一种防风快速繁殖培养基、方法及其应用

本发明属于植物组织培养，尤其涉及一种防风快速繁殖培养基、方法及其应用。

背景技术：

1、伞形科植物防风作为中药常用的药材，其质量优劣关系到临床医学的用药效果以及中药产业的发展，对中药现代化、国际化进程具有一定意义。目前针对防风的研究较为深入，且相关研究发现防风中主要含有多糖类、微量元素、有机酸等化学成分，这些化学成分在人体免疫调节过程中发挥重要作用。植物组织培养技术可达到快速繁殖，使其不受自然生长的限制，进而实现品种改良与植物脱毒等目标。研究发现防风植物组织培养通常使用的外植体为根部和茎部，培养基的原料配比使其在诱导分化上有所差异。相关报道发现，当前防风植物存在生根率和移栽存活率低等一系列问题。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明的目的在于提供一种高出愈率、出苗率、生根率以及移栽成活率的防风快速繁殖培养基。

2、本发明的另一目的在于提供一种高出愈率、出苗率、生根率以及移栽成活率的防风快速繁殖方法。

3、为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：

4、本发明提供了一种防风快速繁殖培养基，包括诱导愈伤组织培养基、继代培养基和生根培养基，所述诱导愈伤组织培养基以ms培养基为基础培养基，还包括以下质量浓度组分：荼乙酸（naa）0.2~0.4mg/l、6-苄氨基嘌呤（6-ba）0.4~0.6mg/l、吲哚丁酸（iba）0.2~0.4 mg/l、蔗糖30~32g/l和琼脂7.0~7.2g/l，所述诱导愈伤组织培养基的ph为6.0-6.2。

5、在本发明中，所述诱导愈伤组织培养基以ms培养基为基础培养基，优选的还包括以下质量浓度组分：naa 0.25~0.35mg/l、6-ba 0.45~0.55mg/l、iba 0.25~0.35 mg/l、蔗糖30g/l和琼脂7.2g/l，所述诱导愈伤组织培养基的ph为6.0-6.2。

6、在本发明中，所述继代培养基以ms培养基为基础培养基，优选的还包括以下质量浓度组分：naa 0.2~0.4mg/l、6-ba 0.4~0.6mg/l、iba 0.2~0.4 mg/l、蔗糖30~32g/l和琼脂7.0~7.2g/l，所述继代培养基的ph为6.0-6.2，更优选的还包括以下质量浓度组分：naa0.25~0.35mg/l、6-ba 0.45~0.55mg/l、iba 0.25~0.35 mg/l、蔗糖30g/l和琼脂7.2g/l，所述继代培养基的ph为6.0-6.2。在本发明中，所述生根培养基以1/2 ms培养基为基础培养基，优选的还包括以下质量浓度组分：naa 0.4~0.6mg/l、iba 0.4~0.6mg/l、蔗糖30~32g/l和琼脂7.0~7.2g/l，所述生根培养基的ph为6.0-6.2，更优选的还包括以下质量浓度组分：naa 0.45~0.55mg/l、iba 0.45~0.55mg/l、蔗糖30g/l和琼脂7.2g/l，所述生根培养基的ph为6.0-6.2。本发明对于上述各培养基中的基础培养基以及各组分的具体来源没有特殊限定。

7、本发明还提供了上述防风快速繁殖培养基在防风快速繁殖中的应用。

8、本发明还提供了基于上述防风快速繁殖培养基的防风快速繁殖的方法，包括以下步骤：以防风叶片为外植体，接种至所述诱导愈伤组织培养基中，培养获得愈伤组织；将愈伤组织接种至所述继代培养基中，培养获得再生苗；将再生苗接种至所述生根培养基上，培养获得生根苗。

9、在本发明中，所述防风叶片的获得方法优选为：将防风种子播撒在营养土内，成株后取叶片清洗消毒，所述清洗消毒的方式优选为将防风叶片置于流水下冲洗30min-1h，再置于超净台上，灭菌后浸泡在75%乙醇溶液3min，用无菌水冲洗3-5次，再加入浓度1%的次氯酸钠溶液浸泡5min，结束后用无菌水冲洗5-6次。

