一种有助于聚乙二醇清肠后肠道菌群稳态恢复的复合微生态制剂

本发明涉及一种有助于聚乙二醇清肠后肠道菌群稳态恢复的复合微生态制剂，属于微生物技术以及医药。

背景技术：

1、聚乙二醇作为常用的渗透性泻剂，在临床上广泛应用于清肠过程。清肠是肠镜检查前的一个关键步骤，服用聚乙二醇诱导的渗透性腹泻来排空肠道内容物，可以保证镜检的准确率。临床调研表明，30％以上的患者在聚乙二醇清肠后会出现腹痛、腹胀等症状，可能会影响人体正常工作和生活。近年来的研究表明，这些不良反应的发生与肠道菌群稳态的破坏显著相关。

2、菌群稳态破坏后比较有效的恢复方法包括调整饮食结构、服用益生菌、使用特定的微生物群落进行干预和粪便微生物区系移植等。目前通过饮食干预来调节肠道菌群的主要方法是补充不消化淀粉。诸如菊粉、纤维素等膳食纤维就常被用于肠道菌群的恢复调节。补充益生菌也是一种直接有效的恢复策略。到目前为止，肠道菌群稳态恢复策略的实际作用效果并不令人满意，这是由于单一的恢复策略无法应对复杂的肠道稳态破坏情况，对于肠道菌群稳态破坏的恢复需要有针对性地制定合适的恢复方法。鉴于目前研究的问题，探寻一种新的有效恢复清肠后菌群稳态的方法显得尤为重要。

技术实现思路

1、为了解决现有技术存在的不足，本发明提供了一种复合微生态菌剂，可以有效恢复聚乙二醇导致的肠道微生物稳态紊乱。

2、本发明提供了一株青春双歧杆菌(bifidobacterium adolescentis)ccfm1322，已于2023年8日4日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为gdmcc no:63718，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，广东省科学院微生物研究所。

3、所述青春双歧杆菌(bifidobacterium adolescentis)ccfm1322来自于来自健康人的新鲜粪便，对菌株的16s rdna序列进行扩增和测序，其16s rdna序列如seq id no.1所示，将测序得到的序列在ncbi genbank中进行核酸序列比对，结果显示菌株为青春双歧杆菌，命名为青春双歧杆菌(bifidobacterium adolescentis)ccfm1322。

4、所述青春双歧杆菌(bifidobacterium adolescentis)ccfm1322的菌体特征：革兰氏染色阳性杆状细菌，无芽孢形成。

5、所述青春双歧杆菌(bifidobacterium adolescentis)ccfm1322的菌落特征：在改良mrs固体培养基上的菌落呈瓷白色，圆形凸起，湿润，边缘整齐光滑。

6、所述青春双歧杆菌(bifidobacterium adolescentis)ccfm1322的生长特性：该菌株为严格厌氧菌，对氧气敏感，在37℃生长最佳。

7、本发明提供了一株嗜酸乳杆菌(lactobacillus acidophilus)ccfm1323，已于2023年8日4日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为gdmcc no:63719，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，广东省科学院微生物研究所。

8、所述嗜酸乳杆菌(lactobacillus acidophilus)ccfm1323来自于来自健康人的新鲜粪便，对菌株的16s rdna序列进行扩增和测序，其16s rdna序列如seq id no.2所示，将测序得到的序列在ncbi genbank中进行核酸序列比对，结果显示菌株为嗜酸乳杆菌，命名为嗜酸乳杆菌(lactobacillus acidophilus)ccfm1323。

9、所述嗜酸乳杆菌(lactobacillus acidophilus)ccfm1323的菌体特征：革兰氏染色阳性杆状细菌，极少以分叉状、弯杆状的形态呈现，无芽孢形成。

10、所述嗜酸乳杆菌(lactobacillus acidophilus)ccfm1323的菌落特征：在mrs固体培养基上的菌落较小，微微隆起，不规则，呈圆形，乳白色，光滑，有光泽。

11、所述嗜酸乳杆菌(lactobacillus acidophilus)ccfm1323的生长特性：该菌株为严格厌氧菌，在37℃生长最佳，最适ph值为5.5-6.0，耐酸性强。

12、本发明提供了一株植物乳植杆菌(lactiplantibacillus plantarum)ccfm1324已于2023年8日4日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为gdmcc no:63720，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，广东省科学院微生物研究所。

