一种乳腺癌标志物circRNA及其应用

本发明属于生物医药领域，尤其涉及一种乳腺癌标志物circrna及其应用。

背景技术：

1、本部分的陈述仅仅是提供了与本发明相关的背景技术信息，不必然构成在先技术。

2、乳腺癌是世界范围内最常见的恶性肿瘤，也是女性癌症相关死亡的第二大原因。转移是影响乳腺癌患者预后的最重要因素，转移性乳腺癌患者的5年生存率仅为25％。三阴性乳腺癌(tnbc)是乳腺癌的组织学亚型之一，表现为雌激素受体(er)、孕激素受体(pr)阴性表达，人表皮生长因子受体-2(her-2)无扩增。tnbc具有进展快、侵袭性强、远处转移潜能高、预后差的特点，且占转移性乳腺癌的50％以上。更好地了解乳腺癌进展转移的分子机制，对于提高患者预后至关重要。

3、在肿瘤发生与进展过程中，为了满足快速增殖和转移的需要，肿瘤细胞的代谢模式常常由氧化磷酸化向有氧糖酵解转变，称warburg效应(瓦博格效应)。研究发现，有氧糖酵解与多种肿瘤的高转移潜能及不良预后密切相关，因此也是探究乳腺癌进展转移分子机制的重要切入点。

4、环状rna(circular rna,circrna)是一种新发现的非编码rna，是由前体mrna反向剪接而形成的共价闭合转录本。circrnas具有高稳定性、高丰度、高度保守的特点,且被报道参与多种癌症相关的生物过程。基于以上特征，circrna正在成为潜在的诊断、预后指标及治疗靶点。也有望为提升乳腺癌的诊疗效果提供重要靶点。

5、但是关于warburg效应在乳腺癌细胞中是否与环状rna存在关系，进而调控乳腺癌的发生与发展目前尚不可知。

技术实现思路

1、本发明旨在探究环状rna在乳腺癌疾病发生发展中的作用，及环状rna在乳腺癌细胞的有氧糖酵解转变中的功能，提供环状rna在作为乳腺癌预后标志物及治疗靶点中的应用。

2、具体地，本发明的技术方案如下：

3、本发明的第一方面，提供了一种乳腺癌预后标志物，所述标志物为circrna，命名为circsipa1l3；

4、其中，circsipa1l3序列如seq id no.1所示。

5、seq id no.1：

6、tatggctgtgacccgatccaaagacgctcctcctttcggcccccccatccccagtggaaccacattccgcaaatccgacgtcttcagagacttcttgctggccaaggtgattaacgctgagaacgccgcgcacaagtccgacaagttccacaccatggccaccaggacccgccaggagtatctcaaggacctggccgaaaactgtgtctccaacacccccatcgactccaccggcaaattcaacctcatctccctgacctccaagaagaaggaaaagacaaaagcacgggctggcgctgagcagcacagtgcaggggccatcgcctggagggtggtggcccaggactacgcccagggggtggaaatcgactgcattttgggaatttccaatgagtttgtggtgctcctggacttacgcaccaaggaggtggtgttcaactgctactgcggggatgtcattggctggactccagactcctccacactcaaaatcttctatggacgaggagaccacatcttcctacaggcgacagagggttctgtggaggacataagggagatagtgcagagactgaag

7、本发明的一些实施方式中，发明人发现，通过检测乳腺癌标本中circsipa1l3的表达状况，有助于评估乳腺癌患者预后情况，尤其三阴性乳腺癌细胞的干性；表现为，circsipa1l3高表达则三阴性乳腺癌细胞的干性受到促进，具体表现为三阴性乳腺癌组织中的表达量高于健康供者，且高于其他分型的乳腺癌组织。

8、本发明的第二方面，提供检测circsipa1l3表达水平的物质在制备用于诊断、检测、监测或预测乳腺癌进展的产品中的应用。

9、本发明的第三方面，提供抑制circsipa1l3表达和/或使其活性降低的物质在如下a1)-a6)至少一种中的应用：

10、a1)抑制乳腺癌细胞增殖或制备抑制乳腺癌细胞增殖的产品；

11、a2)抑制乳腺癌细胞的细胞干性或制备抑制乳腺癌细胞的细胞干性的产品；

12、a3)抑制乳腺癌细胞有氧糖酵解转变或制备抑制乳腺癌细胞氧糖酵解转变的产品；

13、a4)抑制乳腺癌生长或/或侵袭或制备抑制乳腺癌生长或/或侵袭的产品；

14、a5)治疗乳腺癌或制备治疗乳腺癌的产品。

15、进一步的，本发明研究发现，敲减circsipa1l3后，细胞干性相关marker的表达受到抑制，进而影响乳腺癌细胞增殖、侵袭、转化等恶性表型。

16、所述产品可以为药物或者实验试剂，所述实验试剂可供基础研究使用。

17、根据本发明，当所述产品为药物时，所述药物还包括至少一种药物非活性成分。

18、所述药物非活性成分可以是药学上通常使用的载体、赋形剂及稀释剂等。而且，根据通常的方法，可以制作成粉剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、混悬剂、乳剂、糖浆剂、喷雾剂等的口服剂、外用剂、栓剂及无菌注射溶液形式的剂型使用。

