2-αGG的制备及其在制备预防和/或治疗肝损伤产品中的应用的制作方法

本发明属于生物医药领域，具体地涉及2-αgg的制备及其在制备治疗和/或预防肝损伤产品中的应用。

背景技术：

1、甘油葡萄糖苷(2-o-α-d-glucopyranosyl-sn-glycerol，2-αgg)广泛存在于植物、细菌和藻类中，具有高保湿、抗氧化和抗衰老的能力，而成为化妆品中一种很有前途的保湿成分。此外，这种物质具有低甜味、益生元特性和蛋白质稳定功能，在人类保健和医药工业中具有良好的应用前景。现阶段大部分的2-αgg都是由蔗糖磷酸化酶生产得到的。

2、非酒精性脂肪肝病(nafld)是一种发病机制尚不明确的代谢性疾病，具有多种临床表现，其疾病谱广泛，包括非酒精性脂肪性肝炎(nash)、肝硬化，甚至可能发展为肝细胞癌，这种病症以三酰甘油(甘油三酯，tg)在肝细胞内的沉积为主要特征，肝细胞内甘油三酯的过度沉积不仅导致肝功能和结构受损，还会增加患者患上慢性肾病、心脏血管病变或糖尿病等其他系统疾病的风险。这使得nafld的治疗非常重要。hepg2细胞是从原发性肝癌中分离和建立的，其增殖能力强，分化程度高，而且容易培养，所生产的代谢酶具有较好的转化特性，能够在药理上维持较好的稳定性，因此在体外进行肝细胞的代谢和遗传毒性实验。

技术实现思路

1、本发明针对上述技术问题提供一种2-αgg的制备方法及其在制备治疗和/或预防肝损伤产品中的应用。

2、本发明是通过如下技术方案来实现的：

3、本发明的技术方案之一在于提供一种甘油葡糖苷的制备方法，所述方法是由蔗糖磷酸化酶催化蔗糖和甘油生成。

4、作为更进一步优选的实施方式，蔗糖磷酸化酶重组菌使用κ-卡拉胶固定化；具体的固定化方法：将κ-卡拉胶溶解在预热的0.9％nacl溶液中，κ-卡拉胶的浓度2％(w/v)；将含有蔗糖磷酸化酶的重组大肠杆菌bl21/pet24a-suc75290的湿细胞在0.9％nacl中重悬，配制0.12mg/ml的菌悬液，并将其与κ-卡拉胶溶液以2:3的体积比混合，将混合液放在冰上15min固化，得到的凝胶在0.3mol/l的kcl溶液中浸泡，切成小块，再用去离子水清洗，将凝胶颗粒以0.5g/ml的比例悬浮在含有0.3mol/l的kcl和85mmol/l 1,6-二氨基己烷的0.5mmol/l磷酸缓冲液中，冰上孵育10min，再加入25％的戊二醛，150rpm，30min，用0.3mol/l的kcl洗涤凝胶颗粒，最后用去离子水清洗，在4℃保存备用。

5、更进一步，作为优选的实施方式，蔗糖和甘油混合后，添加蔗糖磷酸化酶的凝胶颗粒，在35℃，200rpm反应48h，获得含有甘油葡糖苷的溶液。

6、本发明的技术方案之二在于提供甘油葡糖苷的在制备预防和/或治疗肝损伤产品中的应用，所述的肝损伤是由非酒精性脂肪肝引起。

7、作为优先的实施方式之一，所述的应用目的为调节甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白胆固醇至少一种含量。

8、作为优先的实施方式之一，所述的产品为包含甘油葡糖苷的食品、保健或药物。

9、本发明与现有技术相比的有益效果：

10、本发明提供了甘油葡糖苷在制备预防和/或治疗非酒精性脂肪肝造成的肝损伤产品中的应用，本发明发现甘油葡糖苷能够改善ffa诱导的非酒精性脂肪肝细胞模型脂质沉积，对ffa诱导的肝细胞损伤具有抵抗作用，可以改善hepg2细胞的脂肪变性，其对hepg2细胞的影响呈剂量依赖，浓度越高对细胞增殖的抑制越大。

技术特征：

1.一种甘油葡糖苷的制备方法，其特征在于，所述方法是由蔗糖磷酸化酶催化蔗糖和甘油生成。

2.根据权利要求1所述的一种甘油葡糖苷的制备方法，其特征在于，蔗糖磷酸化酶重组菌使用κ-卡拉胶固定化；具体的固定化方法：将κ-卡拉胶溶解在预热的0.9％nacl溶液中，κ-卡拉胶的浓度2％(w/v)；将含有蔗糖磷酸化酶的重组大肠杆菌bl21/pet24a-suc75290的湿细胞在0.9％nacl中重悬，配制0.12mg/ml的菌悬液，并将其与κ-卡拉胶溶液以2:3的体积比混合，将混合液放在冰上15min固化，得到的凝胶在0.3mol/l的kcl溶液中浸泡，切成小块，再用去离子水清洗，将凝胶颗粒以0.5g/ml的比例悬浮在含有0.3mol/l的kcl和85mmol/l 1,6-二氨基己烷的0.5mmol/l磷酸缓冲液中，冰上孵育10min，再加入25％的戊二醛，150rpm，30min，用0.3mol/l的kcl洗涤凝胶颗粒，最后用去离子水清洗，在4℃保存备用。

3.根据权利要求2所述的一种甘油葡糖苷的制备方法，其特征在于，蔗糖和甘油混合后，添加蔗糖磷酸化酶的凝胶颗粒，在35℃，200rpm反应48h，获得含有甘油葡糖苷的溶液。

4.甘油葡糖苷的在制备预防和/或治疗肝损伤产品中的应用，所述的肝损伤是由非酒精性脂肪肝引起。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的应用目的为调节甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白胆固醇至少一种含量。

6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的产品为包含甘油葡糖苷的食品、保健或药物。

技术总结本发明涉及2‑αGG的制备及其在制备预防和/或治疗肝损伤产品中的应用，属于生物医药领域，甘油葡萄糖苷(2‑αGG)的制备是由蔗糖磷酸化酶催化蔗糖和甘油生成。蔗糖磷酸化酶通过与κ‑卡拉胶固定化后使用，本发明还发现了2‑αGG的新功能，能够在制备预防和/或治疗肝损伤产品中的应用，2‑αGG能够改善FFA诱导的非酒精性脂肪肝细胞模型脂质沉积，对FFA诱导的肝细胞损伤具有抵抗作用，可以改善HepG2细胞的脂肪变性。技术研发人员：郝建华,孙晶晶,王伟,江承程,孙孟筱受保护的技术使用者：中国水产科学研究院黄海水产研究所技术研发日：技术公布日：2024/8/20