，取浓缩液按照1∶4体积加入无水乙醇，静置12h，9000r/min，离心10min，收集沉淀，将沉淀冻干，得茶褐素粗品，4℃保存，备用。上述方法能充分利用秋绿茶资源，且生产工艺简单，发酵易于控制，发酵时间短，有利于促进秋绿茶中儿茶素向茶褐素转化，提高秋绿茶资源利用率，为生产制备茶褐素提供一种可行的潜在途径。技术研发人员：曾晓雄,郑景茜,张凯新受保护的技术使用者：南京农业大学技术研发日：技术公布日：2024/6/18