19、所述可以包含的载体、赋形剂及稀释剂等非药物活性成分在领域内是熟知的，本领域普通技术人员能够确定其符合临床标准。

20、本发明的具体实施方式中，所述抑制circsipa1l3表达和/或使其活性降低的物质包括针对抑制circsipa1l3的rna干扰分子或反义寡核苷酸、小分子抑制剂、shrna，实施慢病毒感染或基因敲减的物质。

21、优选的，所述抑制circsipa1l3表达和/或使其活性降低的物质包括sirna。

22、更优选的，所述sirna的核酸序列如seq id no.2所示，为“agacugaaguauggcugug”或如seq id no.3所示，为“cugaaguauggcugugacc”。

23、所述sirna可以以核酸片段的形式发挥抑制功能，可以以质粒的形式发挥抑制功能，也可以直接连接到aav载体上发挥抑制功能或通过转染脂质体发挥功能，还可以以能够表达sirna的宿主细胞发挥抑制功能。

24、相应的，本发明的第四方面，提供一种核酸片段、重组载体或宿主细胞，所述核酸片段、重组载体或宿主细胞包含和/或表达如上seq id no.2或seq id no.3所示的sirna。

25、本发明的第五方面，提供一种抗肿瘤的药物，所述药物包含第四方面所述核酸片段、重组载体或宿主细胞；所述肿瘤包括乳腺癌。

26、本发明的具体实施方式中，所述药物还包括其他具有抗肿瘤活性的成分；

27、或，所述抗肿瘤药物中，还包括用于第四方面所述的宿主活性的缓冲试剂；

28、或，所述抗肿瘤药物中，还包括药学上所必需的载体。

29、本发明的具体实施方式中，所述其他抗肿瘤活性成分包括紫杉醇、阿霉素、顺铂、丝裂霉素、氟尿嘧啶、吉西他滨或酪氨酸激酶抑制剂。

30、本发明的具体实施方式中，所述抗肿瘤药物包括抗肿瘤模型药物；

31、或，所述抗肿瘤药物包括抗脑肿瘤、抗口腔肿瘤、抗肺癌、抗胃癌、抗肝癌、抗肠道癌症、抗膀胱癌、抗子和/或宫肿瘤或抗骨肉瘤的制剂。

32、优选地，本发明的药物可通过已知的方式施用至体内。例如通过静脉全身递送或者局部注射递送到感兴趣组织中。可选地经由静脉内、经皮、鼻内、粘膜或其他递送方法进行施用。这样的施用可以经由单剂量或多剂量来进行。本领域技术人员理解的是，本发明中有待施用的实际剂量可以在很大程度上取决于多种因素而变化，如靶细胞、生物类型或其组织、待治疗受试者的一般状况、给药途径、给药方式等等。

33、优选地，所述药物施用对象可以是人和非人哺乳动物，如小鼠、大鼠、豚鼠、兔、狗、猴、猩猩等。

34、以上一个或多个技术方案存在以下有益效果：

35、本发明首次证明了circsipa1l3在乳腺癌细胞中表达量升高，且与细胞干性呈负相关；同时采用circsipa1l3 sirna转染乳腺癌细胞可显著抑制乳腺癌细胞的circsipa1l3表达水平，circsipa1l3的沉默抑制了乳腺癌细胞的细胞干性，抑制乳腺癌细胞的增殖和迁移，抑制乳腺癌细胞有氧糖酵解过程过程，抑制有氧糖酵解产物乳酸分泌量以及细胞atp产生量。可作为一个新的用于预防和/或治疗乳腺癌的靶点，可作为一种有效的药物用于预防和/或治疗乳腺癌。

36、总之，上述技术方案为寻找乳腺癌临床诊断和预后评估的生物标志物及药物治疗靶点提供了新的视野，为相关药物研发奠定了基础，对于乳腺癌的研究、治疗具有重要的意义，因此具有良好的实际应用之价值。

37、本发明附加方面的优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。