一种从麻黄根中制备麻黄根酚类化合物的方法及其应用

本发明涉及中医药领域，特别是特别是新的糖苷类化合物和新的黄烷醇类化合物及其在制备抗抑郁症药物中应用的一种从麻黄根中制备麻黄根酚类化合物的方法及其应用。

背景技术：

1、抑郁症作为一种精神类疾病，是社会、心理和生物因素综合作用的结果。其临床特征主要包括；情绪功能的紊乱、思维的迟缓、意志力的削弱、认知功能的损害以及社会功能的障碍。对人类的生命和日常生活质量构成了严重的威胁。在最新的临床研究中，发现抑郁症的严重程度与皮质酮水平有着密切的联系，抑郁症患者的血浆皮质酮水平普遍偏高。对于重症抑郁症患者，抗糖皮质激素治疗展现出了显著的治疗效果，治疗后他们的血浆皮质酮水平得以降低。进一步的研究还表明，血浆及脑脊液中皮质酮水平的持续升高可能在抑郁症的发病过程中发挥着关键的作用。因此，寻找潜在的抗抑郁活性的天然产物是医药学科研工作者迫切解决的技术问题。

2、麻黄根别名苦椿菜，为麻黄科(ephedraceae dumortier)麻黄属(ephedra tournex linn.)植物草麻黄(ephedra sinica stapf.)或中麻黄(ephedra intermedia schrenket c.a.mey.)的干燥根和根茎，在我国，主要分布在山西、陕西、四川等地，为传统中药，收载于《中国药典》。始见于《神农本草经》，具有治疗中风，伤寒头痛，温疟，发表出汗，去邪热气，止咳逆上气，除寒热，破积聚的功效。随着现代中医药与化学技术的快速发展，对于麻黄的研究也越来越全面。但目前对于麻黄的研究多集中在麻黄的地上部分，对麻黄的地下部分研究相对较少，而文献记载相对较早。为进一步研究麻黄根化学成分，阐明其药效物质基础，促进麻黄根的进一步开发与利用，对其化学成分进行分离和鉴定，从中分离得到2个新的糖苷类化合物和2个新的黄烷醇类化合物，采用皮质酮诱导pc-12细胞损伤模型进行化合物活性筛选，能显著改善皮质酮诱导的pc-12细胞损伤，发挥潜在的抗抑郁活性，实现在制备治疗抑郁症药物中的应用，但至今未见有公开报道。

技术实现思路

1、针对上述情况，为克服现有技术之不足，本发明之目的在于，提供一种从麻黄根中制备麻黄根酚类化合物的方法及其应用，可有效解决从从麻黄根中制备麻黄根酚类化合物，实现在制备治疗抑郁症药物中的应用问题。

2、本发明解决的技术方案是：一种从麻黄根中制备麻黄根酚类化合物，该酚类化合物为糖苷类化合物麻黄根酚i和麻黄根酚j，黄烷醇类化合物麻黄根酚k和麻黄根酚m，其分子结构式分别为：

3、

4、其中麻黄根酚i和麻黄根酚j是分子式相同的一对。

5、其制备方法是：取清除杂质的草麻黄干燥根及根茎，作为原料，加入原料重量体积15倍量的水，重量体积是指固体以kg计，液体以l计，采用煎煮法提取2次，每次2小时，合并两次提取液，减压浓缩至原料重量体积的0.100-0.102倍，得第一浸膏，第一浸膏用水分散，经diaion hp-20大孔吸附树脂柱，依次用水和乙醇进行梯度洗脱，得到水部位、体积浓度10％乙醇部位、体积浓度20％乙醇部位、体积浓度30％乙醇部位、体积浓度40％乙醇部位、体积浓度50％乙醇部位、体积浓度70％乙醇部位、体积浓度95％乙醇部位；

