一种鸭疫里默氏菌噬菌体和其组合物、试剂盒及其应用的制作方法

本发明涉及噬菌体，尤其是涉及一种鸭疫里默氏菌噬菌体和其组合物、试剂盒及其应用。

背景技术：

1、鸭疫里默氏菌(riemerellaanatipestifer)(也称鸭疫里默氏杆菌)是危害养鸭业的重要致病菌，药物在该病的预防和治疗方面发挥了重要作用。但药物的不规范使用已导致耐药性鸭疫里默氏菌菌株的出现，使众多的治疗鸭疫里默氏菌感染病症的药物失效。药物滥用和细菌耐药性增加互为因果式地发展，导致鸭源食品中药物残留超标；药物排泄也给生态环境带来不利影响。因此，利用噬菌体来防治病原菌重新受到人们的高度关注。

2、噬菌体是一类专性寄生或感染细菌的病毒，它们广泛存在于自然界中。烈性噬菌体可以在敏感宿主菌胞内增殖，最后裂解宿主菌释放出子代噬菌体，从而达到破坏宿主菌的作用。在生产中，烈性噬菌体广泛应用于杀灭各种病原细菌，尤其是利用其治疗泛耐药的“超级细菌”引起的感染，取得了良好的效果。

3、现有公开号为cn112458202a的国内发明申请，公开了一株鸭疫里默氏菌烈性噬菌体，其保藏编号为：cgmccno.2908，该株噬菌体鸭疫里默氏菌敏感的烈性噬菌体命名为rap37，适合生存的ph为5～7。

4、然而，噬菌体在杀菌过程中也有其不利的因素，杀菌过程中的温度条件、ph条件也会对噬菌体的杀菌效果产生影响。随着微生物的近代演化，在恶劣环境下的生存能力增强，鸭疫里默氏菌噬菌体往往极难满足临床治疗的需要。

技术实现思路

1、为了改善现有现有的鸭疫里默氏菌噬菌体在碱性环境下的杀菌效果降低的情况，本技术提供了一种鸭疫里默氏菌噬菌体和其组合物、试剂盒及其应用。

2、第一方面，本技术提供一种鸭疫里默氏菌噬菌体，所述鸭疫里默氏菌噬菌体为鸭疫里默氏菌噬菌体20yy-140(riemerellaanatipestiferphage20yy-140)，所述鸭疫里默氏菌噬菌体20yy-140具有seq id no.1所示的核苷酸序列，保藏编号为cctcc no：m2021918，所述鸭疫里默氏菌噬菌体20yy-140在ph为6～11范围内处理96h后效价无变化。

3、通过上述技术方案，提供了耐碱的鸭疫里默氏菌噬菌体。

4、本发明在一较佳示例中可以进一步配置为：效价为103～106pfu/ml的鸭疫里默氏菌噬菌体20yy-140对鸭疫里默氏菌的灭菌率达94％以上。

5、通过上述技术方案，鸭疫里默氏菌噬菌体20yy-140具有较高的灭菌率。

6、本发明在一较佳示例中可以进一步配置为：所述鸭疫里默氏菌噬菌体20yy-140在moi＝0.01条件下培养8h，其效价达1010pfu/ml。

7、通过上述技术方案，表明采用较少的原始噬菌体就可以繁殖培育出大量的鸭疫里默氏菌噬菌体20yy-140。

8、本发明在一较佳示例中可以进一步配置为：初始效价为109pfu/ml的鸭疫里默氏菌噬菌体20yy-140在60℃下水浴48h，其效价仍不低于107pfu/ml。

9、本发明在一较佳示例中可以进一步配置为：所述鸭疫里默氏菌噬菌体20yy-140具有一呈多面体对称的头部和细长的尾部，头部长53～58nm，头部横径长47～50nm，尾部长180～210nm，尾部宽5～8nm。

10、通过上述技术方案，表明鸭疫里默氏菌噬菌体20yy-140属于细菌病毒双股dna病毒群尾病毒目(caudovirales)长尾病毒科(siphoviridae)。