10、在本发明中，所述培养的条件优选为：白天温度25℃，夜晚温度15℃，相对湿度60%，光照强度为600μmol/（m2.s）。所述培养获得愈伤组织的光/暗优选为16h/8h，培养获得再生苗的光/暗优选为14h/10h，培养获得生根苗的光/暗优选为14h/10h。在本发明培养获得再生苗的过程中，记录不同继代周期对愈伤组织增殖状况的影响，根据其生长情况可以重复继代2-3次，每20d继代一次。

11、在本发明防风快速繁殖的方法中，优选的还包括将生根苗移栽至营养土中，获得移栽苗的步骤。本发明对于营养土的具体来源没有特殊限定。

12、本发明的有益效果：

13、采用本发明的防风快速繁殖培养基，能够大幅提高防风组织培养的出愈率、出苗率、生根率以及移栽成活率，使组织培养过程中出愈率达到94.5%以上、出苗率达到83.5%以上、生根率达到90%以上、生根苗移栽成活率（指的是将生根苗移栽至营养土中移栽苗的成活率）达到100%。

14、本发明以防风叶片为外植体材料，再结合本发明提供的防风快速繁殖培养基，成功建立起中药防风组织培养高效的再生体系，使其出愈率、出苗率、生根率以及移栽成活率均显著升高。对中药防风种质资源保护具有重要意义，同时有利于中药防风再生体系的推广与应用。

技术特征：

1.一种防风快速繁殖培养基，其特征在于，包括诱导愈伤组织培养基、继代培养基和生根培养基，所述诱导愈伤组织培养基以ms培养基为基础培养基，还包括以下质量浓度组分：naa 0.2~0.4mg/l、6-ba 0.4~0.6mg/l、iba 0.2~0.4 mg/l、蔗糖30~32g/l和琼脂7.0~7.2g/l，所述诱导愈伤组织培养基的ph为6.0-6.2。

2.根据权利要求1所述的防风快速繁殖培养基，其特征在于，所述继代培养基以ms培养基为基础培养基，还包括以下质量浓度组分：naa 0.2~0.4mg/l、6-ba 0.4~0.6mg/l、iba0.2~0.4 mg/l、蔗糖30~32g/l和琼脂7.0~7.2g/l，所述继代培养基的ph为6.0-6.2。

3.根据权利要求1所述的防风快速繁殖培养基，其特征在于，所述生根培养基以1/2 ms培养基为基础培养基，还包括以下质量浓度组分：naa 0.4~0.6mg/l、iba 0.4~0.6mg/l、蔗糖30~32g/l和琼脂7.0~7.2g/l，所述生根培养基的ph为6.0-6.2。

4.权利要求1-3任意一项所述防风快速繁殖培养基在防风快速繁殖中的应用。

5.一种基于权利要求1-3任意一项所述防风快速繁殖培养基的防风快速繁殖的方法，其特征在于，包括以下步骤：以防风叶片为外植体，接种至所述诱导愈伤组织培养基中，培养获得愈伤组织；将愈伤组织接种至所述继代培养基中，培养获得再生苗；将再生苗接种至所述生根培养基上，培养获得生根苗。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述培养的条件为：白天温度25℃，夜晚温度15℃，相对湿度60%，光照强度为600μmol/（m2.s）。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，培养获得愈伤组织的光/暗为16h/8h，培养获得再生苗的光/暗为14h/10h，培养获得生根苗的光/暗为14h/10h。

8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，还包括如下步骤：将生根苗移栽至营养土中，获得移栽苗。

9.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述防风叶片的获得方法为：将防风种子播撒在营养土内，成株后取叶片清洗消毒。

技术总结本发明提供了一种防风快速繁殖培养基、方法及其应用，属于植物组织培养技术领域。本发明提供的防风快速繁殖培养基，包括诱导愈伤组织培养基、继代培养基和生根培养基，所述诱导愈伤组织培养基以MS培养基为基础培养基，还包括以下质量浓度组分：NAA 0.2~0.4mg/L、6‑BA 0.4~0.6mg/L、IBA 0.2~0.4 mg/L、蔗糖30~32g/L和琼脂7.0~7.2g/L。采用本发明的防风快速繁殖培养基，能够大幅提高防风组织培养的出愈率、出苗率、生根率以及移栽成活率，使组织培养过程中出愈率达到94.5%以上、出苗率达到83.5%以上、生根率达到90%以上、生根苗移栽成活率达到100%。技术研发人员：陈阳,金一锋,迟迅,于浩然,王琦,尤学受保护的技术使用者：齐齐哈尔大学技术研发日：技术公布日：2024/8/20