13、所述植物乳植杆菌(lactiplantibacillus plantarum)ccfm1324来自于来自健康人的新鲜粪便，对菌株的16s rdna序列进行扩增和测序，其16s rdna序列如seq id no.3所示，将测序得到的序列在ncbi genbank中进行核酸序列比对，结果显示菌株为植物乳植杆菌，命名为植物乳植杆菌(lactiplantibacillus plantarum)ccfm1324。

14、所述植物乳植杆菌(lactiplantibacillus plantarum)ccfm1324的菌体特征：革兰氏染色阳性杆状细菌，极少以分叉状、弯杆状的形态呈现，无芽孢形成。

15、所述植物乳植杆菌(lactiplantibacillus plantarum)ccfm1324的菌落特征：在mrs固体培养基上的菌落呈乳白色，圆形凸起，湿润，边缘整齐光滑。

16、所述植物乳植杆菌(lactiplantibacillus plantarum)ccfm1324的生长特性：该菌株为严兼性厌氧菌，在37℃生长最佳。

17、本发明提供了一种复合制剂，所述复合制剂包括青春双歧杆菌或其后生元、嗜酸乳杆菌或其后生元、植物乳植杆菌或其后生元中的至少一种。

18、在一种实施方式中，所述青春双歧杆菌的后生元包括青春双歧杆菌的发酵液或其冻干粉或其灭活的菌体或其裂解物；所述嗜酸乳杆菌的后生元包括嗜酸乳杆菌的发酵液或其冻干粉或其灭活的菌体或其裂解物；所述植物乳植杆菌的后生元包括植物乳植杆菌的发酵液或其冻干粉或其灭活的菌体或其裂解物。

19、在一种实施方式中，所述发酵液是将所述青春双歧杆菌ccfm1322或嗜酸乳杆菌ccfm1323或植物乳植杆菌ccfm1324接种于发酵培养基，培养后收集得到的发酵上清或发酵菌体。

20、在一种实施方式中，所述冻干粉是将含有所述青春双歧杆菌ccfm1322或嗜酸乳杆菌ccfm1323或植物乳植杆菌ccfm1324的菌液通过常规冷冻干燥工艺制备或其他工艺制备所得到的冻干粉。

21、在一种实施方式中，所述灭活的菌体是将所述青春双歧杆菌ccfm1322或嗜酸乳杆菌ccfm1323或植物乳植杆菌ccfm1324经过灭活处理得到的灭活细胞，所述灭活处理可以为热处理或冻干处理。

22、在一种实施方式中，所述裂解物是将所述青春双歧杆菌ccfm1322或嗜酸乳杆菌ccfm1323或植物乳植杆菌ccfm1324经过破碎得到的破碎物。

23、在一种实施方式中，所述青春双歧杆菌包括青春双歧杆菌(bifidobacteriumadolescentis)ccfm1322；所述嗜酸乳杆菌包括嗜酸乳杆菌(lactobacillus acidophilus)ccfm1323；所述植物乳植杆菌包括植物乳植杆菌(lactiplantibacillus plantarum)ccfm1324。

24、在一种实施方式中，所述复合制剂中，青春双歧杆菌ccfm1322、嗜酸乳杆菌ccfm1323或植物乳植杆菌ccfm1324的活菌数不低于1×108cfu/ml或1×108cfu/g；

25、或制备所述后生元所使用的所述青春双歧杆菌或嗜酸乳杆菌或植物乳植杆菌的活菌数不低于1×108cfu/ml或1×108cfu/g。

26、在一种实施方式中，所述复合制剂中还含有低聚半乳糖，牛磺酸或其药学可接受的盐，和天冬氨酸其药学可接受的盐。

27、在一种实施方式中，所述药学可接受的盐包括但不限于牛磺酸或天冬氨酸的金属盐，例如钙盐、镁盐、钠盐、钾盐或铁盐，或者所述药学可接受的盐包括但不限于牛磺酸或天冬氨酸的有机盐，例如铵盐。

28、在一种实施方式中，所述复合制剂中，按质量份数计，所述青春双歧杆菌ccfm1322添加量为1～20份，所述嗜酸乳杆菌ccfm1323添加量为1～20份，所述植物乳植杆菌ccfm1324添加量为1～20份，所述低聚半乳糖添加量为1～50份，所述牛磺酸添加量为1～20份，所述天冬氨酸添加量为1～20份。

