ELP96基因和/或ELP104基因在防治青枯病中的应用

本发明属于基因工程。更具体地，涉及elp96基因和/或elp104基因在防治青枯病中的应用。

背景技术：

1、青枯病是一种由茄科劳尔氏菌(ralstonia solanacearum)侵染引起的细菌性病害，如木麻黄青枯病、烟草青枯病、番茄青枯病等，使烟草种植业、农林产业等严重减产，遭受重大经济损失。茄科劳尔氏菌繁殖速度快，传播途径多样，菌系分化明显，变异速度快，致病机理复杂，故防治难度大。目前的防治方法主要有：(1)种植抗病品种，这是目前防治青枯病最经济有效的方法，然而，随着抗病品种种植时间的延长，病原菌逐渐产生新的生理小种，克服原有品种抗性，转变为感病品种；(2)使用化学药剂，通常是将乙蒜素和农用硫酸链霉素联用，但现今农用硫酸链霉素已被禁止使用，乙蒜素单用的防治效果不足，且化学药剂还易引起病菌抗药性等问题。

2、因此，构建新的抗病品种，或者寻找不易引发病菌抗药性的防治手段，对于青枯病的防治相当重要。

技术实现思路

1、本发明针对现有技术的不足，旨在提供elp96基因和/或elp104基因在防治青枯病中的应用，将elp96基因和elp104基因分别重组、转化后得到重组工程菌，发现其不仅可作用于患病植物上以防治植物的青枯病，还可通过遗传转化技术培育得到可抗青枯病的转基因植物新品种，为防治青枯病和构建青枯病的抗病品种提供一种新选择。并且，这种方式不会使茄科劳尔氏菌形成超级细菌，不易引发茄科劳尔氏菌的抗药性，可实现持久有效、绿色安全的病害防控。

2、本发明的第一目的是提供elp96基因和/或elp104基因在防治青枯病中的应用。

3、本发明的第二目的是提供一种防治青枯病的方法。

4、本发明的第三目的是提供elp96基因和/或elp104基因在构建抗青枯病的转基因植物中的应用。

5、本发明上述目的通过以下技术方案实现：

6、本发明首先将elp96基因(登录号mf279069)和elp104基因(登录号mf279070)分别重组至pcambia1305-gfp质粒中，再将其转化至根癌农杆菌(agrobacterium tumefaciens)gv3101菌株中，最后将转化得到的重组工程菌施用于被茄科劳尔氏菌感染的植物(如烟草、番茄、木麻黄)上，发现植物抗青枯病的能力显著提升，因此，elp96基因和/或elp104基因在防治青枯病中的应用，以及elp96基因和/或elp104基因在制备防治青枯病的药物中的应用均应在本发明的保护范围之内。

7、优选地，所述青枯病为茄科劳尔氏菌引起的病害。

8、进一步优选地，所述茄科劳尔氏菌的宿主为烟草、番茄、木麻黄中的一种或几种。

9、优选地，所述防治青枯病为抑制茄科劳尔氏菌的致病性。

10、进一步优选地，所述抑制茄科劳尔氏菌的致病性为降解茄科劳尔氏菌产生的群体感应信号。

11、更优选地，所述群体感应信号为3-羟基棕榈酸甲酯(3-oh pame)。本发明试验发现elp96基因和elp104基因经重组、转化之后，可降解茄科劳尔氏菌产生的群体感应信号——3-羟基棕榈酸甲酯(3-oh pame)，抑制茄科劳尔氏菌的致病性，进而有效防治植物的青枯病。

12、优选地，所述药物还包括药学上可接受的载体或赋形剂，制成不同的剂型，如注射剂、涂抹剂或水剂等。

13、此外，本发明还提供了一种防治青枯病的方法，即采用下述一种或几种生物材料进行防治：

14、(1)elp96基因和/或elp104基因；

15、(2)含(1)的表达盒；

16、(3)含(1)和/或(2)的重组表达载体；

17、(4)含(1)、(2)和/或(3)的重组微生物。

18、优选地，所述重组表达载体为pcambia 1305-gfp。

19、优选地，所述重组微生物为根癌农杆菌，其中的根癌农杆菌可以是agrobacteriumtumefaciens gv3101菌株。

20、优选地，所述重组微生物在应用时的od600值为1.0～1.2。

21、优选地，所述防治的给药方式为接种，如通过注射法将生物材料接种于烟草上，或通过伤根灌菌法将生物材料接种于木麻黄和番茄上。

22、本发明首先将elp96基因和elp104基因分别重组到pcambia 1305-gfp质粒中，得到重组质粒1305-elp96和1305-elp104，再将重组质粒转化至根癌农杆菌gv3101菌株中获得重组工程菌gv3101-1305-elp96和gv3101-1305-elp104，最后利用重组工程菌介导的遗传转化技术培育得到可抗青枯病的转基因植物新品种，为抗青枯病的转基因植物的构建提供了一种新方法，因此，elp96基因和/或elp104基因在构建抗青枯病的转基因植物中的应用应在本发明的保护范围之内。

23、本发明具有以下有益效果：

24、本发明将elp96基因和elp104基因分别重组、转化后得到重组工程菌，发现其不仅可作用于患病植物上以防治植物的青枯病，还可通过遗传转化技术培育得到可抗青枯病的转基因植物新品种，为防治青枯病和构建青枯病的抗病品种提供一种新选择。

技术特征：

1.elp96基因和/或elp104基因在防治青枯病中的应用。

2.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述青枯病为茄科劳尔氏菌引起的病害。

3.根据权利要求2所述应用，其特征在于，所述茄科劳尔氏菌的宿主为烟草、番茄、木麻黄中的一种或几种。

4.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述防治青枯病为抑制茄科劳尔氏菌的致病性。

5.根据权利要求4所述应用，其特征在于，所述抑制茄科劳尔氏菌的致病性为降解茄科劳尔氏菌产生的群体感应信号。

6.根据权利要求5所述应用，其特征在于，所述群体感应信号为3-oh pame。

7.一种防治青枯病的方法，其特征在于，采用下述一种或几种生物材料进行防治：

8.根据权利要求7所述方法，其特征在于，所述重组表达载体为pcambia1305-gfp。

9.根据权利要求7所述方法，其特征在于，所述重组微生物为根癌农杆菌。

10.elp96基因和/或elp104基因在构建抗青枯病的转基因植物中的应用。

技术总结本发明提供了ELP96基因和/或ELP104基因在防治青枯病中的应用。本发明将ELP96基因和ELP104基因分别重组、转化后得到重组工程菌，发现其不仅可作用于患病植物上以防治植物的青枯病，还可通过遗传转化技术培育得到可抗青枯病的转基因植物新品种，为防治青枯病和构建青枯病的抗病品种提供一种新选择。并且，这种方式不会使茄科劳尔氏菌形成超级细菌，不易引发茄科劳尔氏菌的抗药性，可实现持久有效、绿色安全的病害防控。技术研发人员：周佳暖,林晓静,张炼辉受保护的技术使用者：华南农业大学技术研发日：技术公布日：2024/8/5