11、第二方面，本技术提供一种含有上述的鸭疫里默氏菌噬菌体的组合物，组合物中至少含有所述鸭疫里默氏菌噬菌体20yy-140。

12、本发明在一较佳示例中可以进一步配置为：所述组合中还包括以下组分中的一种：大肠杆菌噬菌体ec35p1(escherichia coli phage ec35p1)，保藏编号为cctcc no：m2020438；短尾噬菌体bp-14(podoviridae sp.bp-14)，保藏编号为cctcc no：m 2015143；终浓度为0.05％的二氯异氰尿酸溶液；终浓度为0.05％的戊二醛癸甲溴铵；终浓度为0.1％的高锰酸钾消毒液。

13、通过上述技术方案，鸭疫里默氏菌噬菌体20yy-140裂解谱较广，可以与其他噬菌体组合联用，满足特异性需求。

14、将鸭疫里默氏菌噬菌体20yy-140和其他噬菌体联合使用，以获得对目标细菌更好的杀灭效果。作为示例性的说明，鸭疫里默氏菌噬菌体20yy-140与其他噬菌体之间的比例关系可以由本领域技术人员结合本发明以及实际的应用领域以及本领域常识进行确定。

15、第三方面，本技术提供一种含有上述鸭疫里默氏菌噬菌体的试剂盒。

16、通过上述技术方案：试剂盒可应用鸭疫里默氏菌的快速检测，其包括但不限于以试纸、试剂盒等形式对目标样本中的鸭疫里默氏菌进行检测，或对临床样本中的目标致病菌进行筛选，可有效确保检测的灵敏度。

17、第四方面，本技术提供一种上述的鸭疫里默氏菌噬菌体的应用。本发明的上述发明目的之四是通过以下技术方案得以实现的：鸭疫里默氏菌噬菌体20yy-140用作于生物杀菌剂。

18、通过采用上述技术方案，鸭疫里默氏菌噬菌体可以用作为日常的杀菌剂，可以特异性地杀灭环境中的鸭疫里默氏菌，改善环境中的微生物分布；也可以用作在畜禽产品养殖、运输及保存的生物杀菌剂，用于防治在畜禽养殖、运输及保存过程中致病性的鸭疫里默氏菌污染。

19、综上所述，本发明包括以下至少一种有益技术效果：

20、1.本发明的鸭疫里默氏菌噬菌体20yy-140具有良好的耐碱性能，在ph为6～11范围内处理96h后效价无显著变化；

21、2.本发明鸭疫里默氏菌噬菌体20yy-140是从自然界中分离的烈性噬菌体，经毒理实验证明其安全、无任何副作用；供试噬菌体不含毒力基因或不良基因；本发明未对供试噬菌体进行任何遗传修饰；

22、3.本发明鸭疫里默氏菌噬菌体20yy-140，其效价为103～106pfu/ml时对鸭疫里默氏菌的灭菌率达到94％以上，对鸭疫里默氏菌具有广谱的杀菌能力；

23、4.本发明鸭疫里默氏菌噬菌体20yy-140可用于制备试剂盒；可应用于鸭疫里默氏菌的快速检测，其包括但不限于以试纸、试剂盒等形式对目标样本中的鸭疫里默氏菌进行检测，或对临床样本中的目标致病菌进行筛选，可有效确保检测的灵敏度；

24、5.本发明的鸭疫里默氏菌噬菌体20yy-140可以单独或混合使用，用作为生物杀菌剂；

25、6.本发明的鸭疫里默氏菌噬菌体20yy-140可以应用于工业生产，可由宿主菌特异性扩增，可应用标准病毒纯化方法高度纯化，具有极好的推广前景；

26、7.本领域技术人员可以根据本发明的记载及本领域常识将本发明所述鸭疫里默氏菌噬菌体20yy-140或其组合物制备成应用于医疗，检测，消毒及食品防护等方面的各种产品加以工业应用。