29、在一种实施方式中，所述复合制剂含有：(1-5)×1010cfu/ml的青春双歧杆菌ccfm1322，(1-5)×1010cfu/ml的嗜酸乳杆菌ccfm1323，(1-5)×1010cfu/ml植物乳植杆菌ccfm1324，50-500mg/ml的低聚半乳糖，5-50mg/ml的牛磺酸，和5-50mg/ml的天冬氨酸。可选的，所述复合制剂含有：2.5×1010cfu/ml的青春双歧杆菌ccfm1322，2.5×1010cfu/ml的嗜酸乳杆菌ccfm1323，2.5×1010cfu/ml的植物乳植杆菌ccfm1324，150mg/ml的低聚半乳糖，12.5mg/ml的牛磺酸和12.5mg/ml的天冬氨酸。

30、本发明还提供了一种产品，所述产品中含有所述复合制剂。

31、在一种实施方式中，所述产品为食品、药品或保健品。

32、在一种实施方式中，所述青春双歧杆菌ccfm1322在产品中的活菌数不低于1×108cfu/ml或1×108cfu/g；所述嗜酸乳杆菌ccfm1323在产品中的活菌数不低于1×108cfu/ml或1×108cfu/g；所述植物乳植杆菌ccfm1324在产品中的活菌数不低于1×108cfu/ml或1×108cfu/g。

33、在一种实施方式中，所述药品包括上述复合制剂，或上述复合制剂及其在药学上可接受的载体。

34、在本发明的一种实施方式中，在所述药品中，以重量分数计，所述复合制剂的添加量是所述药品重量的15～35％，或20～30％。

35、在一种实施方式中，所述在药学上可接受的载体是选自药学上通常使用的填充剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、润滑剂及矫味剂中的一种或多种。

36、在一种实施方式中，所述填充剂包括淀粉、蔗糖、乳糖、硫酸钙或微晶纤维素中的至少一种。

37、在一种实施方式中，所述粘合剂包括纤维素衍生物、藻酸盐、明胶或聚乙烯吡咯烷酮中的至少一种。

38、在一种实施方式中，所述润湿剂包括水、乙醇、淀粉或糖浆中的至少一种。

39、在一种实施方式中，所述崩解剂包括羧甲基淀粉钠、羧丙纤维素、交联羧甲基纤维素、琼脂、碳酸钙或碳酸氢钠中的至少一种。

40、在一种实施方式中，所述润滑剂为滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、微粉硅胶或聚乙二醇中的至少一种。

41、在一种实施方式中，所述矫味剂包括单糖浆、蔗糖、卵磷脂、橙皮糖浆、樱桃糖浆、柠檬、茴香、薄荷油、海藻酸钠、阿拉伯胶、明胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、柠檬酸、酒石酸或碳酸氢钠中的至少一种。

42、在一种实施方式中，所述药品的剂型包括粉剂、颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂或口服液。

43、本发明还提供了上述复合制剂在制备有助于调节肠道菌群的食品或药品中的应用。

44、本发明的有益效果：

45、1、本发明所述的复合制剂含有青春双歧杆菌(bifidobacterium adolescentis)ccfm1322、嗜酸乳杆菌(lactobacillus acidophilus)ccfm1323、植物乳植杆菌(lactiplantibacillus plantarum)ccfm1324、低聚半乳糖、牛磺酸和天冬氨酸，具有以下性质：

46、(1)能够恢复清肠后个体肠道菌群的丰富度与均匀度，复合微生态制剂处理后个体的菌群丰富度在清肠后提升了2倍左右，显著抑制了清肠导致的均匀度下降；β多样性在清肠前后更是几乎没有变化，表明复合微生态制剂使用能够有效缓解清肠导致的菌群差异增加。复合微生态制剂的上述作用效果显著高于配方1组(青春双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、植物乳植杆菌、低聚半乳糖)以及配方2组(牛磺酸、天冬氨酸)的加和。

47、(2)能够提升清肠后个体肠道菌群的营养物质利用、物质转运等代谢功能。其中，复合微生态制剂使用后，上述基因中出现表达水平显著增强的个数高于配方1组和配方2组之和。

48、2、本发明通过益生菌与益生元协同发挥清肠后恢复菌群稳态的作用。由于本发明所使用的益生菌与益生元均为可用于食品的添加物，因此，该复合微生态制剂应用范围广，安全性高。

49、生物材料保藏

50、一株青春双歧杆菌(bifidobacterium adolescentis)ccfm1322，分类学命名为：bifidobacterium adolescentis，已于2023年8日4日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为gdmcc no:63718。

51、一株嗜酸乳杆菌(lactobacillus acidophilus)ccfm1323，分类学命名为：lactobacillus acidophilus，已于2023年8日4日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为gdmccno:63719。

52、一株植物乳植杆菌(lactiplantibacillus plantarum)ccfm1324，分类学命名为：lactiplantibacillus plantarum，已于2023年8日4日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为gdmcc no:63720。