缓解吡虫啉诱导免疫损伤的带鱼免疫肽FAFU-C及其制备方法

本发明属于免疫类生物制品，具体涉及一种缓解吡虫啉诱导免疫损伤的带鱼免疫肽fafu-c及其制备方法。

背景技术：

1、免疫调节功能是活性肽一种重要的活性功能，通过在天然食物原料中提取出其中的免疫调节肽，可制成保健品或营养品用以提高人体免疫力。近年来，有大量关于海洋生物中提取生物活性肽对机体免疫调节功能进行研究。这些海洋性多肽在研究中表现出不同的活性，包括心脏保护、抗高血压、抗癌、抗糖尿病和抗氧化等。由于上述原因，海洋生物活性肽被认为是预防和治疗疾病的重要候选者。fangmiaoyu等从青蛤中提取五肽，作用于免疫低下小鼠，发现有显著的免疫作用；houhu等从鳕鱼骨架中用胰蛋白酶提取具有免疫活性的多肽；zhexinren等从鮟鱇鱼鱼卵中提取的多肽具有良好的免疫调节作用。

2、带鱼(trichiurus lepturus)又称刀鱼或裙带，属于硬骨鱼纲鲈形目带鱼科，体形狭长，呈银白色，肉质细嫩，味道鲜美，广泛分布于太平洋沿岸、印度洋等地区。带鱼因其营养价值高及价格低廉等特点，成为最受消费者欢迎的食用鱼之一，但其作为蛋白来源用于提取制备免疫活性肽的研究鲜为报道。

3、吡虫啉(imidacloprid)是一种烟碱类杀虫剂，由于其土壤持久性低、施用量少、杀虫活性高，是近十年来在世界范围内广泛使用的作物保护杀虫剂。吡虫啉的广泛使用可能导致这种杀虫剂的残留物在食物链中被循环利用。据报道，人体暴露于吡虫啉可能会导致心脏、肾脏和其他器官损伤，动物暴露于残留浓度的农药可直接或参与应激机制/神经内分泌系统导致免疫抑制。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种一种缓解吡虫啉诱导免疫损伤的带鱼免疫肽fafu-c及其制备方法。

2、为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

3、一种缓解吡虫啉诱导免疫损伤的带鱼免疫肽fafu-c，所述带鱼免疫肽fafu-c的氨基酸序列为asn-gln-val-ala-met-asn-pro-thr-asn-thr-val-phe-asp-ala-lys。

4、进一步的，上述带鱼免疫肽fafu-c的分子量为2002.2da。

5、进一步的，上述带鱼免疫肽fafu-c来源于带鱼鱼肉天然提取或人工合成。

6、上述一种带鱼免疫肽fafu-c的制备方法，其包括以下步骤：

7、1)将带鱼鱼肉绞碎成肉糜后与异丙醇按1：1w/w的比例混合，60℃孵育120min，以便于去除脂肪，然后用蒸馏水将带鱼肉糜冲洗至无异丙醇味，30-32℃下风干至无水滴，研磨成粉末，得脱脂鱼肉粉；

8、2)将脱脂鱼肉粉与蒸馏水按1：4w/v的比例混合，加入胰蛋白酶，胰蛋白酶与脱脂鱼肉粉的比为2000u/g，35℃酶解4h，得酶解产物；

9、3)将酶解产物沸水浴灭酶15min，8000rpm、4℃离心20min，收集上清液，得酶解液；

10、4)将酶解液的ph调到7.0，采用3kda超滤膜进行超滤处理，收集分子量小于3kda部分，冷冻干燥，得粗带鱼免疫肽；

11、5)将粗带鱼免疫肽加水配成溶液，用sephadexg-25凝胶色谱进行分离，以超纯水为洗脱液，流速1ml/min，检测波长280nm，收集保留时间为60min的洗脱峰，冷冻干燥，得带鱼免疫肽fafu-c。

12、上述一种带鱼免疫肽fafu-c在制备缓解吡虫啉诱导的免疫损伤的药物中的应用。

13、本发明的有益效果在于：

14、1)本发明以带鱼为原料，通过酶解制备带鱼免疫活性肽粗品，采用超滤、sephadexg-25凝胶柱层析分离纯化，以巨噬细胞raw264.7细胞增值能力以及吞噬能力为评价指标，得到免疫活性高的免疫肽fafu-c。本发明采用超高效液相色谱联用电喷雾-组合型离子阱orbitrap质谱仪进行分析鉴定，获得了一种新型的免疫肽序列。

15、2)本发明通过吡虫啉成功建立免疫损伤模型小鼠，以带鱼为原料制成的免疫肽fafu-c，具有作用条件温和，产品安全性高，并且通过酶的专一性还可以生产特定肽，可缓解经吡虫啉诱导的小鼠免疫损伤，为进一步研究其免疫调节作用机制提供参考，引发人们对农残问题的思考，关注农药残留所带来的危害。

技术特征：

1.一种缓解吡虫啉诱导免疫损伤的带鱼免疫肽fafu-c，其特征在于：所述带鱼免疫肽fafu-c的氨基酸序列为asn-gln-val-ala-met-asn-pro-thr-asn-thr-val-phe-asp-ala-lys。

2.根据权利要求1所述的带鱼免疫肽fafu-c，其特征在于：所述带鱼免疫肽fafu-c的分子量为2002.2da。

3.根据权利要求1所述的带鱼免疫肽fafu-c，其特征在于：所述带鱼免疫肽fafu-c来源于带鱼鱼肉天然提取或人工合成。

4.一种如权利要求1所述的带鱼免疫肽fafu-c的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

5.如权利要求1所述的带鱼免疫肽fafu-c在制备缓解吡虫啉诱导的免疫损伤的药物中的应用。

技术总结本发明属于免疫类生物制品技术领域，具体涉及一种缓解吡虫啉诱导免疫损伤的带鱼免疫肽FAFU‑C及其制备方法。本发明所述带鱼免疫肽FAFU‑C的氨基酸序列为Asn‑Gln‑Val‑Ala‑Met‑Asn‑Pro‑Thr‑Asn‑Thr‑Val‑Phe‑Asp‑Ala‑Lys。使用吡虫啉对小鼠进行干预，其免疫功能受到损伤，表明吡虫啉建立免疫损伤模型小鼠具有一定的可行性，而本发明本发明所述带鱼免疫肽FAFU‑C可缓解经吡虫啉诱导的小鼠免疫损伤。技术研发人员：胡嘉淼,侯若婷,何欣,张怡,林少玲受保护的技术使用者：福建农林大学技术研发日：技术公布日：2024/6/18