6、将50％乙醇部位用甲醇溶解后，采用硅胶柱层析法以体积比的样品：硅胶为1:1.2拌样，然后用体积比的二氯甲烷-甲醇系统：50:1、30:1、20:1、10:1、5:1、1:1进行梯度洗脱，每个洗脱部位用量为柱体积的10倍，2-3天/每梯度，采用茴香醛-浓硫酸喷雾检识，每50ml检识一次，合并相同流份，得到组份fr.1、fr.2、fr.3、fr.4、fr.5、fr.6，将组分fr.3经100～200目的硅胶柱色谱分离，以体积比的石油醚-乙酸乙酯：10:1、5:1、3:1梯度洗脱，tlc检识，合并相同流分得组份fr.3.1、fr.3.2、fr.3.3、fr.3.4、fr.3.5、fr.3.6，将组分fr.3.4用半制备hplc进一步分离分离，上规格型号为：250×10mm,粒径5μm,孔径12nm的5c18-ms-ⅱ色谱柱，流动相为体积比的甲醇：水＝54:46，流速3ml/min，收集保留时间tr＝16-18min的流份，浓缩干燥，得到化合物麻黄根酚k；收集保留时间tr＝20-22min的流份，浓缩干燥，得到化合物mhg-50-5-3-4-2；收集保留时间tr＝35-37min的流份，浓缩干燥，得到化合物mhg-50-5-3-4-3；化合物mhg-50-5-3-4-2用半制备hplc进一步分离分离，上规格型号为：250×10mm,粒径5μm,孔径12nm的5c18-ms-ⅱ色谱柱，流动相为体积比的乙腈：水＝27:73，流速3ml/min，收集保留时间tr＝40-42min的流份，浓缩干燥，得到化合物麻黄根酚m；

7、经水煎煮提取后的草麻黄根再用体积浓度95％乙醇用加热回流装置提取2次，每次1kg麻黄根加4l乙醇，加热回流2h，合并提取液，减压浓缩得原料重量体积1/4的第二浸膏，用水分散溶解，再依次用石油醚萃取5次，每次用量为浸膏重量体积的0.7倍，用二氯甲烷萃取10次，每次用量为浸膏重量体积的1倍，用乙酸乙酯萃取12次，每次用量为浸膏重量体积的1倍，用正丁醇萃取6次，每次用量为浸膏重量体积的0.6倍，回收溶剂，得石油醚部位、二氯甲烷部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位；

8、将乙酸乙酯部位进行硅胶柱色谱分离，采用体积比的二氯甲烷-甲醇：50:1、30:1、20:1、10:1、5:1、3:1进行梯度洗脱，3-4天/每梯度，tlc检识并合并相同流分得到组分e1、e2～e9，将组分e9减压浓缩，使用toyopearl hw-40c凝胶柱色谱，依次用体积浓度70％、80％、85％甲醇梯度洗脱，每个洗脱部位用量为柱体积的10倍，采用茴香醛-浓硫酸喷雾检识，每10ml检识一次，合并相同流份，得到组份e9-1、e9-2、e9-3、e9-4～e9-8；组分e9-4减压浓缩，使用toyopearl hw-40c凝胶柱色谱，用体积浓度70％甲醇洗脱，用量为柱体积的7倍，采用茴香醛-浓硫酸喷雾检识，每5ml检识一次，合并相同流份，得到组份er；组份er用半制备hplc粗分离，上规格型号为：250×10mm，粒径5μm，孔径12nm的5c18-ms-ⅱ色谱柱，流动相为体积比的甲醇：水＝42:58，流速3ml/min，收集保留时间tr＝8-10min的流份，浓缩干燥，得到组分er-1，收集保留时间tr＝13-16min的流份，浓缩干燥，得到组分er-2，收集保留时间tr＝18-21min的流份，浓缩干燥，得到组分er-3，收集保留时间tr＝24-26min的流份，浓缩干燥，得到组分er-4；er-3用半制备hplc进一步分离纯化，上规格型号为：250×10mm，粒径5μm，孔径12nm的5c18-ms-ⅱ色谱柱，流动相为体积比的甲醇：水＝40:60，流速3ml/min，收集保留时间tr＝17-19min的流份，浓缩干燥，得到化合物麻黄根酚i；组分er-2用半制备hplc进一步分离分离，上规格型号为：250×10mm,粒径5μm,孔径12nm的5c18-ms-ⅱ色谱柱，流动相为体积比的甲醇：水＝35:65，流速3ml/min，收集保留时间tr＝28-30min的流份，浓缩干燥，得到组分er-2-3；组分er-2-3用制备薄层色谱分离，展开剂为体积比的二氯甲烷：甲醇＝5:1，收集rf最小的暗斑色带，使用体积比为二氯甲烷：甲醇＝1:1的混合液6ml洗脱，洗脱液浓缩干燥，得到化合物麻黄根酚j。

9、该方法所制备的糖苷类化合物麻黄根酚i和麻黄根酚j、黄烷醇类化合物麻黄根酚k和麻黄根酚m在制备抗抑郁药物中的应用。

10、本发明原料丰富，制备方法易操作，产品质量好，提取效果好，纯度高，所得化合物具有抗抑郁活性，实现在制备治疗抑郁症药物中的应用，开拓了麻黄根的药用价值，有巨大的经济和社会效益。